广东省科技计划工业攻关项目(2011B010500018)
- 作品数:6 被引量:26H指数:3
- 相关作者:柯野曾松荣赵翠燕许钦坤伍嘉慧更多>>
- 相关机构:韶关学院广东轻工职业技术学院华南理工大学更多>>
- 发文基金:广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学轻工技术与工程环境科学与工程农业科学更多>>
- 米曲霉碱性蛋白酶基因的克隆表达及水解特性被引量:8
- 2012年
- 米曲霉碱性蛋白酶对植物蛋白具有高效的水解能力和较好的脱苦作用.为了便于大量获得该酶以利于工业上的应用,文中通过RT-PCR克隆获得米曲霉碱性蛋白酶基因,将之转化到毕赤酵母KM71菌株中并成功表达,之后用该酶进行牛胰岛素氧化链B链及大豆和花生蛋白的水解试验.结果显示:在10 L发酵罐中诱导表达时,发酵液中重组碱性蛋白酶的酶活达4100U/mL;该蛋白酶最适反应pH值和温度分别为8.5~9.5和50℃,在pH值为6.0~10.0和温度低于40℃时具有较好的稳定性;该酶具有广泛的肽键选择性;该酶对大豆和花生蛋白显示出了强于部分商品化蛋白酶的水解能力.以上结果表明:该重组蛋白酶具有较大的开发利用潜力.
- 柯野陈丹李家洲谢明权罗晓春
- 关键词:米曲霉毕赤酵母克隆水解特性
- 土曲霉碱性蛋白酶基因的克隆及其生物信息学分析
- <正>蛋白酶是一类重要的工业用酶,占整个工业用酶量的60%以上,其广泛应用于食品加工、皮革、医药和化工等行业。目前商业化的蛋白酶主要来源于细菌和植物,来源于真菌的较少,而真菌蛋白酶对植物蛋白的水解效率高、无苦味,水解产物...
- 曾松荣柯野伍嘉慧李嘉盛林映君
- 文献传递
- 一株产蛋白酶菌株的筛选鉴定及酶学性质分析被引量:10
- 2015年
- 通过测量比较在牛奶平板上产生水解圈的大小,从韶关土壤中分离筛选获得一株产蛋白酶的ms2菌株。对该菌株的形态结构、生理生化特性以及16S rDNA序列的比对分析,鉴定该菌株为粘质沙雷菌(Serratia marcescens)。对该菌株进行液体发酵,其发酵液中的蛋白酶最适反应p H值为10.0,表明发酵液中含有碱性蛋白酶;最适反应温度45℃,45℃保温处理100 min后,酶活性仍保留70%以上,表明蛋白酶具有较强的热稳定性。1 mmol/L的Mn2+对酶有激活作用,但1 mmol/L的Cu2+和Fe2+对酶具有明显的抑制作用;EDTA对蛋白酶也具有明显的抑制作用,说明发酵液中含有金属蛋白酶。与Alcalase碱性蛋白酶相比,发酵液中的蛋白酶对大豆分离蛋白水解能力更强。在单因素试验中,干酪素和蔗糖分别为氮源和碳源时,发酵液蛋白酶的活性最高。
- 柯野伍嘉慧曾松荣周威
- 关键词:粘质沙雷菌蛋白酶酶学性质
- 米曲霉酸性蛋白酶Ap的结构分析被引量:2
- 2016年
- 米曲霉(Aspergillus oryzae)酸性蛋白酶与部分商品化的蛋白酶相比,具有对大豆蛋白水解效率高且水解产物苦味弱的特性。作者采用RT-PCR技术克隆获得酸性蛋白酶(Ap)基因,结合生物信息学手段,对Ap进行分析与预测。结果表明:Ap基因对密码子使用频率具有偏好性,特别是第3位密码子对GC碱基的使用频率高,达到74%;编码404个氨基酸残基。Ap属于胞外天冬氨酸蛋白酶。以海枣曲霉(A.phoenicis)的酸性蛋白酶(PDB code:1IBQ)作为模板同源建模结果可知,Ap分子至少能与2个Zn2+结合,内含1个二硫键、163个氢键、35个盐碱。该酶与1IBQ相比空间结构总体相似,部分重要位点(如flap环、转角和ψ-loops)的氨基酸残基较为保守。
- 柯野李嘉盛曾松荣朱兆静黄小惠
- 关键词:米曲霉酸性蛋白酶
- 耐镉菌株的筛选及生物学特性被引量:5
- 2015年
- 从污染土壤中,分离出1株能高度抗镉和吸附镉的菌株S-1,经初步鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。对其生物学特性进行研究,结果表明,该菌株在液体细菌培养基中耐镉(Cd)浓度高达600 mg/L;菌株S-1对Cd2+有较好的吸附效果,吸附率高达75.4%。
- 许钦坤赵翠燕
- 关键词:生物学特性
- 总状毛霉丝氨酸蛋白酶基因结构和功能的生物信息学分析被引量:1
- 2012年
- 利用PCR和RACE(cDNA末端快速扩增)技术从总状毛霉中克隆获得1个丝氨酸蛋白酶新基因,利用生物信息学方法对该基因序列、编码的酶序列以及酶性质和结构进行预测。结果表明:该基因编码区序列长1 421bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码由429个氨基酸残基组成的多肽;对该多肽的组成和进化分析表明,其成熟肽属于蛋白酶K家族的胞外蛋白酶;通过同源建模结构分析表明,该酶没有二硫键,有152个氢键和29个盐键,酶的Glu190、Ala192和Asp215残基与一个Ca2+相结合,酶活性位点残基Asp44和Ser241溶剂可及表面积较大,分别达到0.211 42和3.309 32;该酶的底物结合区域中,S1和S4口袋结构明显,S2次之,S3最不明显,部分组成S1和S4口袋的氨基酸残基不保守,这可能使该酶具有独特的水解性。上述结果可为该蛋白酶基因的异源表达和结构与功能关系等方面的研究提供参考。
- 柯野曾松荣郑秋桦
- 关键词:丝氨酸蛋白酶基因生物信息学分析
- 粤北三黄鸡β-防御素基因的表达及其生物活性研究
- 2013年
- 采用RT-PCR方法从三黄鸡肝脏中扩增β-防御素Gal-6基因的cDNA片段,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAL-6,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21进行原核表达。结果表明,成功获得201 bp的鸡β-防御素基因,SDS-PAGE电泳分析表明,原核表达的重组鸡融合蛋白分子质量约为32 kD。此外,表达的该重组蛋白对金黄色葡萄球菌有较高抗菌活性。
- 许钦坤赵翠燕
- 关键词:Β-防御素三黄鸡生物活性