国家自然科学基金(81150037)
- 作品数：6 被引量：20H指数：4
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- 阴沟肠杆菌噬菌体ФEc53的分离及鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的:以14株阴沟肠杆菌为宿主菌,从环境污水中分离噬菌体,分析其生物学特性,鉴定其分型。方法:采用双层琼脂噬斑法分离并鉴定噬菌体。纯化后的噬菌体经负染法染色,通过电镜观察其大小和形态;提取噬菌体基因组,进行酶切电泳分析;通过裂解谱的分析,确认噬菌体的特异性和裂解宿主菌范围。结果:成功分离1株裂解性噬菌体,电镜显示噬菌体的头部呈球形,直径约60nm,尾部长约130nm。琼脂糖凝胶电泳显示其基因组约40 000bp,且含多种酶切位点。特异性实验显示其呈现较窄的宿主范围。结论:分离的阴沟肠杆菌噬菌体(命名为ФEc53)属于有尾病毒目,管尾病毒科,是一种特异性高、裂解性强的毒性噬菌体。
- 王丹史红艳余静丹周佳琦李菁华孙延波
- 关键词：噬菌体阴沟肠杆菌细菌耐药
- 鲍曼不动杆菌噬菌体生物学特性的研究被引量：6
- 2013年
- 从污水中分离鉴定鲍曼不动杆菌噬菌体,并对其生物学特性进行分析,为开发针对细菌感染的噬菌体生物制剂提供前期工作。采用双层琼脂法分离可裂解鲍曼不动杆菌的噬菌体,通过负染法电镜观察噬菌体的大小和形态,将噬菌体和宿主菌以不同比例混合,测定噬菌体的最佳感染复数并观察一步生长曲线,提取噬菌体核酸进行酶切电泳分析,通过SDS-PAGE分析噬菌体的结构蛋白和非结构蛋白。成功分离3株可裂解鲍曼不动杆菌的噬菌体(分别命名为ФAb-1、ФAb-2和ФAb-3),电镜显示噬菌体的头部呈二十面体,直径约50nm,有一短尾。噬菌体ФAb-1的最佳感染复数为10-2,一步生长曲线表明噬菌体在裂解宿主菌时,潜伏期为20 min,爆发期为30 min,裂解量为190 PFU/cell。限制性酶切电泳显示噬菌体ФAb-1的基因组大小约40 kb左右,为双股环状DNA。SDS-PAGE的噬菌体蛋白电泳包括7种蛋白,分子量在29～116 ku。噬菌体ФAb-1、ФAb-2和ФAb-3对鲍曼不动杆菌具有很强的裂解毒性。根据其形态、结构和噬菌体分类法,鲍曼不动杆菌噬菌体属于有尾病毒目,足尾病毒科。
- 余静丹史红艳王丹徐花孙延波
- 关键词：鲍曼不动杆菌噬菌体
- 超滤过结合密度梯度离心纯化鲍曼不动杆菌噬菌体方法的建立被引量：5
- 2013年
- 目的探讨获得低浓度内毒素和高滴度鲍曼不动杆菌噬菌体的方法,为制备安全的噬菌体生物制剂提供参考。方法用可截留100 kD以上分子量的超滤离心管浓缩噬菌体裂解液并滤出分子量约为10 kD的内毒素,然后用蔗糖密度梯度离心纯化噬菌体浓缩液;分别测定超滤前、超滤后和纯化后的噬菌体滴度,采用鲎试验测定超滤前后内毒素的浓度,通过SDS-PAGE分析超滤前后和纯化后噬菌体蛋白的纯度。结果经超滤离心法噬菌体滴度从3.9×1010PFU/mL提高至1.68×1012PFU/mL,并可去除99.2%的内毒素;超滤过结合密度梯度离心后的SDS-PAGE可清晰呈现7种蛋白,分子量为29～100 kD。结论超滤过结合密度梯度离心是一种简便、快速浓缩和纯化噬菌体的方法,并可有效地去除裂解液中的内毒素。
- 史红艳余静丹王丹逯茵茵孙延波
- 关键词：噬菌体内毒素
- 长春地区部分医院革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的检测被引量：1
- 2013年
- 目的:分析长春地区部分医院革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的分布和类型,为抗生素的合理应用提供依据。方法:通过琼脂稀释法筛选出阿米卡星与庆大霉素的耐药菌株,采用聚合酶链式反应及序列分析的方法检测耐药菌株所携带的氨基糖苷类修饰酶基因类型。结果:69株革兰阴性杆菌对阿米卡星与庆大霉素的耐药率分别为44.9%和87.0%,其中63株(91.3%)检出氨基糖苷类修饰酶基因,基因类型包括aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ,阳性率分别为4.3%、81.2%、43.5%、33.3%和13.0%;而aac(6′)-Ⅱ基因为阴性。结论:本地区革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因主要以aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ5种类型存在,其中以aac(3)-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因最为常见。合理应用氨基糖苷类抗生素对于降低细菌的耐药性具有重要意义。
- 周佳琦卢佳睿徐花韩放孙延波
- 关键词：革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶耐药性
- 噬菌体对鲍曼不动杆菌所致小鼠肠源性脓毒症的治疗效果
- 2014年
- 目的 观察噬菌体对鲍曼不动杆菌引起的小鼠肠源性脓毒症的治疗效果.方法 采用双层琼脂法从环境中分离鲍曼不动杆菌噬菌体.通过腹腔注射氨苄青霉素和环磷酰胺的方法,同时经口感染耐氨苄青霉素鲍曼不动杆菌,建立小鼠肠源性脓毒症模型.在细菌感染前1d、感染结束后2d,以及感染结束后6d给予噬菌体治疗,观察小鼠的存活情况.另取未给予噬菌体治疗小鼠作为对照.各组分别设6只小鼠.采用成组设计的两样本均数t检验比较噬菌体治疗组和对照组小鼠外周血和肝脏内炎症因子水平,以及肝脏和脾脏内的细菌数量.结果 鲍曼不动杆菌引起肠源性脓毒症小鼠全部死亡的最小致死量为1×107 CFU/mL.在感染前、结束后2d和6 d给予噬菌体治疗,分别有2,4,3只小鼠存活,对照组全部死亡.噬菌体治疗组小鼠外周血白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏子因子（TNF）-α和IL-6水平分别为（105±6） ng/L,（105±11）ng/L和（104±12） ng/L,明显低于对照组（t=5.04,9.05和9.33,P＜0.01）;噬菌体治疗组小鼠肝脏内的IL-1 β和TNF-α水平分别为（104 ±9） ng/L和（104±11）ng/L,亦低于对照组（t=13.70和12.80,P＜0.01）,但IL-6水平治疗组与对照组比较差异无统计学意义（t=1.06,P＞0.05）;噬菌体治疗组小鼠肝脏和脾脏内细菌数量分别为（2.9±1.3）×103CFU/g和（8.3±7.6）×102 CFU/g,明显低于对照组（=9.16和8.96,P＜0.01）.结论 噬菌体治疗鲍曼不动杆菌引起的肠源性脓毒症确切有效.
- 李菁华余静丹史红艳王丹逯茵茵张哲孙延波
- 关键词：细菌噬菌体鲍氏不动杆菌脓毒症
- 噬菌体疗法在耐药性细菌感染中应用的研究进展被引量：6
- 2013年
- 细菌耐药性已成为全球性的公共卫生问题,特别是"超级细菌"成员的不断增加使针对细菌感染的抗生素疗法面临前所未有的挑战。最近,噬菌体疗法重新受到人们的关注,并取得一些重要研究进展。本文作者就早期噬菌体的研究情况、近年来噬菌体疗法在动物实验中的应用、临床试验的最新实例和噬菌体疗法的优势及局限进行综述。
- 李菁华孙延波
- 关键词：噬菌体细菌耐药
