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国家自然科学基金(30901066)

作品数:4 被引量:17H指数:2
相关作者:王潇刘秉春崔新洁胡庆亮陶琳更多>>
相关机构:内蒙古大学更多>>
发文基金:内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域:农业科学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇农业科学

主题

  • 3篇乳腺
  • 3篇乳腺上皮
  • 3篇乳腺上皮细胞
  • 3篇牛乳
  • 3篇牛乳腺上皮细...
  • 2篇上皮
  • 2篇上皮细胞
  • 2篇葡萄球菌
  • 2篇球菌
  • 2篇细胞
  • 2篇腺上皮
  • 2篇腺上皮细胞
  • 2篇金黄色葡萄球...
  • 2篇黄色葡萄球菌
  • 1篇蛋白
  • 1篇凋亡
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇乳腺炎
  • 1篇乳汁

机构

  • 4篇内蒙古大学

作者

  • 4篇王潇
  • 3篇胡庆亮
  • 3篇崔新洁
  • 3篇刘秉春
  • 2篇修磊
  • 2篇陶琳
  • 2篇王婷
  • 1篇陈媛
  • 1篇李奕平
  • 1篇李凌娟
  • 1篇陶林

传媒

  • 1篇生物技术通报
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇西北农林科技...
  • 1篇华南农业大学...

年份

  • 1篇2014
  • 3篇2013
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
金黄色葡萄球菌诱导牛原代乳腺上皮细胞的凋亡被引量:8
2013年
【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结果显示分离培养的牛乳腺上皮细胞表达角蛋白8;金黄色葡萄球菌感染牛乳腺上皮细胞3 h后,可诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,表现为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型凋亡特征;Annexin V/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,差异极显著(P﹤0.01);与对照组相比,感染组细胞caspase3及caspase 8表达量明显增高。【结论】金黄色葡萄球菌可以诱导牛原代乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征和生化特性,凋亡通路可能涉及caspase 3和caspase 8参与的外源性凋亡途径。
崔新洁胡庆亮李奕平陶琳修磊刘秉春陈媛王潇
关键词:金黄色葡萄球菌牛乳腺上皮细胞细胞凋亡
牛奶中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定被引量:7
2013年
旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为乳腺上皮细胞。离心收集到的细胞原代培养3 d后形成多个单克隆,细胞呈典型的铺路石状,同时伴随少量的吞噬细胞,继续培养至单克隆汇合时,细胞表层产生大小不等的乳滴,吞噬细胞大多转移到乳滴中,传代后,得到纯净的乳腺上皮细胞,吞噬细胞随传代而消失;细胞生长曲线呈"S"型,RT-PCR法扩增到了乳腺上皮细胞的骨架蛋白8、18以及β-酪蛋白,细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8,核型为29对端着丝粒常染色体,1对近端着丝粒性染色体。通过以上试验证明,乳汁分离法可以培养纯净的、具有正常分裂增生能力的牛乳腺上皮细胞,建立了乳腺上皮细胞的体外培养模型。
崔新洁王婷刘秉春陶林王潇
关键词:乳汁牛乳腺上皮细胞细胞骨架蛋白泌乳
金黄色葡萄球菌黏附素及其靶位疫苗的研究进展被引量:2
2013年
金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要病原体,因其具有细胞内定殖和对抗生素极易产生耐药性的特点,使得用抗生素治疗的效果越来越差,为此疫苗防治成为首选。黏附素在金黄色葡萄球菌致病过程中起着至关重要的作用,在金黄色葡萄球菌感染的早期,黏附素是最重要的致病因子,只有当金黄色葡萄球菌黏附到宿主细胞上,毒素和荚膜才能开始表达。因此阻断金黄色葡萄球菌感染的初始阶段,特别是阻止细菌黏附到细胞和定殖在黏膜表面,将是预防和治疗奶牛乳腺炎的最有效途径。因此近些年研究者致力于黏附素的结构及功能的研究,试图以黏附素为靶点设计金黄色葡萄球菌疫苗。本研究对近几年黏附素的种类和作用,以及其相关疫苗的研究进行了综述。
李凌娟胡庆亮王潇
关键词:金黄色葡萄球菌黏附素乳腺炎
牛白细胞介素-17真核表达载体的构建及在牛乳腺上皮细胞中的表达
2014年
【目的】在体外分离培养牛乳腺上皮原代细胞,并构建牛白细胞介素-17(bIL-17)基因真核表达质粒,观察重组质粒在牛乳腺上皮细胞的表达.【方法】提取牛脾脏细胞总RNA,通过RT-PCR扩增bIL-17,将bIL-17连入pMD19-T进行测序,测序成功后将bIL-17插入含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N3上,构建真核表达质粒pEGFP-N3-bIL-17.用脂质体法将pEGFP-N3-bIL-17质粒转染于牛乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达,RT-PCR检测bIL-17基因在细胞内的转录,定量ELISA检测bIL-17蛋白在细胞内的表达情况.【结果和结论】成功构建具有绿色荧光和新霉素抗性的双选择标记的牛白细胞介素-17真核表达载体,并可在牛乳腺上皮细胞成功表达.
王婷崔新洁刘秉春陶琳胡庆亮修磊王潇
关键词:牛乳腺上皮细胞转染
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