湖南省自然科学基金(11JJ4076)
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
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- 梅毒螺旋体 Tp0844重组蛋白的表达、纯化及免疫反应性研究
- 2015年
- 目的：克隆、表达梅毒螺旋体重组蛋白 Tp0844，纯化表达产物并进行免疫反应性分析，筛选与宿主具有高反应性的 Tp 主要蛋白。方法通过生物信息学分析，获取 Tp0844基因序列，构建原核载体进行诱导表达；Ni-NTA 亲合层析柱纯化重组蛋白，Western 印迹法检测其重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况。结果成功构建 PET-30a（＋）-Tp0844原核表达重组体，经诱导表达后发现该重组体可高表达出可溶性的重组蛋白，经亲和层析纯化后获得了相对分子质量为43000的重组蛋白；以梅毒 IgG 抗体阴、阳性血清为一抗，采用 Western 印迹法检测发现，Tp0844重组蛋白与梅毒阳性血清能发生明显特异反应，而与健康阴性血清未出现反应条带。结论可溶性重组表达的 Tp0844蛋白具有较好的免疫反应性，可作为梅毒发病机制研究的候选抗原。
- 刘双全刘琼
- 关键词：苍白密螺旋体重组蛋白质类免疫学免疫反应性
- 梅毒螺旋体金属蛋白酶水解纤维蛋白原的活性研究
- 2015年
- 目的研究梅毒螺旋体金属蛋白酶Tp0751对细胞外基质纤维蛋白原的水解能力,为深入研究TP的致病机制提供实验依据。方法采用两点法构建H198A突变型及H202A突变型Tp0751基因,分别构建野生型和突变型Tp0751原核载体进行诱导表达;体外实验检测Tp0751野生型Tp0751蛋白、H198A Tp0751突变型蛋白、H202ATp0751突变型蛋白对纤维蛋白原的降解活性。结果成功表达并纯化了野生型Tp0751蛋白、H198A Tp0751突变体蛋白、H202A Tp0751突变体蛋白,各蛋白相对分子量大小约为26k D;纤维蛋白原在与野生型Tp0751蛋白作用约24h后被完全水解;与H198A Tp0751突变体蛋白作用约24 h后部分水解,尚有部分未被降解;与H202A Tp0751突变体蛋白作用约24h后几乎不被水解。结论野生型Tp0751蛋白具有水解纤维蛋白原的作用;Tp0751蛋白水解纤维蛋白原的活性可能与金属蛋白酶HEXXH域相关,影响Tp0751蛋白对纤维蛋白原的降解的活性位点可能是202位的H而不是198位的H。
- 刘双全
- 关键词：梅毒螺旋体金属蛋白酶水解活性
- 外排泵adeFGH基因与鲍氏不动杆菌多药耐药的关系研究
- 2014年
- 目的探讨临床分离鲍氏不动杆菌主动外排基因adeFGH的表达与其多药耐药的关系。方法对2012年1-2月临床分离的60株鲍氏不动杆菌进行回顾性分析,采用BD CRYSTAL细菌鉴定系统进行细菌检测,采用法国生物梅里埃公司ATB药敏系统进行药物敏感试验,PCR检测外排泵基因adeFGH的分布和表达水平。结果痰液及伤口分泌物中分别检出鲍氏不动杆菌51及8株,分别占85.0%、13.3%;科室分布主要为ICU、神经外科、呼吸内科、烧伤科,分别占43.3%、28.3%、10.0%、10.0%;60株鲍氏不动杆菌按药敏结果分为A组全耐药共31株,B组为氨基糖苷类和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶敏感、其他抗菌药物耐药共13株,C组为耐阿莫西林和一、二代头孢菌素类抗菌药物、其他抗菌药物敏感,共16株;A组均检出外排泵基因adeFGH,B组均检出外排泵基因adeFGH,C组检出外排泵基因adeG16株、adeH3株,未检出adeF。结论外排泵基因adeFGH与鲍氏不动杆菌对氨基糖苷类和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药无关,外排泵基因adeG与鲍氏不动杆菌对青霉素类和一、二代头孢菌素类抗菌药物耐药有关。
- 刘双全张秋桂张凯华
- 关键词：鲍氏不动杆菌多药耐药主动外排泵
- 梅毒螺旋体免疫相关膜蛋白的研究进展
- 2014年
- 梅毒是一种由梅毒螺旋体(Treponema.pallidum,Tp)感染所引起的慢性性传播疾病。近年来,其发病率居高不下,引起了全社会广泛的关注。随着分子生物技术的发展和人们的不断探究发现,膜蛋白可能在Tp致病过程中与宿主黏附、宿主免疫炎症反应等方面起着非常重要的作用,可能为Tp的主要致病因子。因此,对Tp膜蛋白的研究是认识其对宿主的致病性和进行致病机制研究的关键,就Tp的几种主要免疫相关膜蛋白的研究进展作了简要综述。
- 刘炀刘双全
- 关键词：梅毒螺旋体膜蛋白免疫
- 梅毒螺旋体Gpd-IL-2融合基因原核表达重组体的构建、表达及免疫活性的初步研究
- 2012年
- 目的以梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白基因Gpd及细胞因子佐剂IL-2为目的基因,融合构建原核表达重组体pET28a/Gpd-IL-2,表达鉴定并进行免疫活性的初步分析,为进一步开展Tp疫苗动物实验打下基础。方法定向克隆构建原核表达重组体pET28a/Gpd-IL-2进行诱导表达;Ni亲和层析纯化重组融合蛋白后,Western blot检测其免疫反应性;免疫新西兰兔评价重组蛋白的免疫原性。结果成功构建原核表达重组体pET28a/Gpd-IL-2,表达鉴定及纯化获得相对分子量约为60 kDa的融合蛋白;Western blot检测其能与梅毒阳性血清发生特异性结合,说明两融合基因之间的表达相互没受到太大影响;纯化的Gpd-IL-2重组蛋白免疫新西兰兔能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA检测免疫血清中特异性抗体滴度在1∶6 400以上。结论 Gpd-IL-2融合基因重组蛋白具有良好的免疫活性,这为进一步开展Tp疫苗动物实验条件的优化打下一定的基础。
- 赵飞骏张晓红余坚刘双全曾铁兵张跃军吴移谋
- 关键词：梅毒螺旋体GPDIL-2免疫原性
- 梅毒螺旋体TP0993重组蛋白的表达、纯化及免疫活性分析被引量：4
- 2013年
- 目的探讨梅毒螺旋体重组蛋白TP0993在梅毒血清学诊断中的应用价值。方法通过生物信息学分析，获取TP0993基因序列，构建原核载体进行诱导表达；Ni—NTA亲合层析柱纯化重组蛋白，Western印迹检测其免疫抗原性，用重组蛋白直接注射免疫新西兰家兔，评价其免疫原性。用纯化的TP0993重组蛋白包被微孔板，建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，检测临床梅毒患者血清和健康体检者正常血清，同时与梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）进行比较，根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况，评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果成功构建PET-28a（＋）-0993原核表达载体，经表达、纯化后获得相对分子质量约为34000的重组蛋白；Western印迹检测显示该重组蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应；利用纯化的TP0993重组蛋白免疫新西兰兔，能诱导新西兰兔产生特异性免疫应答。以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法，对TPPA法检测的480份临床血清进行检测，与TPPA法比较ELISA法的灵敏度为88．3％，特异度为85．8％，ELISA法与TPPA法符合率为86．5％。结论重组表达的TP0993蛋白具有较好的免疫活性，可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一。
- 谢小平刘双全张秋桂吴移谋
- 关键词：密螺旋体苍白重组蛋白质类免疫活性
- 梅毒螺旋体膜蛋白研究进展被引量：1
- 2013年
- 梅毒螺旋体苍白亚种(Tp)引起的梅毒是一种严重危害人类健康的慢性性传播性疾病,其发病具有多阶段、进行性的特点。由于Tp尚不能体外培养,抗原获取困难,其致病机制研究尚不清楚。随着Tp全基因序列的解析,重组Tp膜蛋白的成功表达及蛋白功能结构日益明确,为Tp发病机制的研究及疫苗的研制奠定了良好的基础。对于Tp主要外膜蛋白的结构、功能研究进展进行了综述。
- 刘琼刘双全张秋桂
- 关键词：梅毒螺旋体膜蛋白致病机制疫苗
