国家质检总局科技计划项目(2013IK051)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：李丹丹徐义刚高慎阳罗佳王昱更多>>
- 相关机构：海南出入境检验检疫局东北农业大学辽宁医学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目哈尔滨市科技创新人才研究专项资金重庆市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：4
- 2016年
- 为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VPtoxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为4.9CFU/mL,利用该检测方法对采集的150份样品进行检测,共计检出3份VP阳性样品,与国标法(GB 4789.7—2013)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。
- 李丹丹徐义刚王昱邱索平高会江高慎阳
- 关键词：副溶血弧菌实时荧光定量PCR
- 猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体免疫梳检测方法的建立及应用
- 2018年
- 为建立猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体（SRVl）的快速检测方法，本试验采用基因工程技术制备SRV1的SRV1—30基因原核表达产物重组SRV1—30蛋白作为抗原诊断试剂，建立免疫梳方法用于特异性检测实验猴血清中抗SRV1的抗体IgG。结果显示，最佳抗原包被量为100mg／L；制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的猴SRV1病毒阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应，表明该检测方法特异性强；敏感性分析结果表明，SRV130蛋白能够敏感地检测到1：200倍稀释的SRVl阳性血清；稳定性和重复性试验结果表明，同一样品重复检测3次，变异系数（CV）均小于10％；利用该检测方法在对12份可疑猴血清样品进行检测，免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100．0％，Kappa-1.000。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，具有良好的实用性。
- 李丹丹安微陈平亚张体银杨俊兴邱索平徐义刚高慎阳
- 关键词：抗体
- 应用DPO技术检测番茄斑萎病毒方法的建立被引量：5
- 2017年
- 为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DPO-PCR检测方法,并对其灵敏度、特异性以及退火温度敏感性进行了评价。结果表明,应用DPO引物建立的PCR技术能够成功地扩增出TSWV的208 bp特异性条带,与预期目标相符。经过优化后,DPO-PCR反应体系(25μL)为:DNA模板1μL,10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,d NTPs(每种2.5 mmol/L)2.0μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.2μL,上、下游DPO引物(20μmol/L)各1.0μL,以去离子水补充至25μL。利用该检测方法,在49.8~70.0℃的退火温度范围内,均可实现目标基因片段的高效扩增,说明其对退火温度不敏感;利用病毒RNA进行检测,该方法的灵敏度为7.5 ng;通过对TSWV、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和番茄黑环病毒的检测表明,仅TSWV呈现阳性反应,说明该方法特异性强。所建立的DPO-PCR检测方法能够准确、高效地检测TSWV,可用于进出境种苗检疫筛查及田间病害诊断。
- 刘忠梅罗佳潘仲乐刘洪义李丹丹韩政坤魏冬旭马微
- 关键词：番茄斑萎病毒
