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国家自然科学基金(81172352H1617)
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
相关作者:
孙磊
魏清
张颖
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2012
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人BNIP3真核表达载体和shRNA表达载体的构建及其对肝癌细胞自噬的影响
被引量:1
2012年
目的利用人BNIP3的真核表达载体和靶向BNIP3的shRNA表达载体,研究BNIP3过表达和封闭时对肝癌细胞自噬的影响。方法从人肝癌细胞系中,通过RT-PCR扩增人BNIP3基因编码区序列,酶切后插入pcDNA3.1-His-C载体,以此构建重组pcDNA3.1-BNIP3真核表达载体。同时构建靶向人BNIP3基因的shRNA表达载体pSilencer-BNIP3。分别经测序、酶切、RT-PCR和Western blot等方法对重组载体是否构建成功进行验证。并通过采用Western blot检测自噬标志物LC3蛋白的剪切,研究BNIP3过表达和抑制时对肝癌细胞自噬的影响。结果pcDNA3.1-BNIP3和pSilencer-BNIP3分别过表达BNIP3和抑制BNIP3的表达。BNIP3过表达能够显著增加肝癌细胞的自噬;BNIP3表达受到抑制时,肝癌细胞的自噬明显减少。结论成功构建了人BNIP3的真核表达载体pcDNA3.1-BNIP3和shRNA表达载体pSilencer-BNIP3,并在人肝癌细胞系中证实BNIP3对肝癌细胞自噬的促进作用。
孙磊
魏清
张颖
韩丽辉
关键词:
BNIP3
SHRNA
自噬
肝细胞
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