湖南省科技厅科技计划项目(2007SK3033)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 乙肝病毒X基因转化人肝细胞裸鼠成瘤实验及其机制
- 2013年
- 目的在裸鼠体内证实乙肝病毒X基因（HBx）能否转化人肝细胞形成移植瘤；并研究裸鼠成瘤的可能机制。方法利用已成功构建的高表达HBx基因的pCMVX／QSG7701细胞株作为实验组、以表达空白质粒的pRcCMV2／QSG7701细胞株和QSG7701细胞株为对照组接种于裸鼠皮下，观察裸鼠能否成瘤。HE染色、显微镜检研究移植瘤的组织形态学特征。成瘤率的比较采用Fisher＇s精确检验。免疫组化方法研究的pCMYX／QSG77细胞、pRcCMV2／QSG7701细胞和QSG7701细胞的p53蛋白、C-Myc蛋白的表达情况。结果接种pCMVX／QSG7701细胞株的裸鼠在第2周开始出现移植瘤生长，周围器官和组织未发现转移灶。对照组至接种后第35天无移植瘤生长。HE染色证实移植瘤为肝细胞癌组织。pCMVX／QSG77细胞、pRcCMV2／QSG7701细胞和QSG7701细胞中均有突变型p53蛋白及c-Myc蛋白的表达。pCMVX／QSG7701细胞中突变型p53蛋白及C—Myc蛋白的表达量较pRcCMV2／QSG7701细胞、QSG7701细胞明显增高（P〈0．01）。结论HBVX基因表达可以直接导致肝细胞癌变。在蛋白水平证实HBx能上调pMVX／QSG7701细胞中p53和C—Myc的表达，并可能通过这一机制导致肝细胞癌变。
- 郑芳刘国珍
- 关键词：肝炎病毒乙型遗传学肝细胞肝细胞
- HBV X基因转化人肝细胞的实验研究被引量：2
- 2008年
- 选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMV X/QSG7701),并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照,用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布;用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测细胞中c-Myc表达;用光镜及电镜观察细胞形态学变化,进一步研究乙肝病毒(HBV)X基因对永生化非瘤性人肝细胞QSG7701的转化作用.研究发现,乙肝病毒X(HBX)蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆;c-Myc mRNA及c-Myc蛋白在3种细胞中均有表达,但转染了X基因的细胞中c-Myc的表达水平较其他两组明显升高(P<0.01);光镜和电镜下观察发现pCMV X/QSG细胞的胞核较大,核膜增厚,核仁肥大且增多,核/浆比例失调,可见少量多核巨细胞,pRc-CMV2/QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常,染色质分布均匀,胞核大小及形态正常.结果表明,HBVX基因成功转染了QSG7701细胞,HBV X蛋白主要分布于转染细胞的细胞膜和细胞浆中,HBX可能通过上调转染细胞中c-Myc蛋白的表达而使细胞具备恶性化生长的倾向.
- 吴传湘刘国珍李涛谭德明刘洪波
- 关键词：乙肝病毒X蛋白人肝细胞
- 乙型肝炎病毒X基因转化人肝细胞QSG7701的体外观察
- 2009年
- 目的观察HBVX基因多功能蛋白（HBx）的表达对QSG770l细胞生物学特征的影响及对其的转化作用。方法采用脂质体法分别将重组质粒pCMV／X及真核表达质粒pRc／CMV2稳定转染QSG7701细胞，分别获得pCMVX／QSG7701、pRcCMV2／QSG7701，设未转染的QSG7701细胞为对照组。Western印迹检测细胞中HBx、c-Myc及Bcl-2蛋白的表达，MTT比色法、流式细胞技术、软琼脂克隆形成率实验检测细胞的生物学活性。结果HBx高表达于pCMVX／QSG7701中。pCMVx／QSG7701中c—Myc蛋白的表达水平较其他两组高，Bcl-2蛋白在3组细胞中均有表达，但表达水平差异无统计学意义。在pCMVx／QSG7701、pRcCMV2／QSG7701及未转染的QSG77013组细胞中，pCMVX／QSG7701组S期细胞所占百分比较后两组明显增加[分别为（28．80±2．32）％、（15．50±2．64）％、（21．50±3．66）％，LSD0．05=3．95％，LSD0．01=5．47％，P〈0．01]，其G1期细胞所占百分比较后两组明显减少[分别为（62．30±3．85）％、（78．70±4．12）％、（78．10±4．45）％，LSD0．05=5．63％，I。SD0．01=7．79％，P〈0．01]，其凋亡率明显高于后两组[分别为（14．90±1．01）％、（8．91±0．48）％、（4．03±0．47）％，I．SD0．05=0．94％，LSD0．01=1．31％，P〈0．01]，其细胞株的倍增时间较后两组明显缩短（分别为14h，29h，38h），其软琼脂克隆形成率明显高于后两组[分别为（19．83±1．96）％，（1．76±0．03）％，（1．33±0．18）％，LSD0．05=1．53％，LSD0．01=2．11％，P〈0．01]。结论HBx能够在体外转化人源性非瘤性肝细胞QSG7701，使细胞具有恶性化生长的倾向。
- 李涛刘国珍谭德明吴传湘郑芳
- 关键词：基因转变肝细胞质粒
- 乙型肝炎病毒X蛋白对DNA甲基转移酶3A/3B表达的影响
- 2011年
- 目的观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对QSG7701细胞中DNA甲基转移酶(DNMT)3A/3B表达的影响。方法本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞,经含G418的选择性培养基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆(pcDNA-X/QSG7701)及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆(pcDNA3.0/QSG7701)。采用RT-PCR、Westernblot分别检测转染细胞中HBxmRNA和HBx蛋白的表达。Real-timePCR检测3种细胞DNMT3A/3BmRNA的表达情况。免疫组织化学法检测3种细胞DNMT3A/3B蛋白的表达情况。结果RT-PCR、Westernblot检测结果显示pcDNA-X/QSG7701细胞中有HBxmRNA及HBx蛋白的表达。Real-timePCR结果显示pcDNA-X/QSG7701中DNMT3A/3BmRNA表达水平显著高于pcDNA3.0/QSG7701及未转染的细胞QSG7701(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示pcDNA-X/QSG7701细胞中DNMT3A/3B蛋白表达水平显著高于pcDNA3.0/QSG7701及QSG7701细胞(P<0.05)。结论稳定转染HBV-X基因的人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701中DNMT3A/3BmRNA和蛋白的表达水平均显著升高,提示HBV-X基因在mRNA及蛋白水平能上调转染细胞中DNMT3A/3B的表达,而细胞中DNMT3A/3B表达的增加是否能进一步影响癌基因、抑癌基因的表达水平,从而导致细胞癌变,尚有待进一步研究。
- 宋晓玲李艳艳谭德明刘国珍
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白乙型肝炎病毒
- 乙型肝炎病毒X基因转染人肝细胞致裸鼠的成瘤实验
- 2009年
- 目的拟在裸鼠体内证实HBVX基因能否转化人肝细胞形成移植瘤。方法利用高表达HBx基因的pCMVX／QSG7701细胞株作为实验组，以表达空白质粒的pRcCMV2／QSG7701细胞株和QSG7701细胞株为对照组接种于裸鼠皮下，观察裸鼠能否成瘤。HE染色、显微镜检查研究移植瘤的组织形态学特征。成瘤率的比较采用Fisher’s精确检验。结果接种pCMVX／QSG7701细胞株的所有6只裸鼠在第2周开始均出现移植瘤生长，周围器官和组织未发现转移灶。对照组至接种后第35天无移植瘤生长（x^2=16．505，P〈0．01）。HE染色证实移植瘤为肝细胞癌组织。结论HBVX基因表达可以直接导致肝细胞癌变。
- 郑芳刘国珍李涛谭德明
- 关键词：移植瘤
