江苏省自然科学基金(BK2009108)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：阮长耿赵益明江淼谷颖季顺东更多>>
- 相关机构：苏州大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗血小板膜糖蛋白Ib单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究被引量：2
- 2011年
- 目的:制备抗人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)单克隆抗体(mAb),并进行生化鉴定与初步探讨其临床应用。方法:采用血小板免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合。经间接ELISA法筛选和克隆化培养,获得1株抗人GPIbmAb的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得mAb;免疫双扩散鉴定其抗体亚类;流式细胞术和免疫放射法鉴定其识别的抗原;ELISA法检测该抗体对血浆血管性血友病因子(vWF)的瑞斯托霉素辅因子活性的影响。结果:成功制备了1株抗人GPIbmAb,命名为SZ-151。ELISA法测定其腹水效价为1∶20 000,免疫双扩散鉴定其为IgG1亚类。免疫放射法和流式细胞术检测结果证实SZ-151和mAb SZ-2识别同一抗原GPIb,且作用位点不同。ELISA结果显示,SZ-151对瑞斯托霉素辅因子活性无抑制作用。结论:获得1株新的抗血小板膜糖蛋白Ib的mAb,可用于血浆vWF的瑞斯托霉素辅因子活性检测,为血管性血友病的诊断和分型提供了有效的工具。
- 谷颖季顺东赵益明沈飞阮长耿
- 关键词：血小板单克隆抗体血管性血友病因子
- 人von Willebrand因子A1A2A3三联体结构域的真核表达及功能鉴定研究
- 2010年
- 本研究构建人血管性血友病因子A1A2A3区(vWF-A1A2A3)编码序列基因真核表达载体并在CHO细胞表达,为探讨vWF-A1A2A3的生物学功能奠定基础。根据已公布的序列设计引物,用PCR方法从vWF cDNA中扩增出人vWF-A1A2A3编码序列基因片段(vWF-A1A2A3),测序正确后用限制性内切酶将目的片段插入pSectag2b载体中。酶切后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达。结果表明:重组质粒pSectag2b-vWF-A1A2A3能在CHO细胞中表达,表达产物(rvWF-A1A2A3)能够与人Ⅲ型胶原结合和在瑞斯托霉素诱导下与血小板结合。结论:成功构建了rvWF-A1A2A3并表达于CHO细胞。本研究为vWF相关的生物学结构、功能研究和临床应用提供了基础。
- 张婷婷赵益明江淼阮长耿
- 关键词：WILLEBRAND因子CHO真核表达
- 抗VWF-A3区特异性单抗SZ-123单链抗体的构建和表达
- 2011年
- 目的以能与vWF-A3区特异结合的单克隆抗体SZ-123为模板,构建其单链抗体,为深入研究vWF-A3结构与功能的关系提供有力的工具。方法通过逆转录及多聚酶链反应,扩增并克隆单抗SZ-123的可变区基因VH、VL,经测序后加入连接肽,构建成SZ-123单链抗体(SZ-123 ScFV),并在大肠杆菌中进行表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法验证SZ-123 ScFV的免疫原性。结果 VH、VL可变区基因符合小鼠抗体可变区特征,SZ-123 ScFV基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白的20%。经过变性和复性后,获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段。结论成功表达了SZ-123单链抗体,该小分子抗体具有特异结合vWF-A3区的能力。
- 王菲菲赵益明江淼姚拾秀李雪美阮长耿
- 关键词：原核表达
