陕西省科学技术研究发展计划项目(2003K10G9)
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
- 相关作者：穆士杰安群星张献清陈蕤徐志凯更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目西京医院学科助推计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 研究报告具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白TCS_(YFF-KR)的构建及原核表达被引量：3
- 2008年
- 目的:构建具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白(TCS),并将其在原核系统内进行表达与纯化。方法:借助计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(YFF81-83和KR173-174),并依此设计适当的突变引物;以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增双突变型TCS全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序;将所获阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western印迹鉴定;用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变型TCS蛋白进行纯化。结果:构建了突变型TCSYFF-KR,并获得了该蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化,产生大量均一的突变型TCS蛋白。结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了一条新途径。
- 安群星贾宁张献清陈蕤夏爱军易静穆士杰
- 关键词：天花粉蛋白定点突变原核表达
- 天花粉蛋白突变体TCS_(KR173-174CG)生物活性及免疫原性研究
- 2008年
- 目的:对中草药成分天花粉蛋白(TCS)进行定点突变,使其免疫原性有所降低而生物活性不受或少受影响。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(KR173-174)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSKR173-174CG)基因在大肠杆菌中表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测发现,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。
- 安群星穆士杰张献清陈蕤雷迎峰余瑞刘宁徐志凯
- 关键词：基因转变
- 突变前后天花粉蛋白的生物活性及免疫原性比较研究被引量：1
- 2008年
- 目的:对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变,比较其与野生型TCS(wTCS)间的生物活性及免疫原性差异。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF-KR)在大肠杆菌中表达及纯化。随后将其与wTCS比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性和免疫原性。结果:构建的突变体TCSYFF-KR其活性与wTCS活性几乎相当,而免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,所构建的突变体TCS值得进一步研究。
- 安群星贾宁张献清陈蕤夏爱军易静余瑞穆士杰
- 关键词：天花粉蛋白定点突变生物活性免疫原性
- 天花粉蛋白突变体TCS_(KR173-174CG)的构建、表达与纯化被引量：5
- 2006年
- 目的构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并进行表达及纯化。方法应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇,并进行定点突变。以栝楼基因组DNA为模板,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Ni-NTA层析纯化。结果目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白。结论已成功构建了TCS突变体基因,并获得高效表达。
- 安群星穆士杰张献清陈蕤夏爱军张清平陈晨雷迎峰黎志东徐志凯
- 关键词：天花粉蛋白定点突变原核表达
- 天花粉蛋白的定点突变及聚乙二醇修饰
- 2008年
- 目的对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变及聚乙二醇(PEG)修饰,并对修饰产物进行DNA酶活性分析。方法选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,将所构建的两个突变体(TCSYFF81-83ACS和TCSKR173-174CG)在大肠杆菌中表达,并纯化表达产物。通过第82位和173位引入的半胱氨酸残基,分别对突变体蛋白进行PEG定点修饰。通过与突变型TCS比较,分析两个PEG修饰型TCS的DNA酶活性。结果突变的TCS经酶切鉴定及测序分析,证明质粒构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为30000,经PEG修饰后,相对分子质量约为40000。初步分析显示,与突变型TCS相比,所构建的两个PEG修饰型TCS也显示出类似DNA酶活性。结论成功进行了TCS的定点突变及PEG修饰,为基因工程及化学修饰方法改造TCS提供了一条可行的途径。
- 安群星雷迎峰穆士杰张献清陈蕤夏爱军陈晨易静吴原茹徐志凯
- 关键词：天花粉蛋白定点突变聚乙二醇修饰
- 天花粉蛋白突变体的构建及其在原核系统中的表达被引量：3
- 2007年
- 目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化。方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物。以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将所获阳性重组质粒转化感受态E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行W estern b lot鉴定。最后用N i-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化。结果:成功构建了TCS突变体(TCSYFF81-83ACS),并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经N i-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白。结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。
- 安群星穆士杰张献清陈蕤吴原茹夏爱军雷迎峰黎志东徐志凯
- 关键词：天花粉蛋白人类免疫缺陷病毒定点突变原核表达纯化
- 具有抗HIV活性的天花粉蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：3
- 2006年
- 目的:天花粉蛋白(TCS)有较强的抗HIV活性。利用基因工程技术在大肠杆菌中表达TCS并进行纯化。方法:从新鲜栝楼叶片中获取TCS基因组DNA,利用PCR技术扩增其全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序;将所获阳性重组质粒转化感受态E.coliBL21(DE3)得到工程菌,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹鉴定;用Ni-NTA柱对所获目的蛋白进行纯化。结果:获得了目的蛋白的可溶性高效表达,并通过了Western印迹鉴定。经Ni-NTA柱纯化后,得到大量均一的6His-TCS融合蛋白。结论:TCS在大肠杆菌中的表达与纯化,为通过基因工程方法研制具有抗HIV活性的药物奠定了基础。
- 安群星徐志凯黎志东穆士杰张献清吴兴安
- 关键词：天花粉蛋白人类免疫缺陷病毒原核表达纯化
- 突变型天花粉蛋白TCS_(YFF81-83ACS)的生物活性及免疫原性分析被引量：1
- 2007年
- 目的:构建一种突变型天花粉蛋白(trichosanthin,TCS),并对其生物活性和免疫原性进行分析。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF81-83ACS)在大肠杆菌中进行表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测显示,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而其免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。
- 安群星穆士杰张献清陈蕤雷迎峰黎志东徐志凯
- 关键词：天花粉蛋白定点突变生物活性免疫原性
