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转基因小麦田土壤细菌16S rDNA V3片段的DGGE分析被引量：4: 2011年; 为长期监测转基因作物对土壤微生物菌群变化的影响提供可靠的试验方法。以检测转基因小麦田土壤细菌菌群变化为例,利用细菌特异性引物,扩增得到了土壤细菌16S rDNA V3可变区片段;通过变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE),分析PCR扩增得到的V3可变区片段;根据电泳条带的变化情况评价转基因小麦对土壤环境微生物的安全性。结果表明该方法所提取的DNA,可以不经过纯化直接进行PCR扩增等后续试验;DGGE图谱中条带清晰。该方法可作为长期监测土壤微生物种群变化的试验手段。; 丁衬衬周艳红林凡云徐剑宏吴季荣祭芳史建荣; 关键词：DNA提取变性梯度凝胶电泳转基因小麦

食用酱油中曲霉的检测方法被引量：3: 2010年; 为了快速检测酱油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素产生菌的污染,利用现代分子技术并结合曲霉菌的一些菌落与孢子特征差异,建立了曲霉菌快速检测方法。结果表明,使用黑曲霉钙调蛋白基因所设计的黑曲霉特异性引物,能够将黑曲霉与其他曲霉分离,黑曲霉中可以扩增出钙调蛋白基因特异性片段,而在米曲霉和黄曲霉中不能扩增到该基因片段。利用aflR等多个已知基因设计特异性引物,扩增结果表明,米曲霉和黄曲霉的菌株并无特异性条带差异。但是,黄曲霉与米曲霉的菌落特征及孢子特征差异显著。由此建立的以PCR检测结合菌株培养特征区分多种曲霉的方法,可以用于检测酱油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素产生菌的污染。; 王建伟刘昌来周艳红祭芳徐剑宏史建荣; 关键词：酱油曲霉钙调蛋白基因 PCR

转基因小麦根际土壤镰刀菌Real-time QPCR方法的建立及应用被引量：2: 2012年; 对转基因抗病小麦根际土壤中镰刀菌含量进行绝对定量,建立了实时荧光定量PCR(Real-time QPCR)检测体系。应用该反应体系,对转基因小麦各个生长时期的镰刀菌拷贝数进行绝对定量。结果表明,镰刀菌通用引物具有较好的特异性;Real-time QPCR反应的扩增曲线中各梯度标准质粒的循环阈值间隔均匀,溶解曲线峰值较突出,该标准曲线的相关系数(r)=0.999 20,斜率为-3.203,计算其扩增效率为105%,符合荧光定量PCR方法中对各项指标的要求。应用试验结果表明,在转基因小麦的播种前期、灌浆期、成熟期镰刀菌数量较低,在苗期、返青期、拔节期镰刀菌数量较高。; 王秀宇林凡云吴季荣曹欢史建荣; 关键词：转基因小麦镰刀菌实时荧光定量PCR

饲料中玉米赤霉烯酮的提纯与测定被引量：3: 2011年; 玉米赤霉烯酮污染饲料对人、畜造成巨大威胁,因此,对饲料中玉米赤霉烯酮检测水平的提高已不容忽视。为玉米赤霉烯酮监控提供灵敏、可靠的分析方法和试验数据,对其提纯与高效液相色谱测定方法进行了研究,结果表明：样品纯化条件,以二氯甲烷和NaCl溶液为提取剂,湿填硅胶柱为富集净化柱,用6 ml的甲醇溶液洗脱,采用HPLC进行测定;高效液相色谱检测条件,流动相为甲醇/水（80∶20,体积比）,流速为0.6 ml/min,紫外检测波长为236 nm,此时最低检出限为5μg/kg,在1.25~40.00μg/ml范围内,被测物浓度与测定的峰面积呈线性关系（r=0.999 1）;通过对检测方法日内、日间加标回收试验得到该检测方法回收率约为96.3%。该方法简便、快速、准确,可适用于饲料中玉米赤霉烯酮的提纯与测定。; 王宏杰徐剑宏祭芳丁衬衬董飞史建荣; 关键词：玉米赤霉烯酮纯化高效液相色谱

脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定被引量：31: 2010年; 【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的DON毒素降解率达到75.47%。【结论】选出的DON高效降解菌株徳沃斯氏菌,不但对液体培养基中的DON毒素具有很好的降解作用,对饲料中DON毒素也有很好的降解效果。这为真菌毒素的生物脱毒处理提供了可行的方法。; 徐剑宏祭芳王宏杰王建伟林凡云史建荣; 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解生物解毒

玉米赤霉烯酮半抗原及全抗原的合成与鉴定被引量：7: 2011年; 目的:合成玉米赤霉烯酮(ZEN)半抗原及全抗原,并鉴定其是否合成成功,为制备ZEN抗体奠定基础。方法:将ZEN与羧甲氧基胺半盐酸盐(O-(carboxym ethyl)hydroxyla-m ine hem ihydrochloride)反应,合成半抗原ZEN-6-羧甲氧基胺(ZEN-oxim e),采用TLC、HPLC和液相-质谱联用技术进行半抗原的纯化、鉴定;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备ZEN全抗原,采用紫外光谱法、TNBS法结合比的测定以及免疫学方法进行全抗原鉴定。结果:鉴定结果表明目标半抗原及全抗原合成成功。结论:本研究采用多种方法进行半抗原及全抗原的鉴定,结果皆表明目标半抗原及全抗原合成成功,说明本研究合成ZEN半抗原及人工抗原的技术路线是可行的,为进一步研制ZEN的抗体奠定良好基础。; 曹欢祭芳王秀宇史建荣; 关键词：玉米赤霉烯酮半抗原

高效液相色谱-串联质谱法定量检测稻谷中的稻曲病菌毒素A和D被引量：12: 2012年; 建立了稻谷中稻曲病菌毒素A和D污染物的高效液相色谱-串联质谱的分析方法。该方法简单、灵敏、准确,可同时定量检测稻谷中稻曲病菌毒素A和稻曲病菌毒素D。; 祭芳曹欢徐剑宏殷宪超史建荣; 关键词：高效液相色谱-串联质谱法稻谷

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