国家高技术研究发展计划(2006AA02Z461)
- 作品数：13 被引量：25H指数：4
- 相关作者：王秉翔常娅莉魏东吴智远胡丽娜更多>>
- 相关机构：兰州生物制品研究所有限责任公司中国食品药品检定研究院兰州生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划卫生行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组鼠疫组分疫苗毒理学研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究重组鼠疫组分疫苗的毒理学作用以评价其安全性,为进一步临床研究提供实验依据。方法对重组鼠疫组分疫苗进行急性毒性试验,将疫苗1次给予小鼠后,观察所产生的毒性反应和死亡情况,及小鼠对该药物的最大耐受量。分别进行小鼠和豚鼠的异常毒性试验,观察动物有无异常反应,7d后每只动物体重变化。进行家兔的局部刺激试验,注射给药后对动物和注射部位进行肉眼观察,取注射局部皮肤组织进行病理检查。进行豚鼠的全身过敏试验,将致敏的动物静脉快速注射攻击,观察豚鼠有无过敏症状。结果2种浓度疫苗经腹腔和皮下2种途径注射小鼠,均未引起小鼠的异常症状和死亡,小鼠对重组鼠疫组分疫苗的最大耐受量大于10000μg/kg。小鼠和豚鼠的异常毒性试验表明,注射后7d每组动物均全部健存、无异常反应,且7d后每只动物体重均有增加,均符合2005年版《中华人民共和国药典》三部要求。局部刺激试验中疫苗对家兔注射局部皮肤未引起明显的组织病理学改变。全身过敏试验未出现任何异常反应。结论重组鼠疫组分疫苗的急性毒性试验、异常毒性试验、局部刺激试验和全身过敏试验毒理学实验结果显示,重组鼠疫组分疫苗用皮下注射的途径进行免疫是安全的。
- 魏东王秉翔李恪梅苏城傅林锋王国治
- 关键词：鼠疫鼠疫苗毒理学
- 鼠疫疫苗的研究进展被引量：1
- 2011年
- 现行鼠疫疫苗存在不少缺陷,在安全性,效果和不良副反应方面都存在较大问题。随着生物技术的发展,近些年来鼠疫新型亚单位疫苗和DNA疫苗成为研究的热点,并且不同的动物模型,免疫途径以及免疫方式都对疫苗的效果产生影响。本文综述了鼠疫疫苗的历史背景,现行鼠疫疫苗的再评价和对鼠疫新疫苗的开发研究进展及展望。
- 汪洁英魏东王国治
- 关键词：历史背景
- 复合鼠疫疫苗F1+rV的免疫学研究被引量：1
- 2010年
- 目的通过由提取的鼠疫F1抗原和重组鼠疫V抗原免疫小鼠,评价鼠疫亚单位疫苗的免疫效果,为鼠疫疫苗研制奠定基础。方法将60只小鼠随机分为3组实验组,免疫后不同时间点进行血清ELISA检测、ELISPOT、MTT细胞增殖以及流式细胞分析。结果 ELISA检测结果显示F1+rV+Al(OH)3组有较强的体液免疫应答;ELISPOT、MTT细胞增殖结果显示F1+rV+Al(OH)3组在不同时间点经F1、rV抗原刺激后分泌IFN-γ的脾脏淋巴细胞数均高于其余各组。结论鼠疫双组分疫苗能引起小鼠明显的体液免疫和细胞免疫,Al(OH)3佐剂能够显著提高其应答水平。
- 汪洁英吴小南魏东王国治
- 关键词：鼠疫疫苗佐剂体液免疫
- 鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制被引量：2
- 2013年
- 目的 研制鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法 用纯化的鼠疫菌F1抗原作为包被抗原,HRP标记的F1抗原作为酶标抗原,建立鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、敏感性、特异性、准确性和稳定性验证。结果 鼠疫菌F1抗原的最佳包被浓度为0.6μg/ml,HRP标记的F1抗原的最佳工作浓度为1︰7 000。制备的试剂盒检测精密性质控品的板内变异系数为6.5%,板间变异系数为7.1%;检测高、中、低浓度内部质控品和精密性质控品的回收率在95%～112%之间;检测阳性血清和阴性血清的敏感性为100%;与正常人血清、正常兔血清、正常小鼠血清、兔抗假结核耶尔森菌血清、小鼠抗假结核耶尔森菌血清均无交叉反应;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年。结论 成功制备了鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,达到了体外诊断试剂的注册要求,可用于鼠疫的临床监测、诊断及预后判断。
- 常娅莉席仲兴吴智远徐秉臣张正雷韩少波热娜雷刚彭林锋卜培英袁浩嘉王秉翔
- 关键词：F1抗体酶联免疫吸附测定
- 鼠疫组分疫苗诱导小鼠体液免疫应答研究
- 2013年
- 目的通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价。方法将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体;充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液,检测肺冲洗液中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体。结果血清中可产生较高效价的抗F1抗原和rV抗原IgG抗体以及较低效价的抗F1抗原IgA抗体。肺冲洗液中可检测到抗F1抗原和rV抗原的IgG抗体,但无特异性IgA产生。结论鼠疫组分疫苗能诱导小鼠产生较强的血清抗体应答,肺冲洗液可检测到一定的IgG抗体,该疫苗有希望成为我国新一代鼠疫疫苗。
- 魏东常雅莉卢锦标胡丽娜焦磊王秉翔王国治
- 关键词：鼠疫抗体生成F1抗原
- 鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价被引量：6
- 2014年
- 目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。
- 杜春红王鹏常娅莉王秉翔宋志忠
- 关键词：鼠疫鼠疫菌F1抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒
- 重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原制备工艺的建立被引量：2
- 2011年
- 目的建立稳定、高效的重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原工程菌的发酵与纯化工艺。方法研究LcrV工程菌pET-V/BL21(DE3)在试管和三角摇瓶中的生长和表达规律,对种子培养基、IPTG诱导时机、诱导时间及诱导浓度进行优化,并放大至30 L发酵罐培养,建立稳定的发酵工艺。收获菌体,经冻融、离心收集蛋白溶液,高压匀浆处理后,分别采用Q.Sepharose HP阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 FF(hs)疏水层析及Superdex 75 pg凝胶过滤层析三步柱层析纯化,建立稳定的纯化工艺,连续纯化3批,并按《中国药典》三部(2010版)的相关要求进行全面检定。结果经优化的条件培养及诱导表达,工程菌的收菌密度(A600值)可达34,LcrV抗原的表达量达36%,含量为1.6 g/L。发酵产物经柱层析纯化,LcrV产量高于140 mg,纯度大于95%,蛋白总回收率达8.5%以上。各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求。结论已建立了稳定的、适合规模化生产的LcrV制备工艺,为新型鼠疫组分疫苗的研制奠定了基础。
- 胡丽娜常娅莉魏东万艳马维民傅林锋王革吴智远韩少波王秉翔
- 关键词：大肠杆菌发酵纯化
- 鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒的研制被引量：5
- 2013年
- 目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清，经50％饱和硫酸铵盐析2次后，再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化，作为包被抗体；制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水，并进行纯化，用HRP标记单抗，作为酶标抗体；建立鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA检测方法，连续制备3批诊断试剂盒，并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、灵敏度、线性范围、特异性、重复性、准确性和稳定性验证。结果制备的试剂盒检测精密性参比品的板内变异系数为5．2％，板间变异系数为8．23％；试剂盒的线性范围为3．91～62．5ng／ml，最低检测限为3．0ng／ml；试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性，而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应；试剂盒检测高、中、低3种浓度Fl抗原含量的变异系数为4．54％～8．4％，回收率在104％-108％之间；试剂盒稳定性良好，有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，为鼠疫的临床诊断及流行病学监测提供了一种快速检测手段，也为新型鼠疫组分疫苗F1抗原含量的检测提供了方法。
- 常娅莉席仲兴吴智远徐秉臣彭林锋胡丽娜热娜雷刚韩少波张正雷卜培英袁浩嘉王秉翔
- 关键词：鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体酶联免疫吸附测定
- 鼠疫组分疫苗F1抗原、rV抗原含量的检测及其质量控制被引量：3
- 2012年
- 目的采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量。方法利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验;分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测;验证A(l OH)3佐剂吸附抗原的完全性;将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性;对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证。结果鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性;用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry法检测结果的误差均在±20%以内;4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明A(lOH)3佐剂吸附抗原完全;4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定;3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加。结论已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测。
- 常娅莉吴智远魏东韩少波胡丽娜焦磊卜培英王国治王秉翔
- 关键词：F1抗原双抗体夹心ELISA法
- 鼠疫F1蛋白原核分泌性表达及鉴定
- 2012年
- 目的构建重组质粒,在大肠杆菌中表达鼠疫菌F1抗原。方法用PCR方法扩增出带有信号肽的F1基因,将其克隆到表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3);用IPTG诱导目的基因表达,层析方法纯化F1蛋白,测定其分子量、等电点、N末端氨基酸序列,用Westernblot法检测其抗原性。结果根据双酶切和DNA测序结果显示,F1基因成功连接到表达载体pET30a(+)中,F1蛋白主要为分泌性可溶表达。测定纯化后F1蛋白的相对分子量约为15.6kD,等电点为4.15,N末端氨基酸序列与理论序列一致。经Westernblot鉴定,能被兔抗鼠疫菌EV株血清识别。结论成功克隆并构建了F1蛋白分泌性原核表达系统,所表达的重组F1蛋白具有较好的抗原性,为新型鼠疫疫苗研制提供基础。
- 魏东王国治
- 关键词：耶尔森菌鼠疫克隆
