国家自然科学基金(30130070)
- 作品数：33 被引量：113H指数：6
- 相关作者：董小平韩俊张宝云高晨高建梅更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心西安交通大学中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 羊瘙痒病小鼠适应株ME7可突破种属屏障颅内感染金黄地鼠被引量：1
- 2003年
- 目的 羊瘙痒病感染因子在哺乳动物种属间的传播认为受种属屏障的限制 ,研究羊瘙痒病小鼠适应株ME7在仓鼠中的发病特征。方法 ME7毒株颅内接种至金黄地鼠 ,观测疾病发生的潜伏期、临床病程和主要症状 ;Westernblot和电子显微镜动态观测脑组织中PrPSc和痒病相关纤维的出现和分子特征。结果 与以往报道的金黄地鼠适应株 2 6 3K和小鼠适应株 139A不同 ,在接种后 4 6 0～ 5 30d后 ,感染动物出现明显的症状 ,主要为消瘦、嗜睡、运动迟缓 ;感染动物脑组织中存在有羊瘙痒病相关纤维和PrP -res;羊瘙痒病相关纤维和PrP -res的出现明显早于临床发病 ;比较三种毒株在仓鼠和小鼠脑组织中出现的PrP -res发现虽然在电泳移动位置上无差异 ,但ME7和 139A的无糖分子比例明显降低。结论 小鼠适应株ME7可突破种属屏障感染金黄地鼠 ;不同毒株在潜伏期、主要临床症状和临床病程等方面有明显差异 ;PrP -res的形成不仅受接种毒株的影响 。
- 张瑾张宝云高建梅高晨周晓勃刘勇董小平
- 关键词：羊瘙痒病小鼠颅内感染
- 微管相关蛋白tau与朊蛋白的相互作用被引量：6
- 2006年
- 微管相关蛋白tau参与了许多神经退行性疾病的发生, 其中包括一些人类可传播性海绵状脑病. 为了探讨tau与朊蛋白（PrP）之间可能存在的关系, 首先通过GST pull-down和免疫共沉淀等技术发现重组tau蛋白可通过微管结合区与来源于正常叙利亚仓鼠脑组织中的正常细胞膜朊蛋白（PrP^C）和羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织的异常朊蛋白（PrP^Sc）相结合. 利用免疫共沉淀实验发现在正常和羊瘙痒因子感染的仓鼠脑组织中存在tau蛋白与PrP^C和PrP^Sc的相互作用, 并且利用激光共聚焦方法检测到PrP和tau蛋白在CHO细胞内具有共定位的关系. 为了确定PrP与tau蛋白相互作用的部位, 构建了不同区域的PrP片段, 从而证明PrP与tau蛋白相互作用的区域位于PrP的N端序列（23～91 aa）. PrP与tau蛋白分子间相互作用的直接实验证据提示tau蛋白可能参与PrP的正常生理功能以及朊病毒病的病理过程.
- 韩俊张瑾姚海兰王小凡李锋高晨周伟张宝云董小平
- 关键词：朊蛋白蛋白相互作用
- Doppel(叠朊蛋白)与Prion疾病
- 2004年
- Doppel是近年发现的朊蛋白(PrP)类似蛋白,一级结构与PrPcC端的2/3有25％的同源性。一些PrP基因敲除的转基因小鼠由于Doppel高表达,引起神经细胞变性导致小鼠发生共济失调,从而推测Doppel可能与PrP一样在Prion疾病中发挥重要作用。
- 肖新莉刘勇董小平
- 关键词：DOPPEL转基因小鼠
- 超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrP^(Sc)聚集状态的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrPSc聚集状态的影响 ,寻找产生PrPSc低聚体的条件。方法 裂解液制备脑组织提取物 ,用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物 ;以蛋白酶消化后的Westernblot方法和图象分析系统观测PrPSc蛋白的分布和聚集状态。结果 适当的超声处理 (15s共 30次 )可增加脑组织匀浆上清中PrPSc含量 1 2 9～ 1 5 8倍 ;同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子 2 6 3K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量 ,而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大 ;对经常规高速离心获得的PrPSc的超声处理显示约 90 %的PrPSc存在于离心上清液中。结论 对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrPSc 的提取量 ,利于实验室检测。适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrPSc聚集物 ,产生小的相对分子质量的PrPSc产物。
- 周晓勃高建梅高晨张宝云袁育康董小平
- 关键词：超声处理瘙痒病脑组织
- 中国不同民族人群中PrP蛋白基因第129位氨基酸多态性分析被引量：22
- 2002年
- 目的 研究人类PrP基因 (PRNP)第 1 2 9位氨基酸多态性在中国汉族及维吾尔族人群中的分布。方法 从抽样人群外周血中提取白细胞DNA ,进行聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP) ,使用SASforWindows 6 1 2对结果进行分析。结果 83例汉族人群 1 2 9Met基因频率为 97 0 % ,1 2 9Val为 3 0 % ;35例维吾尔族人群 1 2 9Met基因频率为 91 4% ,1 2 9Val为 8 6 %。分别比较不同人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布情况 ,结果显示汉族人群和维吾尔族人群 (P =0 0 4 90 )、汉族人群和高加索人群 (P =0 0 0 0 5)、维吾尔族人群和高加索人群间 (P =0 0 0 1 0 )差异有显著性 ,而汉族人群与大和民族人群间差异无显著性 (P =0 50 4 0 )。结论 中国汉族人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布与大和民族人群相似 。
- 侯星生高晨张宝云周伟董小平刘红
- 关键词：朊病毒多态现象遗传学
- 羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后半数致死量(LD_(50))的测定被引量：9
- 2006年
- 目的测定羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后的LD50。方法将感染羊瘙痒因子263K的仓鼠脑组织用生理盐水制成10%(w/v)脑组织匀浆,梯度稀释后感染仓鼠,观察仓鼠的发病情况。以Reed-Muench公式计算LD50,用West-ern blot方法检测观察期结束后发病及仍存活的仓鼠脑组织、脾组织中抵抗蛋白酶K的PrPSc。结果当颅内接种稀释度由低到高变化时,仓鼠发病的潜伏期及病程同时也由短到长发生变化。发病仓鼠脑组织中可以检测到PrPSc,但是PrPSc的量在不同的组之间无太大差别。观察期结束后,仍存活的仓鼠脑组织中未检测到具有PK抗性的PrP信号。结论本实验室保存的羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠的LD50为9.2-log10LD50i.c.units/0.001g brain,即当对仓鼠颅内接种10μl羊瘙痒因子263K的10-9.2稀释液时,50%的仓鼠会死亡。
- 石琦张宝云高晨韩俊高永军周玉玲董小平
- 关键词：半数致死量
- 脂筏与感染性疾病被引量：4
- 2006年
- 脂筏是生物膜中含有特殊脂质和蛋白质的微区,不仅是跨膜信号转导等多种生命活动的重要参与者,而且在感染性疾病的发生和发展中扮演了重要的角色。脂筏是多种病原体进入宿主细胞的位点,支持病毒粒子的组装和出芽,其信号转导功能一方面可以启动宿主细胞的保护性免疫应答,另一方面也被病原体利用,以利于病原体的传播和疾病发生。此外,脂筏在朊蛋白感染、HCV基因组复制、多种细菌毒素作用以及维持疟原虫的胞内寄生生活等方面也都有重要作用。脂筏在感染性疾病中的重要作用提示,它很有可能成为扭转这些疾病发生和进程以及治疗这些疾病的重要入手点。
- 华方圆许彩民潘华珍
- 关键词：脂筏感染性疾病胆固醇
- 亚硒酸钠诱导白血病NB4细胞凋亡的蛋白质组学初步分析
- ＜正＞ 目的:研究亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡蛋白质组的变化。本研究工作是在本课题组前期应用基因芯片分析亚硒酸钠诱白血病NB4细胞调亡工作的基础上,发现有34个差异基因改变。这些差异基因主要是细胞周期蛋白,线立体调亡信号通...
- 董华天翼王恒樑许彩民
- 文献传递
- 帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备被引量：1
- 2006年
- 目的利用分子克隆技术在原核细胞中表达α-共核蛋白(SNCP),并制备兔多克隆抗体。方法从人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA。利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列,测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上,在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白。融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备特异性抗血清,并对该抗体进行检测。结果琼脂糖凝胶电泳显示获得的SNCP cD-NA序列为420 bp。SDS-PAGE和W estern b lot分析,表达的融合蛋白呈可溶性,相对分子质量约为45 000。以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1:32000,并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应。结论人SNCP可在原核细胞中可溶性表达。用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清,为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础。
- 黄银霞韩俊张晓光姚海兰王小凡张瑾张宝云董小平
- 关键词：Α-共核蛋白神经退行性变原核表达抗体制备
- 人朊蛋白不同N-糖基化修饰突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达被引量：1
- 2006年
- 构建并表达人朊蛋白N-糖基化修饰位点突变的真核表达载体,有助于进一步研究朊蛋白N-糖基化修饰的生物学功能。定点突变野生型人朊蛋白基因PRNP,将获得的突变体亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,并在人宫颈癌细胞株HeLa中瞬时表达各种朊蛋白糖基化修饰位点突变体,利用免疫印迹和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鉴定表达产物的糖基化形式。经Western blot鉴定,野生型和突变型朊蛋白表达产物出现不同形式的泳动特征,分别出现特异性糖基化修饰的多个条带,单糖基化修饰的两条条带和无糖基化修饰的一条条带。经PNGase F糖苷酶消化,野生型和糖基化单点突变型表达产物均能被糖苷酶消化,其分子量下移,去糖基化突变型表达产物的分子条带位置不变。通过突变野生型人朊蛋白基因PRNP的N-糖基化修饰位点,获得单糖基化修饰和去N-糖基化修饰的6种人朊蛋白突变体,并能够在HeLa细胞株中瞬时表达单糖基化修饰和去N-糖基化修饰朊蛋白,为进一步研究朊蛋白的相关功能建立良好基础。
- 杨洋陈岚韩兵社许彩民潘华珍
- 关键词：糖蛋白
