北京市自然科学基金(JS96004)
- 作品数：17 被引量：277H指数：9
- 相关作者：朱汝南钱渊邓洁赵林清王芳更多>>
- 相关机构：首都儿科研究所首都医科大学附属北京朝阳医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金北京市科技新星计划北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 运用单管多重聚合酶链反应检测海南黎族人群中三种缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因被引量：11
- 2004年
- 目的 建立单管多重聚合酶链反应 (mPCR)技术并将其运用于筛查海南黎族人群中 3种最常见的缺失型α 珠蛋白生成障碍性贫血基因 (α 地中海贫血基因 ,简称α 地贫基因 )。方法 在研究成功检测 3种α 地贫基因 ,即 SEA、-α3 .7、-α4.2 的 3个PCR反应的基础上 ,建立并优化单管mPCR反应的条件 ,检测了 4 0例已知基因型的α 地贫患者基因 ,并筛查、诊断了 116份海南黎族人血标本。结果 运用新建立的单管mPCR检测 4 0例α 地贫患者DNA ,所得基因型与运用 3个分别的PCR技术及Southern印迹杂交技术所得到的结果一致。在 116份海南黎族人中 ,检出 -α3 .7和 -α4.2缺失型基因的携带频率高达 38.0 % ,且 -α4.2 稍高于 -α3 .7。但在该组标本中没测到 SEA。结论 单管mPCR技术准确率及灵敏度都很高 ,且简便易行。海南黎族人群 -α3 .7和 -α4.2 携带频率居国内最高。
- 刘敬忠欧采莹王立荣肖白黄莉嘉周艳陈历昌
- 关键词：聚合酶链反应黎族人群基因缺失常染色体隐性遗传病
- α地中海贫血的基因诊断及产前诊断研究被引量：7
- 2005年
- 目的建立同时检测中国人中最常见的3种α地中海贫血(地贫)基因缺失的单管多重PCR(mPCR)技术,并运用于河北省一个α地贫家系的基因诊断与产前诊断。方法mPCR包含7条引物,运用mPCR、凝胶电泳及DNA测序技术进行α地贫的基因诊断和胎儿羊水细胞DNA的产前基因诊断。结果运用mPCR技术检测了42份α地贫患者DNA标本,证明其能准确、灵敏、快速、简便地诊断出完整的α珠蛋白基因型。查明河北省1例α地贫患儿为--SEA和HbCS双重杂合子,该家系第2胎胎儿羊水细胞DNA检查证明为完全正常胎儿,产后检测与产前诊断结果相符。结论所建立的α地贫基因诊断mPCR技术可用于3种缺失型α地贫的快速诊断和产前诊断。我国北方也有少量散在α地贫患者及家系,应引起重视,以免贻误诊断和治疗。
- 刘敬忠王立荣黄莉嘉肖白周艳
- 关键词：产前诊断基因诊断Α地中海贫血羊水细胞凝胶电泳DNA测序技术
- 2001-2005年北京地区婴幼儿甲型流感病毒感染的研究被引量：23
- 2006年
- 目的通过连续的监测,了解北京地区婴幼儿甲型流感的流行规律。方法2001年- 10月-2005年8月,采集门诊和住院急性呼吸道感染患儿的标本7338份,分别经传代狗肾细胞进行病毒分离和(或)间接免疫荧光、血凝抑制试验进行流感病毒型别鉴定,采用RT—PCR方法,扩增甲3型流感病毒流行株的血凝素基因HA1区,进行序列分析。结果(1)从7338份临床标本中,检出甲型流感病毒347份,总阳性率为4．7％。347份甲型流感病毒中,甲1型48份(13．8％);甲3型273份(78．7％);暂时无法鉴定亚型的26份(7．5％)。(2)2001-2004年的流行比较局限在当年10月至次年4月,2004年8月-2005年8月均有甲型流感病毒被检测到,在夏季仍可检测到相当多的甲型病毒,尤其是2005年8月甲3型的阳性率达到14．2％,相当于2003-2004年的流行最高峰。4年中每个流行季节都以甲3型流感病毒的流行为主,只在2001-2002年和2004-2005年的流行季节出现了甲1型流感病毒的流行峰。(3)甲1和甲3型流感病毒在门诊患儿中的阳性检出率均高于住院患儿的阳性检出率。在2003年11月-2005年8月期间的236例甲3型感染患儿中,≤2岁者占46．6％,>5岁者占14．0％;而31例甲1型感染患儿中≤2岁者只占6．5％,>5岁者占48．0％。(4)对1998-2005年的甲3型流感病毒血凝素基因HA1区的序列分析显示,每一年的甲3型病毒都会出现位于其抗原决定簇关键位点的氨基酸突变。结论2001年10月-2005年8月,北京地区婴幼儿中有甲1和甲3型流感不同程度的流行,甲3型为优势流行株;2004-2005年北京地区甲型流感呈全年的流行态势;氨基酸序列分析提示,1998-2005年期间甲3型流感病毒的抗原性在持续不断地发生漂移。
- 朱汝南钱渊王芳邓洁赵林清廖斌车莉
- 关键词：流感病毒流感婴儿学龄前
- 北京地区2000—2004年分离的呼吸道合胞病毒B亚型株G蛋白基因的序列分析被引量：6
- 2006年
- 目的 了解近年来北京地区流行的B亚型呼吸道合胞病毒（BSV）G蛋白的基因特征。方法 2000年冬季至2004年冬季自首都儿科研究所附属儿童医院收集的急性呼吸道感染患儿呼吸道标本，从中分离到B亚型RSV毒株，每年随机选取1至2株毒株，用RT-PCR扩增其G蛋白全基因后克隆至pBS-T载体中，筛选出阳性克隆后测序，并与B亚型标准株（CH18537）和文献报道的毒株序列进行比较分析。结果 所测毒株G蛋白全基因核苷酸长度分别为915、921和981bp，推导的氨基酸长度分别为292、293、312和315从。分离株与B亚型标准株CH18537间存在着明显的差异，CH18537株同分离株间的核苷酸的同源性为91．9％～93．7％，氨基酸的同源性只有85．0％～89．0％。分离株间核苷酸的同源性为93．4％～98．8％，氨基酸的同源性为88．2％～98．6％。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端，而胞内区和跨膜区相对保守。此外，在进行G蛋白基因分析的8株B亚型分离毒株中，我们发现有3株BSVG蛋白在490～495位核苷酸缺失，3株RSVG蛋白在c末端791位后出现了60个核苷酸的插入，导致C末端259位后出现20个氨基酸的插入。这60个核苷酸与相邻的前60个核苷酸高度重复，只出现3至4个核苷酸的差异。该3株分离株与文献报道的有60个核苷酸插入的两株（S00-4和BA4128／99B）核苷酸和氨基酸同源性分别为97．5％～98．6％和95．5～98．1％，在插入的20个氨基酸中，有高达50％（9～10个氨基酸）左右的丝氨酸和苏氨酸氧连接的糖基化位点。结论 RSVB亚型G蛋白基因变异存在着多样性，分离株既有核苷酸替代，又有基因缺失和插入，还有糖基化位点的改变和氨基酸长度的改变。这种变异使G蛋白高度糖基化，提示最终可能导致病毒抗原性的改变。北京分离的有60个核苷酸插入的变异株与日本及西班牙报道�
- 邓洁朱汝南钱渊赵林清王芳
- 关键词：呼吸道合胞病毒G蛋白核苷酸氨基酸
- 两种常见缺失型α-地中海贫血快速检测技术的研究被引量：9
- 2001年
- 目的 建立简便快速准确可推广使用的检测α 地中海贫血 (α Thal)右侧缺失型 ( α3 .7)和左侧缺失型 ( α4 .2 )的聚合酶链反应 (PCR)方法。方法 自行研究设计两组引物。优化PCR反应条件。PCR反应产物用 1%琼脂糖凝胶电泳分离 ,溴化乙啶染色 ,UVP凝胶成像仪下观察记录电泳图谱。结果 运用引物A′、B′、C3进行PCR ,出现 170 0bp扩增带表示 α3 .7,出现 190 0bp扩增带表示α 珠蛋白基因正常或为野生型。二条扩增带同时出现表示是 α3 .7缺失杂合子。无任何扩增带表示是东南亚型缺失纯合子。运用引物G′、E、F′进行PCR ,根据出现 15 80bp扩增带和 1180bp扩增带可诊断为 α4 .2 ,还可区分杂合子与纯合子。结论 本研究设计的两组引物及优化的PCR条件 ,可以简便准确地检测出α Thal标本中有无 α4 .2 和 α3 .7。
- 刘敬忠周桔王立荣周艳
- 关键词：Α-地中海贫血聚合酶链反应
- 重组腺病毒-p53基因治疗患者基因变异和血清抗体检测及其临床意义被引量：1
- 2005年
- 目的检测应用重组人腺病毒-p53(SBN-1)基因抗癌注射液的临床试验病例的机体免疫反应和组织样本p53基因变异状况,以客观评价临床疗效。方法通过对22例SBN-1治疗前后患者肿瘤组织样本的p53基因进行分析,明确用于重组腺病毒p53基因联合放疗二期临床试验的肿瘤标本中p53基因的变异状况并检测癌症患者血清中抗SBN-1抗体水平;用免疫组织化学技术检测p53基因的表达水平;显微切割技术分离微量肿瘤组织制备DNA进行聚合酶链反应扩增;变性高效液相色谱技术(DHPLC)和DNA测序技术检测内源性p53基因突变的分布和类型。采用酶联免疫吸附实验检测血清中抗腺病毒抗体水平、血清中腺病毒IgG和IgM抗体水平。结果有p53突变的病例中完全缓解率较高,通过免疫组织化学检测阳性率为40%(6/15),DHPLC和DNA测序检测点突变为32%(7/22)。实验结果也表明试验者绝大多数近期未感染过腺病毒,IgM阳性率低于6%(1/16),接受SBN-1治疗的患者随注射SBN-1次数增加,血清中抗SBN-1特异性抗体水平升高。结论通过对入组病例临床样本p53基因变异和SBN-1抗体水平的检测,为客观评价临床疗效提供了基因和蛋白水平的指标。
- 赵敏肖绍文杨静贤张珊文吕有勇
- 关键词：P53基因抗体基因变异高效液相色谱
- 缺失型α-地中海贫血的基因诊断新技术研究被引量：21
- 2001年
- 目的 建立诊断我国最常见的三种缺失型α 地中海贫血 (α 地贫 ) ,即东南亚型缺失(- - SEA)、右侧缺失 (-α3 .7)和左侧缺失 (-α4 .2 )的PCR技术。方法 设计三组PCR引物 ,优化PCR反应条件 ,运用PCR、琼脂糖凝胶电泳、UVP凝胶成像技术 ,根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α 地贫。结果 成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子 ,结果与Southernblotting分析一致。完成 42例α 地贫样本的基因诊断。结论 本研究所建立的检测α 地贫缺失型的技术方法 ,准确、简便 ,重复性好 ,便于推广应用。
- 刘敬忠周桔王立荣周艳
- 关键词：Α-地中海贫血聚合酶链反应基因诊断缺失型Α-地中海贫血
- 从单个细胞扩增靶基因片段的技术被引量：2
- 2002年
- 目的 建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术。方法 利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞 ,各置于 0 2ml簿壁反应管的裂解液中 ,合成针对抑癌基因P53第5～ 9外显子 (e)的引物 ,运用 1 5mer高度随机引物或一个特异引物进行单个细胞的整个基因组DNA或特异靶片段的预扩增 ,再以其为模板进行巢式聚合酶链反应 (PCR)扩增P53基因第e5～ 9的 1 90 0bp片段及含第 5 ,6外显子的 580bp片段。并用ABI 377测序仪测定其序列。结果 运用稀释至 0 0 1ng的基因组DNA扩增 1 90 0bp片段 ,优化PCR的条件。分别从 30个单个纤维母细胞扩增上述 1 90 0bp片段 ,1 0个获得 1 90 0bp片段 ,成功率为 33 %。扩增 580bp片段 ,则阳性率可达 60 %。序列分析证明确为人P53基因第 5 ,6外显子序列。结论 运用本实验室建立的技术可从人的单个细胞扩增特定靶基因片段 ,并测定其序列 。
- 刘敬忠王立荣
- 关键词：巢式聚合酶链反应基因扩增单细胞基因诊断
- 实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析在α-地中海贫血基因诊断中的价值被引量：22
- 2005年
- 目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α地中海贫血基因型的技术。方法运用SYBRGreen1和ABI7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应(SYBRQPCR),同时进行融解曲线(D.C)和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型,即以该峰值≥Cutoff值定为PCR结果阳性。将PCR产物重组到T载体,筛选到含正确扩增片段的克隆,以梯度稀释重组质粒DNA为模板,进行SYBRQPCR得出标准曲线。从而定量未知标本。结果优化了3个SYBRQPCR反应的引物及其浓度,热循环条件等。检测SEA等位基因的PCR产物长800bp,Tm=82.5℃±1℃。αα等位基因的PCR产物长206bp,Tm=83.0℃±1℃。非SEA等位基因的PCR产物长436bp,Tm=84.0℃±1℃。重组质粒拷贝数在1至105范围内,其对数值与CT值均呈良好线性关系。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上。联合运用3个SYBRQPCR反应可以为SEA缺失携带者、缺失型HbH病、非缺失型HbH病、α地贫2纯合子、Bart′s水肿胎儿综合征做出基因诊断,并可用于产前诊断。结论该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点,适于临床推广应用。
- 刘敬忠闫梅王立荣王战勇周艳肖白
- 关键词：实时聚合酶链反应Α-地中海贫血缺失型Α-地中海贫血实时荧光聚合酶链反应基因诊断实时荧光定量聚合酶链反应
- 2000年冬-2006年春北京地区急性呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒的监测被引量：114
- 2006年
- 目的对北京急性呼吸道感染患儿进行呼吸道合胞病毒(RSV)的监测并进行亚型分析,探讨其流行规律。方法2000年11月-2006年3月,于首都儿科研究所附属儿童医院采集因急性呼吸道感染就诊的门诊及住院的患儿咽拭子或鼻咽分泌物标本10048份,接种于Hep-2细胞进行病毒分离,同时用免疫荧光法对鼻咽分泌物标本进行呼吸道病毒抗原的快速检测,对部分RSV阳性的标本用RT-PCR进行了亚型鉴定。结果(1)在10048份标本中,有2286份为RSV阳性,阳性检出率为22·8%。其中病房标本7176份,RSV阳性2153份,阳性检出率为30·0%;门诊标本2872份,RSV阳性133份,阳性检出率为4·6%。(2)2000-2001年冬春、2002-2003年冬春、2004-2005年冬春RSV的阳性检出率分别为14·0%、18·2%和20·4%,而2001-2002年冬春、2003-2004年冬春和2005-2006年冬春RSV的阳性检出率分别为42·3%、41·0%和40·5%。(3)对938份RSV阳性标本的亚型监测结果:A亚型691份,占73·7%,B亚型247份,占26·3%,2000-2001、2004-2005年冬春季RSV感染以B亚型为主;而2001-2002、2002-2003、2003-2004年冬春季以A亚型为主;2005-2006年为A、B亚型同时流行。结论RSV是冬春季婴幼儿下呼吸道感染的主要病毒病原,RSV呈现出隔年高峰的流行趋势,RSVA、B亚型是交替出现的,并且有时以相近的比例同时出现。
- 邓洁钱渊朱汝南王芳赵林清
- 关键词：呼吸道感染呼吸道合胞体病毒感染呼吸道合胞病毒
