国家自然科学基金(30700272)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
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- 三种成体干细胞对脂多糖诱导RAW264．7细胞炎症状态的影响被引量：1
- 2014年
- 目的比较人羊膜上皮细胞((human amniotic epithelial cell,H-AEC))、羊膜间充质细胞(human amniotic mesenchymal cell,HA-MSC)和脐带间充质细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)分泌的细胞因子对脂多糖刺激巨噬细胞系RAW264.7炎症状态的影响。方法将LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型作为对照组,比较H-AEC、HA-MSC、UC-MSC和RAW264.7共培养或条件培养基培养RAW264.7对RAW264.7炎症状态的影响。比较各组RAW264.7细胞的迁移能力;检测各组细胞分泌一氧化氮(NO)的水平;用实时定量多聚酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞经典激活的巨噬细胞(classically activated macrophage,M1 macrophage)相关的促炎基因如白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死基因а(TNFа)、一氧化氮合成酶-2(NOS-2)以及M2 macrophage相关的抑炎基因如精氨酸酶(Arg-1)、甘露糖受体基因CD206、B类清道夫受体CD36)表达情况。结果 (1)H-AEC、HA-MSC、UC-MSC处理后RAW264.7的迁移率分别为14.7%±4.5%、9.6%±0.7%、13.0%±0.9%,与对照组(31.1%±11.0%)相比,3种细胞的条件培养基处理后RAW264.7的迁移率均降低,差异具有显著性(P<0.05);(2)H-AEC、HA-MSC、UCMSC共培养后RAW264.7细胞分泌NO的水平分别为24.26±0.72、44.52±2.51、42.25±0.76μmol/L,与对照组(45.65±1.78μmol/L)相比,H-AEC组细胞分泌的NO有显著性下降(P<0.05);(3)促炎基因与抑炎基因的表达改变:(A)H-AEC处理组促炎基因IL-1β、TNFа、NOS-2、INFβ的表达下调,与对照组相比有显著差别;HA-MSC、UC-MSC处理组促炎基因INFβ表达下调显著,其余基因均上调表达;抑炎相关基因如Arg-1、CD206、CD36均上调;(B)3组细胞干预后抑炎症相关基因Arg-1、CD206、CD36表达均上调,与对照组有显著差异。结论人羊膜上皮细胞、羊膜间充质细胞和脐带间充质细胞可以促进巨噬细胞向M2型分化,但其效果和机制存在不同。
- 何妲彭琳黄生建陆文玲王建
- 关键词：羊膜上皮细胞M2型巨噬细胞
- 肥胖与脂肪组织巨噬细胞的研究进展被引量：10
- 2016年
- 肥胖被认为是一种慢性促炎症疾病。近年来巨噬细胞在肥胖的发生过程中起的重要作用越来越被研究者们所重视。研究发现脂肪组织巨噬细胞(ATMs)的极化和招募在肥胖的发生过程中扮演着重要角色:在肥胖的脂肪组织中,巨噬细胞M1/M2的比例出现失衡即M1促炎巨噬细胞比例上调M2抑炎巨噬细胞比例下调导致脂肪组织慢性炎症;脂肪组织的局部炎症发生时周边组织巨噬细胞招募至脂肪组织也能够促进肥胖的发展进程。本文就肥胖的发生与脂肪组织巨噬细胞的极化和招募的关系作一综述。
- 黄生建彭琳陆文玲侯伟榕王建
- 关键词：肥胖极化招募
- 干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究现状
- 2009年
- 胰腺或胰岛细胞移植是目前治疗Ⅰ型糖尿病和部分Ⅱ型糖尿病效果最理想的方法,但因来源组织短缺及需要终生服用免疫抑制剂等问题限制了它的广泛应用。利用胰腺或胰腺外的多能干细胞产生胰岛样细胞有望克服上述问题而用于治疗糖尿病。本文就将干细胞诱导分化为胰岛样细胞中所用的重要的转录因子和可溶性诱导因子及其作用以及胰岛素分泌细胞的来源做一综述。
- 贺佩卢光琇
- 关键词：干细胞糖尿病分化胰岛素分泌细胞
- 人羊膜间充质细胞的分离培养及向胰岛样细胞诱导分化被引量：8
- 2011年
- 目的分离培养人羊膜间质细胞(hAMCs),初步探讨其向胰岛样细胞的诱导分化。方法羊膜组织经胰蛋白酶消化去除上皮细胞后,采用胶原酶I联合中性蛋白酶的方法分离hAMCs。细胞免疫荧光检测分离得到细胞表面标记Vimen-tin+,SSEA-4+表达;流式细胞仪检测CD29,CD90及CD34,CD45表达;RT-PCR检测ACTG2、ACTA2、MMP2、Cripto、Sox2、LEFTYA、nanog、Oct-4基因表达;添加诱导因子诱导hAMCs向胰岛样细胞分化。结果分离得到的hAMCs可体外长期传代,并保持稳定的遗传学特性;细胞表现vimentin+、SSEA-4+;CD29、CD90表达量分别为91.5%±9.93%和48.7%±9.47%;不表达CD34,CD45;表达ACTG2、ACTA2、MMP2和Cripto、Sox2、LEFTYA、nanog、Oct-4等基因。诱导后的细胞表达insulin、PDX1、ngn3、glucagon等基因,并表现insulin+。结论建立了人羊膜间充质细胞的分离培养方法;在体外可诱导分化为胰岛样细胞。
- 彭琳王建卢光琇
- 关键词：干细胞特性胰岛样细胞诱导分化
- 人羊膜上皮细胞的分离培养及其免疫原性初步研究被引量：2
- 2011年
- 目的:分离培养人羊膜上皮细胞(HAEC),通过与同种异体淋巴细胞混合培养探讨HAEC的免疫原性,为进一步的临床研究提供指导。方法:体外分离培养HAEC,透射电镜观察细胞超微结构,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞免疫荧光方法检测上皮细胞相关基因及细胞表面标记细胞角蛋白CK18表达情况。与同种异体外周血来源淋巴细胞建立混合淋巴细胞(the mixed lymphocyte reaction,MLR)反应体系,通过MTT法检测细胞增殖率。结果:分离得到的HAEC具有上皮细胞特异性的微绒毛结构,表达上皮细胞相关基因CDH1,claudin 3和claudin 4,并表现为细胞角蛋白CK18阳性。MTT分析检测OD值结果显示,在HAEC细胞与淋巴细胞浓度分别为1∶2 000,1∶200和1∶20时各组的OD值分别为0.074±0.022,0.049±0.012和0.019±0.011。结论:从羊膜中分离得到的HAEC表达CK18,且免疫原性较低。
- 彭琳王建卢光琇
- 关键词：细胞培养技术上皮细胞羊膜逆转录聚合酶链反应荧光免疫测定
- 人羊膜上皮细胞干细胞特性及向胰岛素分泌细胞分化的研究被引量：6
- 2011年
- 目的建立人羊膜上皮细胞(hAECs)的分离及培养方法,探讨其向胰岛素分泌细胞分化的能力。方法观察不同培养方法对hAECs生长倍增时间的影响以优化其培养体系;通过细胞免疫荧光法检测不同培养代数细胞多能干细胞的表面标记;通过体外添加诱导因子的方法,探讨诱导hAECs向胰岛素分泌细胞分化的潜能。结果在10 ng表皮生长因子培养下,hAECs可长期传代。hAECs表达胚胎干细胞表面标记如阶段特异性胚胎抗原4等;采用悬浮培养法诱导分化,可检测到胰岛发育、胰岛功能基因如胰腺十二指肠同源盒、神经源素3、同源异形盒转录因子6、胰岛素、胰高糖素的表达,免疫组化检测细胞可以表达胰岛素,并且随着外界葡萄糖浓度升高,胰岛素分泌显著增加。结论建立了人羊膜上皮细胞的分离和培养方法(不添加动物血清);在体外可诱导分化为胰岛素分泌细胞。
- 王建彭琳卢光琇
- 关键词：人羊膜上皮细胞胰岛素分泌细胞横向分化
