国家自然科学基金(81072122)
- 作品数：13 被引量：39H指数：4
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- ELISA定量检测宫颈组织中MMP-2表达的可行性分析被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨ELISA定量检测MMP-2表达的可行性,进一步明确MMP-2在宫颈组织中的表达及意义。方法:选取正常宫颈组织20例、高级别CIN组织25例和宫颈癌组织29例,采用ELISA法及传统免疫组化法对MMP-2进行定量及定位、半定量检测分析,比较两种方法的检测结果。结果:两种检测结果均显示,MMP-2在高级别CIN、宫颈癌、正常宫颈中均有表达,但表达水平具有统计学差异(P<0.05)。ELISA与免疫组化检测的MMP-2在3种组织中表达强度的变化一致。结论:ELISA可用于不同宫颈组织中MMP-2的定量检测。MMP-2可表达于正常宫颈基底层细胞及周围间质,MMP-2的分泌并不仅仅是恶性细胞的特性。
- 阚晓丽刘玉珍吕秀萍张友忠秦军伟
- 关键词：酶联免疫吸附试验基质金属蛋白酶
- 核仁素表达下调对宫颈癌细胞Hela生物学行为的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨核仁素表达下调对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的影响。方法实验分4组:3个靶向人核仁素基因的实验组(siN1组、siN2组、siN3组)及1个阴性对照组(NC组)。体外化学合成各组siRNA并转染HeLa细胞;利用荧光实时定量RT-PCR法和Western blotting法分别从mRNA和蛋白水平检测核仁素基因的干扰效率,并筛选出干扰效率最高的片段;利用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测核仁素下调对HeLa细胞增殖活性的影响;利用流式细胞学Annexin V-FITC检测转染后HeLa细胞凋亡率的改变;Transwell实验检测转染后细胞侵袭能力的改变。结果与NC组相比,各实验组核仁素mRNA表达水平均下降(P<0.05);蛋白表达水平也相应下调(P<0.05)。成功筛选出最佳干扰片段siN2,用于后续实验。siN2组HeLa细胞生长速率明显受到抑制(P<0.05);流式细胞学Annexin V-FITC检测siN2组HeLa细胞凋亡率明显高于NC组(P<0.05);Transwell实验显示siN2组HeLa细胞侵袭能力减弱(P<0.05)。结论核仁素表达下调明显抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭能力,促进细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了理论依据。
- 刘洪丽张友忠吕昌帅丁佰娟王颉
- 关键词：HELA细胞小分子干扰核仁素
- 人正常宫颈上皮细胞的体外分离及细胞活性比较被引量：2
- 2014年
- 目的:在传统上皮细胞消化分离方法基础上加以比较,探求一种最佳宫颈上皮细胞的体外分离方法。方法:取10例新鲜的正常宫颈组织,将同一组织分成大小相同的3部分,采用3种不同的消化方法(胰蛋白酶消化法、Ⅰ型胶原酶消化法、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化法)获取正常宫颈上皮角质细胞悬液,采用罗丹明B(SRB)法测定其细胞活性,同时比较其贴壁率。结果:胰蛋白酶组、Ⅰ型胶原酶组、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化组的细胞活性分别为0.9335、0.9544、0.9438,两两比较差异显著(P<0.01);Ⅰ型胶原酶消化组的细胞贴壁率显著高于其他两组(P<0.01)。结论:Ⅰ型胶原酶消化法是一种最理想的分离宫颈上皮细胞的方法。
- 王雪银刘玉珍陈昭日张友忠王慧
- 关键词：原代培养宫颈上皮细胞细胞活性
- TMPyP4-PDT对人宫颈癌细胞的杀伤效应被引量：3
- 2012年
- 目的探讨端粒酶抑制剂四甲基吡啶卟啉光动力治疗(TMPyP4-PDT)对人宫颈癌细胞株HeLa的杀伤效应。方法细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK8)法检测TMPyP4-PDT对人宫颈癌细胞HeLa的抑制作用;光镜下观察细胞形态变化;Annexin-V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率;RT-PCR法测定原癌基因c-myc、人类染色体端粒酶基因hTERC的变化。结果在一定浓度范围内,TMPyP4-PDT对人宫颈癌HeLa细胞生长增殖的抑制作用和诱导凋亡作用随着浓度和光照能量的增加而增加。光镜下可观察到细胞坏死和凋亡样改变。RT-PCR法测定c-myc mRNA、hTERC mRNA的表达降低。结论 TMPyP4-PDT对人宫颈癌HeLa细胞有明显的杀伤作用,并在一定范围内呈光剂量和浓度剂量依赖性。其作用机制可能与降低c-myc、hTERC mRNA的表达量有关。
- 丁佰娟张友忠吕昌帅姜侃刘洪丽
- 关键词：HELA细胞
- 光动力疗法对子宫内膜癌Ishikawa细胞系细胞周期和凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨光动力疗法(PDT)对子宫内膜癌Ishikawa细胞系细胞周期及凋亡的影响。方法以四甲基吡啶卟啉(TMPy P)为光敏剂的PDT处理Ishikawa细胞,显微镜观察细胞形态;细胞计数试剂盒CCK-8检测细胞的存活率;流式细胞术检测细胞周期;使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测细胞的凋亡;蛋白免疫印迹法检测Bcl-2、NF-κB P65及磷酸化NF-κB P65的表达。结果 PDT可以改变Ishikawa细胞的形态,降低细胞存活率(P<0.05),并与光敏剂TMPy P的浓度和激光能量密度有关;PDT引起细胞S期阻滞(P<0.05),诱导Ishikawa细胞发生凋亡(P<0.05),降低Bcl-2蛋白的表达和NF-κB P65的磷酸化水平(P<0.05)。结论 PDT可能通过下调Bcl-2、NF-κB的活性引起Ishikawa细胞S期阻滞和细胞凋亡。
- 宗丽菊王颉刘洪丽冯进波张友忠
- 关键词：光动力疗法细胞周期
- 子宫切除联合阴道延长手术对Ⅰb1～Ⅰb2期宫颈癌患者婚姻质量的影响被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨子宫切除联合阴道延长手术对Ⅰb1-Ⅰb2期宫颈癌患者婚姻质量、生活质量及性生活的影响.方法 选择本院住院经宫腔细胞学及宫颈活组织病理学确诊的Ⅰb1-Ⅰb2期宫颈癌患者80例为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组40例,两组分别给予腹腔镜子宫切除联合阴道延长手术与单独腹腔镜子宫切除手术治疗.观察患者术中及术后差异.术后随访1年,采用OLSON婚姻质量问卷、性功能问卷（PISQ-12）评分,比较两组手术前后婚姻质量及性功能等的变化.结果 观察组患者手术时间及术后阴道长度长于对照组（P ＜0.05或P＜0.01）.术后两组患者情感、生理及总分均下降（P＜0.01）,对照组患者下降较观察组更显著（P＜0.01）.观察组婚姻满意度、夫妻交流、解决冲突方式、业余活动及性生活得分明显高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）.结论 腹腔镜下子宫切除联合阴道延长术既能有效延长患者的阴道长度,又能有效改善患者术后的性功能及婚姻质量,此方法优于单独腹腔镜治疗方法,值得临床推广。
- 陈红张友忠
- 关键词：婚姻
- TMPyP4-PDT对人卵巢癌A2780细胞的杀伤作用及其对MCM2和CA-Ⅸ mRNA表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:观察四-(N-甲基-4-吡啶基)卟啉(TMPyP4)对人卵巢癌A2780细胞的光动力学杀伤作用及其对微型染色体维持蛋白2(MCM2)和碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)mRNA表达水平的影响,阐明TMPyP4-PDT(光动力疗法)对人卵巢癌A2780细胞的杀伤作用机制。方法:体外培养人卵巢癌A2780细胞株,按不同处理因素分为空白对照组、单纯TMPyP4组、单纯PDT组和TMPyP4-PDT组。采用CCK-8法检测TMPyP4-PDT对A2780细胞株的增殖抑制作用。流式细胞术测定不同浓度TMPyP4对A2780细胞株凋亡的影响。光镜下观察各组细胞HE染色的形态学变化。实时荧光定量PCR法检测MCM2和CA-IX mRNA表达水平的变化。结果:与空白对照组比较,单纯TMPyP4组随着药物浓度的增加,细胞的增殖抑制率逐渐增加(P<0.05);单纯PDT组细胞增殖抑制率增加不明显(P>0.05);TMPyP4-PDT组细胞增殖抑制率随着药物浓度及激光能量密度的增加而增加(P<0.05)。流式细胞术检测,TMPyP4-PDT可诱导A2780细胞凋亡,在激光能量密度为4J.cm-2的条件下,3、6、15、30和60μmol.L-1 TMPyP4作用4h,A2780细胞凋亡率分别为(9.46±0.04)%、(17.7±0.3)%、(25.4±0.2)%、(30.2±0.2)%和(66.3±0.3)%。光镜下可观察到空白对照组及单纯PDT组贴壁细胞多,无核固缩及核碎裂样改变;单纯TMPyP4组及TMPyP4-PDT组贴壁细胞减少,出现核固缩、空泡及部分胞浆溶解样改变。实时荧光定量PCR法检测,在激光能量密度为4J.cm-2的条件下,3、6、15、30和60μmol.L-1TMPyP4作用4h,MCM2和CA-IX mRNA表达水平明显降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:TMPyP4-PDT对人卵巢癌A2780细胞有明显杀伤作用,其机制可能与负性调节MCM2和CA-Ⅸ的表达有关。
- 吕昌帅张友忠丁佰娟姜侃刘洪丽
- 关键词：A2780细胞光动力治疗
- 四甲基吡啶卟啉-光动力疗法对人宫颈永生化上皮H8细胞的作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨四甲基吡啶卟啉-光动力疗法(TMPy P4-PDT)对人宫颈永生化上皮H8细胞增殖和凋亡的影响。方法显微镜下观察TMPy P4-PDT后H8细胞形态学变化;采用细胞活力试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率;免疫细胞化学SABC法检测TMPy P4-PDT对H8细胞p16INK4a蛋白的表达变化;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)、p21蛋白的表达。结果 TMPy P4-PDT可抑制H8细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且在一定范围呈TMPy P4剂量依赖性;免疫细胞化学SABC法结果显示,TM Py P4-PDT可降低细胞p16INK4a蛋白的阳性率;Western blotting结果表明,TMPy P4-PDT下调hTERT的表达,上调p21的表达。结论 TM Py P4-PDT可抑制H8细胞的增殖,诱导H8细胞的凋亡,其作用机制可能与下调p16INK4a、hTERT及上调p21的表达有关。
- 宗丽菊张友忠王颉吴淑霞刘洪丽张璐
- 关键词：人端粒酶逆转录酶P21蛋白P16INK4A蛋白
- 慢病毒介导的hTERT-shRNA联合光动力治疗对宫颈癌细胞SiHa的影响被引量：2
- 2015年
- 目的探讨慢病毒介导的人端粒酶逆转录酶(hTERT)联合四甲基吡啶卟啉(TMPy P4)及光动力疗法对宫颈癌细胞Si Ha的影响。方法实验分4组:空白对照组、单纯基因治疗组、单纯光动力治疗组、联合治疗组。体外化学合成Lenti-hTERT-shRNA并转染Si Ha细胞,确定最适感染复数(MOI)值,成功稳定转染后给予浓度为7.5μmol/L的TM Py P4行光动力治疗。RT-PCR法检测hTERT、p53、HPV-16 E6、Caspase-8 mRNA的表达;免疫荧光检测hTERT蛋白的表达;细胞增殖及细胞毒性(CCK-8)检测各组中人宫颈癌细胞Si Ha的抑制作用;Annexin V-PE/7-AAD双染试剂盒检测各组细胞的凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力的改变。结果与空白对照组比较,其他3组hTERT、HPV-16 E6、Caspase-8 mRNA的表达水平均下降,p53mRNA的表达水平升高,hTERT蛋白表达水平相应下降,其中联合治疗组最明显(P<0.05);联合治疗组较其他组明显抑制Si Ha细胞的增殖(P<0.05);流式细胞学Annexin V-PE/7-AAD和Transwell实验检测结果显示,联合治疗组较单纯基因治疗组和单纯光动力治疗组的凋亡率明显升高,细胞侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论慢病毒介导的hTERT-shRNA联合光动力治疗明显抑制宫颈癌Si Ha细胞的增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。
- 王颉张友忠冯进波刘洪丽宗丽菊
- 关键词：SIHA细胞人端粒酶逆转录酶光动力治疗
- Establishment of a novel method for primary culture of normal human cervical keratinocytes被引量：7
- 2013年
- LIU Yu-zhenLU Xiu-pingPAN Zi-xuanZHANG WeiCHEN Zhao-riWANG HuiLIU HuaZHANG You-zhong
- 关键词：角质形成细胞无血清培养基人成纤维细胞
