北京市自然科学基金(5012007)
- 作品数：7 被引量：68H指数：4
- 相关作者：苟克勉安晓荣陈永福严阿勇侯健更多>>
- 相关机构：中国农业大学上海交通大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 端粒酶催化亚基基因在小鼠胚胎发育早期的转录活性
- 2005年
- 用RT-PCR引物分别扩增成年昆明(KM) 小鼠睾丸、脾脏、肾脏、肝脏和胸腺组织的总RNA发现,端粒酶催化亚基基因tert在这些组织中都有转录,目标产物正确组装到PMD 18-T载体后测序,结果与已知cDNA序列一致. PMSG/hCG超数排卵方法获得KM小鼠成熟卵母细胞和CZB溶液体外培养的胚胎(KM ♀×KM♂),用酸性Tyrode蒺s溶液消化透明带后,采用巢式RT-PCR,同时分析tert基因和持家基因hprt的转录发现,对于单个样品来说, 全部卵母细胞(15 h-post hCG,10/10) 都存在hprt转录本,其中,只有40%(4/10) 还同时存在tert转录本. 原核形成初期(20 h-post hCG,6/6) 和原核晚期(30 h post-hCG,8/8) 的受精卵,以及发育至2-C早期的胚胎(35 h-post hCG,7/7) 都不转录tert基因,只有hprtmRNA存在;2-C晚期(50 h-post hCG)时,两个基因同时转录(4/8)和一个基因单独转录(4/8)的胚胎各占50%;从4-C阶段(65 h-post hCG,4/4)开始,包括8-C阶段(75 h-post hCG,4/4),桑椹胚阶段(93 h-post hCG,4/4),直至囊胚阶段(118 h-post hCG,4/4),所有的胚胎都同时转录tert和hprt基因,而且转录水平明显升高. 以20枚胚胎量为模板进行RT-PCR发现,原核早期,原核晚期的胚胎中仍然没有tert基因转录,只有hprtmRNA,但是,在2-C早期胚胎中同时检测到了hprt和tert两种mRNA. ?
- 王宇姚慧安晓荣陈永福苟克勉
- 关键词：胚胎HPRT基因端粒酶
- 胞浆内精子注射技术生产小鼠被引量：11
- 2005年
- 以piezo操作系统为技术支撑 ,在掌握小鼠卵母细胞胞浆内精子注射技术 (ICSI)的基础上 ,进行了ICSI技术生产试管小鼠的尝试。来自成年昆明 (KM)小鼠附睾尾的新鲜精子 ,剪切去尾后 ,直接将精子头注射到B6D2F1小鼠卵母细胞质中 ,注射后 1h ,83 .3%的卵母细胞存活。6h时 ,84 . 0 %的成活卵子成功受精 ,形成原核 ,排出PB2 体外培养的ICSI胚胎 ,卵裂率 (98%vs 94 . 7% )和 4_细胞期胚胎比率 (89 5 %vs 92 . 1% )均与培养的体内受精卵没有差异 (P >0 . 0 5 ) ;但是 ,桑椹胚(6 3 8%vs84 . 2 % )和囊胚发育率 (2 5 .7%vs 6 8. 4 % )极显著地 (P <0 . 0 1)低于对照组。12 0枚原核期胚胎移植给 7只假孕受体后 ,4只受孕小鼠共产出 2 8只ICSI小鼠 (2 3. 3% )。健康成年的 2 5只ICSI小鼠都没有明显的生理和行为异常。随机选择其中的 2 0只小鼠 ,分别进行ICSI小鼠间、ICSI与KM小鼠间共 12组的交配 ,结果所有雌鼠妊娠产仔。在成功建立小鼠ICSI技术的基础上 ,成功获得了我国的首例ICSI小鼠 ,并且证明这些ICSI小鼠都具有正常的繁殖后代的能力。
- 严阿勇李明安晓荣侯健关宏陈永福苟克勉
- 关键词：ICSI囊胚小鼠生殖力
- 利用ICSI技术生产转基因小鼠
- 在掌握小鼠ICSI技术的基础上,本文进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究。来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验。解冻精子与DNA混匀1 min后,精子头被...
- 李明严阿勇姚慧王宇安晓荣陈永福苟克勉
- 文献传递
- 成年体细胞克隆的绵羊
- 分别以体外培养并且用0.5%FBS饲养的美利奴成年母羊的颗粒细胞和Dorset成年绵羊的耳朵细胞为供体,与体外成熟的去核卵母细胞融合后,Ionomycin/6-DMAP激活的重构胚胎用SOF溶液培养7天后.结果颗粒细胞组...
- 苟克勉安晓荣关宏侯健陈永福
- 关键词：体细胞核移植玻璃化胚胎移植
- 文献传递
- 动物乳腺生物反应器的现状和趋势被引量：30
- 2002年
- 利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白 ,可以高效获得安全、足量的药用蛋白。本文针对乳腺生物反应器的成功研制 ,从目的基因的选择、载体构建、转基因技术等方面探讨了动物乳腺生物反应器的研究现状。分析了提高转基因效率和外源蛋白表达水平的技术途径 ,提出了降低总体成本的战略措施。特别探讨了利用Cre loxP系统发展“体细胞打靶 体细胞核移植技术体系” 。
- 苟克勉安晓荣田见晖陈永福
- 关键词：转基因动物乳腺生物反应器核移植
- 小鼠ICSI及其转基因技术
- ＜正＞实验一:以Piezo操作系统为技术支撑,进行了ICSI（intracytoplasmic sperm injection）技术生产试管小鼠的尝试。来自成年昆明（KM）小鼠附睾尾的新鲜精了头,直接注射到B6D2F1小...
- 李明严阿勇安晓荣姚慧苟克勉
- 文献传递
- 利用卵胞浆精子注射(ICSI)技术生产转基因小鼠被引量：11
- 2006年
- 在掌握小鼠ICSI技术的基础上,进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究。来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验。解冻精子与DNA混匀1min后,精子头被显微注射到B6D2F1小鼠成熟卵母细胞质中。精子头与pEGFP-N1环状DNA共注射生产的ICSI受精卵,在CZB溶液中培养至囊胚期时,39.1%(9/23)的囊胚表达GFP基因。精子注射后6h,直接移植ICSI受精卵后,7只妊娠受体一共产仔30只,效率为23.8%(30/126)。Southernblot分析其中16只小鼠发现,3只(18.8%)转基因小鼠同时整合了GFP和Neomycin基因,它们全部来自精子和线性DNA混合的实验组(阳性效率为33.3%,3/9),相反,精子与环状质粒DNA共注射生产的7只ICSI后代中,没有检测到外源基因。转基因小鼠整合的外源基因能够传递给它们后代。结果说明,利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠,宿主基因组可能更容易整合线性化的外源基因。
- 李明严阿勇姚慧安晓荣苟克勉
- 关键词：ICSI囊胚SOUTHERNBLOT
