国家自然科学基金(39900041)
- 作品数：6 被引量：34H指数：4
- 相关作者：张成岗孟凡伟郭慧云周仁平汪思应更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学安徽医科大学更多>>
- 发文基金：海外青年学者合作研究基金国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳鼠嗅球及皮层神经元的原代培养和Netrin-4受体在神经元定位的初步研究
- 2004年
- 目的 培养原代嗅球及皮层神经元细胞 ,研究神经轴突生长诱向因子 (Netrin 4 )受体在神经元细胞中的定位。方法 改良Koh法分离、培养出生 12h内Wistar乳鼠的嗅球及皮层神经元 ,采用免疫细胞化学方法鉴定其纯度。碱性磷酸酶 (AP)标记的Netrin 4融合蛋白与原代培养第 7d的神经元孵育 ,以亲和细胞化学法检测Netrin 4受体在神经元的定位。结果 原代培养第 7d的嗅球及皮层神经元胞体饱满 ,突起长并交织成网状 ;免疫细胞化学染色见神经丝蛋白(neurofilament)在神经元胞体及突起中表达 ;嗅球及皮层神经元的细胞膜上均有Netrin 4受体表达。结论 建立起高效、稳定的原代神经元培养方法并应用于神经突起生长诱向因子受体的定位研究。
- 余科科张成岗汪思应
- 关键词：嗅球神经元
- β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。
- 余利红高艳王利红韩洪彦孙志贤张成岗
- 关键词：合成肽抗原表位抗体制备抗体鉴定
- 轴突生长诱向因子(Netrin)基因家族研究进展被引量：8
- 2003年
- 在神经系统发育过程中,神经与其靶细胞之间精确联系的形成是依靠多种细胞外诱向因子介导实现的.这些因子通过作用于轴突生长锥上的相应受体而诱导或排斥轴突生长,从而决定了轴突的生长路线以及轴突与特定靶细胞的功能联系.
- 孟凡伟郭慧云张成岗
- 关键词：基因神经系统发育
- Hetrin基因在大鼠脑发育过程中表达的初步研究被引量：12
- 2004年
- 本文目的是 :观察 hetrin基因在大鼠脑发育过程中的表达变化规律 ,藉以探讨 hetrin在神经系统发育过程中的作用。以地高辛 (dig)标记 hetrin基因 3 ' -末端 c RNA为探针 ,采用原位杂交法研究 hetrin m RNA在生后第 10 d(P10 )、P3 0和 P60大鼠脑中的分布状况 ;同时采用半定量 RT-PCR法分析出生前后大鼠脑内 hetrin m RNA表达水平的变化。结果发现 ,hetrin m RNA原位杂交阳性信号定位于神经元胞质内 ,在 P10、P3 0和 P60大鼠的脑组织中均可见明显的杂交信号。 RT-PCR结果显示 ,在胚胎第 9d(E9)大鼠脑内 hetrin m RNA开始表达 ,但表达量很低 ,以后其表达量逐渐升高。出生后大鼠不同脑区 hetrin m RNA的表达量变化趋势不同。本实验结果表明 ,在胚胎期及出生后大鼠脑的多个部位都有 hetrin m RNA表达 ,而且 hetrin m RNA表达量与神经细胞突起生长及新突触连接的建立在时间上有一定的同步性 ,提示 hetrin m RNA的表达与神经突起生长存在着一定的关系 ,进一步支持存在
- 孟凡伟郭慧云周仁平张成岗
- 关键词：NETRIN发育RT-PCR神经系统
- β-Netrin mRNA在成年大鼠脑内的表达及其分布被引量：4
- 2004年
- 目的 研究神经细胞突起生长诱向因子 (β Netrin)在大鼠脑内的基因表达。 方法 以地高辛标记的cR NA探针利用组织原位杂交技术检测β NetrinmRNA在出生后 30d大鼠脑内的表达及其分布。结果 (1)脑内β NetrinmRNA主要定位于神经元 ;(2 )脑内β NetrinmRNA阳性细胞广泛分布于大脑皮层、边缘系统、小脑、脑干等处的神经核团及嗅球中。其中 ,梨状前皮质、杏仁核群、海马各区锥体层、小脑浦肯野细胞、小脑内侧顶核及间置核、斜方体内侧核和嗅球僧帽细胞等部位阳性信号较强 ;中等强度的阳性信号见于额叶皮质、丘脑外侧背核等处。结论 原位杂交结果显示β NetrinmRNA在成年大鼠脑内神经元中有表达 ,进一步验证了β Netrin对脑内神经细胞突起的生长具有诱向作用。同时 ,由于β Netrin在大鼠嗅觉传导相关通路和海马、大脑皮质内表达量较高 ,提示β
- 孟凡伟郭慧云周仁平张成岗
- 关键词：MRNA原位杂交
- 神经突起生长导向因子(netrin)受体家族研究进展被引量：7
- 2004年
- 神经突起生长导向因子netrin是一种分泌蛋白 ,在神经发育所需的轴突导向及细胞迁移中发挥双重导向功能———吸引或排斥 ,主要依赖于生长锥所表达的不同受体结肠癌缺失蛋白 (DCC)或UNC5同源物 (UNC5H) ,从而传递不同信息。同时 ,dcc和unc5h也是肿瘤抑制基因 ,近年来的研究显示这种双重导向功能可能归因于它们属于配体依赖性受体家族。依赖性受体的重要特征是缺乏相应配体时将诱导细胞凋亡 ,因此推测DCC和UNC5H不仅为神经元传递信号所必需 ,同时也是细胞生存因子 ,与细胞存活及正常功能的发挥密切相关。
- 余科科汪思应张成岗
- 关键词：轴突导向
