重庆市自然科学基金(2007BB5299)
- 作品数：3 被引量：9H指数：3
- 相关作者：孙晓川张晓冬吴海涛江涌林斌更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆市急救医疗中心泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金四川省教育厅青年基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人载脂蛋白Eε3等位基因的克隆及表达被引量：3
- 2008年
- 目的:克隆人载脂蛋白E(Apolipoprotein E,APOE)ε3等位基因,测定序列,并构建带有人源性APOEε3等位基因的真核表达载体。方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胎儿脑组织中克隆得到APOEε3等位基因,与PMD19-T载体连接,再酶切PMD19-T-APOEε3,获得APOEε3基因,然后将其与表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体。重组质粒转染293T细胞后,在荧光显微镜下观察EGFP的表达,并用Western-Blot的方法检测目的蛋白在293T细胞中的表达。结果:经酶切和DNA测序证明APOEε3基因序列正确,真核表达载体构建成功。将重组质粒转染293T细胞,在转染后的细胞中检测到目的蛋白的表达。结论:成功构建了pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体,该表达载体能在真核细胞中正确表达。
- 郐莉江涌孙晓川郑履平
- 关键词：载脂蛋白E等位基因基因克隆真核表达
- 载脂蛋白E基因多态性对星形胶质细胞损伤早期胞内Ca^2＋浓度的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨载脂蛋白E（apolipoprotein E,蛋白：apoE,基因：APOE）基因多态性与星形胶质细胞损伤后早期胞内Ca^2＋浓度的相关性.方法 （1）通过RT-PCR及定点突变技术扩增人源性APOE三种等位基因的CDS区,并构建pEGFP-N1-APOE重组质粒;（2）APOE基因敲除鼠星形胶质细胞的原代培养、鉴定;脂质体法将重组质粒转染入星形胶质细胞,并筛选稳定表达APOE信息的细胞株;（3）利用划痕致伤构建细胞损伤模型,于伤后12,24,48及72 h时相点,利用激光共聚焦显微镜（LCSM）技术检测各基因型细胞内Ca^2＋的荧光强度.结果 各型细胞相对于自身对照（致伤前）,Ca^2＋荧光强度变化差异有统计学意义（P＜0.05）.伤后12 h,三组细胞内Ca^2＋荧光强度较弱,组间差异无统计学意义（P＞0.05）;伤后24,48及72 h,三组细胞Ca^2＋荧光强度进行性增加,且ε4组明显高于ε2和ε3组（P＜0.05）.结论 损伤后早期,携带APOEε4等位基因的星形胶质细胞内Ca^2＋高于ε2和ε3型,提示ε4携带体可能通过伤后Ca^2＋通道的激活导致急性期伤情加重及不良预后.
- 吴海涛江涌张晓冬夏海坚唐兆华孙晓川
- 关键词：载脂蛋白E基因多态性星形胶质细胞激光共聚焦显微镜
- 载脂蛋白E基因对轻、中型创伤性脑损伤急性期脑电活动的影响被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨载脂蛋白E基因（APOE）对轻、中型创伤性脑损伤后急性期脑电活动的影响.方法 收集112例轻、中型创伤性脑损伤患者的临床资料,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法（PCR-RFLP）检测APOE基因型;在伤后1周内对全部患者进行两次脑电图检测,采用定性及定量的方法判断脑电活动的变化;对APOE分型结果、脑电图及临床资料等应用SPSS 11.5统计学软件分别进行x2检验、方差分析和Logistic回归分析.结果 112例患者的APOE分型分布符合遗传学Hardy-Weinberg定律;在22例APOEε4携带者中有12例（55%）脑电图加重,其比率明显高于非ε4携带者（18%,P＜0.01）;通过定量指标的分析发现,经过4～5 d的正规治疗,携带APOEε4的患者脑电图慢波增多（P＜0.01）,而携带APOEε2、APOEε3的患者脑电图慢波减少（P＜0.05）,APOEε2携带者前后两次脑电图慢波减少的程度较APOEε3携带者更明显（P＜0.05）.单因素和多因素Logistic回归分析均提示,APOEε4是脑电图加重的危险因素.结论 APOEε4等位基因是轻、中型脑损伤患者急性期脑电图加重的危险因素,而APOEε2有利于脑电活动的恢复.
- 印晓鸿孙晓川张晓冬但炜刘科吴海涛刘福英贺绪智林斌
- 关键词：载脂蛋白E类脑电图
