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小鼠3T3-L1前脂肪细胞培养与诱导分化方法的建立被引量：13: 2013年; 目的建立小鼠3T3-L1前脂肪细胞的培养及诱导分化为成熟脂肪细胞的方法。方法使用含10%胎牛血清（FBS）的高糖达氏修正伊氏培养基（DMEM）-F12液体培养基在体积分数5%二氧化碳（CO2）、37℃条件下常规培养3T3-L1细胞,2~3 d换液1次;诱导分化培养基Ⅰ培养2 d,诱导分化培养基Ⅱ培养2 d;基础培养基培养4~6 d,1~2 d换液1次。结果小鼠3T3-L1前脂肪细胞状态良好,成铺路石状生长,布满培养瓶底,3 d传代1次。90%以上细胞诱导分化成功,细胞呈圆形,有大量酯滴聚集,油红O染色呈橘红色。结论建立了小鼠3T3-L1前脂肪细胞的培养方法和诱导分化方法,为肥胖相关药物研究奠定了方法基础。; 郭秀玲徐民岗张秀丽师磊陈显久; 关键词：3T3-L1细胞细胞培养技术细胞分化小鼠

SOCS3结构和作用机制研究进展被引量：6: 2014年; SOCS3是酪氨酸蛋白激酶/信号传导子和转录激活子(JAK/STAT)途径的负反馈调节因子之一,由SOCS盒、SH2结构域和激酶抑制区三个部分组成。SOCS3参与了体内多种信号分子转导的调控。本文结合近年的研究成果对其结构和作用机制进行了综述,并对其中尚存在的问题进行展望。; 牛丽娜陈显久; 关键词：SOCS3 JAK/STAT信号通路

正常和病变的口腔黏膜上皮细胞对α干扰素的敏感性差异研究被引量：3: 2015年; 目的观察正常和不同病变程度的口腔黏膜上皮细胞对α干扰素(IFN-α)敏感性的差异,为IFN-α的抗肿瘤应用和机制的研究提供基础。方法分别培养正常口腔黏膜上皮细胞株(NOK)、口腔黏膜异常增生上皮细胞株(DOK)、口腔表皮样癌细胞株(KB),取传至第3代对数生长期细胞接种于细胞培养板,对照组每孔加入2 m L含10%胎牛血清的完全培养液,实验组设IFN-α浓度100、500、1 000 U/m L 3个浓度组,实验组每孔分别加入含相应浓度IFN-α的完全培养液,常规培养24 h后检测细胞增殖能力、细胞凋亡和细胞周期变化情况。结果不同浓度的IFN-α分别作用于3种细胞,对NOK细胞株的增殖能力无影响,而DOK、KB细胞株各实验组与对照组相比增殖能力明显减慢,差异均有显著统计学意义(均P<0.01)。浓度500 U/m L IFN-α对NOK细胞株的凋亡无影响,但有促进DOK、KB细胞株凋亡的作用。浓度500 U/m L IFN-α对NOK细胞株周期无影响,DOK细胞株G0/G1期细胞比例显著减少,而G2/M期细胞比例显著增加,KB细胞株G2/M期细胞比例显著增加。结论正常上皮细胞对IFN-α不敏感,而DOK、KB细胞株对IFN-α敏感;IFN-α有抑制DOK、KB细胞株的增殖能力、促其凋亡的作用,且细胞周期阻滞于G2/M期。; 游锦梅许雅鑫吴彬Yang Yong李钰陈显久; 关键词：Α干扰素口腔黏膜上皮细胞细胞增殖细胞周期

PRPS2基因shRNA质粒的构建与表达被引量：2: 2014年; 目的构建磷酸核糖焦磷酸合成酶2(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2,PRPS2)基因shRNA质粒,为探讨PRPS2基因功能奠定基础。方法设计并合成PRPS2基因shRNA,将其分别与真核表达载体GV102重组为shRNA质粒,分别命名为GV102-PRPS2-1、GV102-PRPS2-2、GV102-PRPS2-3,分别转染这三种载体的细胞设为实验组1、2、3;阴性对照载体命名为GV102-PRPS2-0,转染该载体设为阴性对照组;分别测序鉴定。常规转染人结肠癌HCT116细胞后采用RT-PCR、Western blot检测细胞PRPS2基因的表达水平,筛选干扰效果最佳shRNA载体。结果设计并合成的PRPS2干扰载体,经测序鉴定序列正确。转染HCT116细胞后在72 h内发绿色荧光的细胞数量随时间的增加而增强,转染效率均介于40%-50%。RT-PCR和Western blot结果显示,转染shRNA质粒的3个实验组PRPS2表达均较阴性对照组显著下降(P<0.05),其中GV102-PRPS2-3使细胞中PRPS2的mRNA(0.27±0.05)水平下降73%、蛋白(0.30±0.04)水平下降70%,干扰效果优于GV102-PRPS2-1(mRNA:0.61±0.03,蛋白:0.37±0.06)和GV102-PRPS2-2(mRNA:0.89±0.02,蛋白:0.84±0.05)。结论本研究利用RNAi技术下调了人结肠癌HCT116细胞中PRPS2基因的表达,为深入探讨PRPS2表达下调后对细胞行为的影响奠定了研究基础。; 吴彬游锦梅李钰Yang Yong陈显久; 关键词：RNA干扰 HCT116细胞基因重组

下调PRPS2基因表达对HCT116细胞增殖和凋亡的影响被引量：3: 2015年; 目的:探讨下调磷酸核糖焦磷酸合成酶亚基II(PRPS2)基因表达对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建PRPS2基因干扰载体sh-PRPS2,正常对照组不转染载体,阴性对照组转染阴性对照载体sh-PRPS2-0,3个实验组分别转染干扰载体sh-PRPS2-1、sh-PRPS2-2和sh-PRPS2-3,经DNA测序鉴定后转染人结肠癌HCT116细胞,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各载体转染后细胞PRPS2 m RNA和蛋白水平的表达变化,CCK8试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。结果:经DNA测序证实成功构建sh-PRPS2干扰载体3个,分别为sh-PRPS2-1、sh-PRPS2-2和sh-PRPS2-3。将上述3个干扰载体分别转染HCT116细胞72 h后,RT-PCR结果显示,PRPS2 m RNA相对表达量依次为0.61±0.03、0.89±0.02、0.27±0.05,与对照组比较,均显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,PRPS2蛋白相对表达量依次为0.37±0.06、0.84±0.05、0.30±0.04,与对照组比较均显著下降(P<0.05)。转染sh-PRPS2-3载体72 h后细胞增殖抑制率达19.8%±2.4%,凋亡率上升至68.4%±4.6%,G0/G1期细胞比例上升为12.9%±3.8%。结论:PRPS2的低表达可以有效抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,细胞阻滞于G0/G1期,本研究为肿瘤的靶向治疗提供了研究基础。; 许雅鑫李钰吴彬游锦梅Yang Yong陈显久; 关键词：RNA干扰 HCT116细胞

细胞因子信号抑制因子1基因真核高表达质粒的构建及其在NOK细胞中的表达: 2015年; 目的构建细胞因子信号抑制因子1(suppressors of cytokine signaling 1,SOCS1)基因真核高表达质粒,并在口腔上皮细胞系NOK细胞中进行表达。方法提取健康人外周静脉血基因组DNA,PCR扩增SOCS1基因,与p EGFPN1载体连接,构建重组真核表达质粒p EGFP-N1-SOCS1,用Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切鉴定及测序后,转染NOK细胞,采用荧光显微镜及Western blot法检测转染细胞中SOCS1蛋白的表达。结果重组真核表达质粒p EGFP-N1-SOCS1经双酶切及测序鉴定证实构建正确。p EGFP-N1-SOCS1转染NOK细胞72 h后获得表达,SOCS1蛋白的表达量为(134.67±9.07)%,较转染空质粒组约升高4倍,二者差异有统计学意义(P=0.001)。结论成功构建了SOCS1基因真核高表达质粒,为进一步研究SOCS1的生物学功能奠定了基础。; 许雅鑫吴彬游锦梅李钰Yang Yong陈显久; 关键词：真核细胞

口腔鳞状细胞癌中SOCS3及其DNA甲基化的表达及生物学意义: 2012年; 目的:研究口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)的DNA甲基化及蛋白表达水平,探讨其在OSCC发生、发展、浸润和转移中的作用。方法:采用甲基化特异性焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)和Western blot法分别检测100例口腔鳞状细胞癌组织中SOCS3的DNA甲基化及蛋白表达水平,并与20例正常口腔黏膜组织进行对照研究,分析其与OSCC临床病理参数的关系。结果:1)OSCC组织SOCS3 DNA甲基化的阳性率为85%,显著高于正常口腔黏膜组织的20%(P<0.05);2)OSCC组织中SOCS3蛋白表达(1.76±0.12)明显低于正常口腔黏膜组(1.93±0.25),差异有统计学意义(P<0.01)。口腔鳞状细胞癌组织中甲基化组SOCS3蛋白表达(1.72±0.21)显著低于非甲基化组(1.92±0.23),差异有统计学意义(P<0.01);3)在TNM分期中Ⅲ期组表达均低于Ⅰ～Ⅱ期组(P<0.05),伴有淋巴结转移组表达也低于无淋巴结转移组(P<0.05);4)口腔鳞状细胞癌组织中SOCS3蛋白表达水平与肿瘤分化级别呈正相关(r=0.416,P<0.05),与TNM分期、淋巴结转移呈负相关(r=-0.357,P<0.05)。结论:口腔鳞状细胞癌组织中SOCS3 DNA甲基化阳性率高,导致SOCS3基因表达下调,与口腔鳞状细胞癌的分化、浸润和转移密切相关。; 史培荣王旦霞王银珠陈维毅陈显久; 关键词：口腔鳞状细胞癌 DNA甲基化

干扰素α对口腔鳞状细胞癌细胞JAK-信号转导子和转录激活子-细胞因子信号抑制因子信号通路基因表达的影响被引量：1: 2015年; 目的以3种不同癌变程度的口腔细胞为工具,观察在干扰素α（IFN-α）作用下,JAK-信号转导子和转录激活子（STAT）-细胞因子信号抑制因子（SOCS）信号分子的表达变化,为深入理解口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞免疫逃逸的机制提供研究基础.方法常规培养NOK、DOK、KB细胞.空白组加入完全培养液,二甲基亚砜（DMSO）对照组加入含有0.1％ DMSO的完全培养液,实验组设10、100、500U/ml三个不同浓度组,每孔分别加入含不同浓度IFN-α的完全培养液,JAK抑制剂干预组在加入IFN-α前1h加入JAK抑制剂CP-690550 100 μmol/L.细胞培养24 h后检测.进行反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot实验.结果采用RT-PCR法检测显示：JAK1和JAK2在NOK细胞均有少量表达,IFN-α和CP-690550对NOK细胞组的JAK1和JAK2表达无影响,差异无统计学意义（P＞0.05）.100和500 U/ml的IFN-α能刺激DOK和KB细胞的JAK1和JAK2表达增加,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.CP-690550能有效减低DOK和KB细胞的JAK1表达,差异均具有统计学意义（P＜0.05）,而对JAK2表达无作用.采用Western blot法检测显示：STAT1、STAT3和pSTAT3（Tyr705）在对照组均有表达,pSTAT1（Tyr701）在对照组无表达;IFN-α和CP-690550对NOK细胞组的STAT1、STAT3和pSTAT3（Tyr705）表达无影响,差异无统计学意义（P＞0.05）.100、500 U/ml的IFN-α能刺激DOK和KB细胞的pSTAT3（Tyr705）表达增加,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;而对pSTAT1（Tyr701）的表达无影响.CP-690550能有效减低DOK和KB细胞的pSTAT3（Tyr705）表达,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.采用Western blot法检测显示,SOCS1和SOCS3在对照组均有表达;IFN-α和CP-690550对NOK细胞组的SOCS1和SOCS3表达无影响,差异无统计学意义（P＞0.05）.100 U/ml和500 U/ml的IFN-α能刺激DOK和KB细胞的SOCS1表达增加,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;而对SOCS3的表达无影响.CP-690550能有效减低DO; 游锦梅许雅鑫吴彬Yang Yong李钰陈显久; 关键词：干扰素口腔鳞状细胞癌酪氨酸蛋白激酶

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山西省国际科技合作计划(2012081050-1)

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