国家高技术研究发展计划(2003AA2160101)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张庆玲丁彦青李祖国贺莉杨玉芳更多>>
- 相关机构：南方医科大学解放军第458医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- ED-L2-LMP1-EGFP融合基因慢病毒载体的构建及鉴定
- 2007年
- 目的构建及鉴定EB病毒LMP1基因和增强型绿色荧光蛋白基因融合慢病毒表达载体。方法应用DNA重组技术,将EB病毒ED-L2启动子和LMP1基因克隆到带有EGFP基因的FUGW慢病毒表达载体上,筛选阳性克隆,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组载体后,以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMVΔ8.9、包膜基因VSVG和带目的基因ED-L2-LMP1-EGFP载体共同转染到293FT包装细胞内包装病毒,荧光显微镜下观察包装细胞报告基因表达情况,收集病毒上清、浓缩鉴定、测定重组病毒的滴度。PCR和免疫组化鉴定LMP1表达。结果融合慢病毒表达载体质粒限制性酶切分析证实有782bp的ED-L2和1300bp的LMP1基因片段基因片段插入到慢病毒载体中。转染重组ED-L2-LMP1-EGFP慢病毒融合载体的细胞于荧光显微镜下呈绿色荧光;对该细胞PCR可以扩增出404bp大小的LMP1基因片段和370bp的EGFP基因片断;免疫组化证明LMP1蛋白在转染细胞表达阳性。结论成功构建了ED-L2-LMP1-EGFP基因的慢病毒表达载体,为进一步在体研究LMP1基因的功能奠定了基础。
- 张庆玲杨玉芳丁彦青
- 关键词：EB病毒EB病毒潜伏膜蛋白1慢病毒基因表达
- 小鼠品系影响胚胎移植成功率的比较研究被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨不同受体鼠和供体鼠品系对胚胎移植成功率的影响以及不同品系胚胎混合移植的可行性.方法:以Balb/c雄鼠和C57BL/6雌鼠杂交F1代(B6CF1)小鼠24只和昆明鼠(KM鼠)14只作为供体鼠,共取状态良好的受精卵362颗,分别或混合回种于8只B6CF1和16只KM受体鼠输卵管内,比较两种品系鼠的产仔率.结果:除同品系回种可产仔外,KM鼠和B6CF1杂交鼠受精卵交叉回种B6CF1或KM受体鼠以及两品系受精卵混合回种均可产仔.其中B6CF1受体鼠产仔率(29.0%)明显高于KM受体鼠(7.0%),B6CF1供体鼠产仔率(16.0%)也略高于KM供体鼠(11.0%);杂交B6CF1受精卵同品系回种产仔率最高(32.0%),KM鼠受精卵同品系回种产仔率仅4.0%,而B6CF1和KM鼠作为受体鼠混合回种两品系受精卵的产仔率分别为25.0%和15.0%.结论:不同品系小鼠胚胎可交叉或混合回种,小鼠胚胎移植技术不受品系限制,但同品系胚胎移植成功率更高;B6CF1作为胚胎移植实验动物明显优于KM鼠.
- 张庆玲贺莉杨玉芳李祖国丁彦青
- 关键词：胚胎移植小鼠品系
