国家自然科学基金(30700369)
- 作品数：19 被引量：52H指数：4
- 相关作者：范秋灵王力宁冯江敏马健飞姜奕更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学附属第四医院中国医科大学更多>>
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- 多配体蛋白聚糖4是糖尿病肾病的候选基因被引量：2
- 2012年
- 目的在2型糖尿病肾病（DN）白蛋白尿易感基因定位的基础上，进一步筛选白蛋白尿易感基因位点（UA-1）区域附近的候选基因。方法提取20周龄雄性KK／Ta（n=3）和BALB／c（n=2）小鼠肾脏总RNA，应用Affymetrix Murine GenomeU74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱。选择UA-1区域的差异表达基因多配体蛋白聚糖4（syndecan-4），竞争性RT-PCR验证基因芯片的结果。提取KK／Ta、BALB／c小鼠的基因组DNA，进行syndecan．4基因编码区和启动子区域的序列分析。结果在2型糖尿病KK／Ta小鼠UA-1区域附近存在着约10个差异表达基因。其中syndecan-4在20周龄KK／Ta小鼠肾脏中的表达上调，为BALB／c小鼠的26．1倍。在syndecan．4基因编码区存在2个基因多态性，分别为A93C和T216C多态性，2者均为同义突变。在syndecan-4基因启动子区域存在3个基因多态性，分别为-T263C、-T396C与-G669A多态性。TATA框位于转录起始位点上游321bp处，-T263C处恰好为转录因子Clox的结合位点。结论syndecan-4基因位于2型糖尿病UA-1附近区域，在20周龄KK／Ta小鼠肾脏中的表达明显上调，是DN的候选基因。syndecan-4启动子处的基因多态性可能为其差异表达的原因。
- 范秋灵李卅立蒲实郭佳音岳媛张玉侠冯江敏马健飞姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病多态性单核苷酸候选基因
- 自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱和氯沙坦治疗效应被引量：4
- 2012年
- 目的分析糖尿病肾病（DN）发病过程中肾小球miRNA表达谱的变化，观察血管紧张素受体拮抗剂（ARB）氯沙坦对DN肾小球miRNA表达谱的影响，确认在DN发病过程中发挥关键作用的miRNA。方法8周龄KKAy小鼠随机分为氯沙坦治疗组（10mg kg-1·d-1）和非治疗组，C57BL／6小鼠作为正常对照组。于20周龄检测体质量、随机血糖、尿微量白蛋白、尿肌酐，观察肾脏形态改变。应用磁珠灌注法分离肾小球，提取总RNA，应用Affymetri。GeneChipmiRNA芯片，分析KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱的变化，以及氯沙坦对microRNA表达谱的影响。结果KKAy小鼠的体质量和血糖较正常对照C57BL／6组小鼠显著升高（均P〈0．05），氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠的尿白蛋白／肌酐比值[（539．71±100．23）mg／g比（728．00±177．19）mg／g，P〈0．051和肾脏病理损害，而对血糖无影响。miRNA芯片分析结果发现，与正常对照C57BL／6小鼠相比，20周龄KKAy小鼠肾小球内10个miRNA的表达上调；12个miRNA的表达下调。与KKAy非治疗组小鼠相比，20周龄氯沙坦治疗组KKAy小鼠肾小球内共有4个miRNA表达下调，其中miR-503和miR-181d在KKAy非治疗组小鼠肾小球内的表达显著上调，氯沙坦治疗可抑制其过表达。结论miR-503和miR-181d在糖尿病KKAy小鼠肾小球内的表达显著上调，氯沙坦治疗可抑制其在糖尿病状态下的异常表达，可能为糖尿病肾病新的治疗靶点。
- 范秋灵张丛笑刘晓丹杨刚姜奕董雪竹冯江敏马健飞张玉侠王力宁
- 关键词：糖尿病肾病肾小球微小RNASKKAY小鼠
- 坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型和2型受体表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型受体(AT1)和2型受体(AT2)表达的影响。方法:KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组;早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4mg.kg-1.d-1)治疗;晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠。测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量,计算总肾小球面积(WGA)、肾小球丛面积(GTA),细胞外系膜基质面积(EC-MA)和肾小球内细胞核数目(NIGCN)。免疫荧光和免疫组化染色检测肾脏中AT1和AT2的表达。结果:8周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率显著增加[(427.49±89.37)mg/g vs.(9.54±3.25)mg/g,P<0.01],WGA、GTA、ECMA和NIGCN增多,肾小球内AT1的表达增加,AT2的表达减少。坎地沙坦治疗显著减少KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率[早期治疗组(32.18±9.41)mg/g,晚期治疗组(53.20±7.26)mg/g,P<0.01],减轻肾脏病理损害,抑制AT1的表达,上调AT2的表达,早期治疗组和晚期治疗组的作用无显著性差异。结论:KK/Ta小鼠肾脏中AT1受体表达增加,AT2受体表达减少。坎地沙坦治疗能够抑制AT1受体、上调AT2受体的表达,发挥其减少白蛋白尿,减轻糖尿病肾病病理损害的肾脏保护作用。
- 范秋灵肇晓明蒲实李卅立杨刚姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病坎地沙坦血管紧张素1型受体
- 坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK／Ta小鼠肾脏晚期糖基化终末产物形成及其受体表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK／Ta小鼠肾脏晚期糖基化终末产物形成及其受体（RAGE）表达的影响。方法KK／Ta小鼠（n=72）随机分为非治疗组（n=24）；早期治疗组（n=24）：自6周龄起经口予坎地沙坦[4mS／（kg·d）]治疗；晚期治疗组（n=24）：自12周龄起予坎地沙坦治疗。正常对照组采用BALB／c小鼠（n=24）。应用免疫荧光和免疫组化染色检测肾脏中晚期糖基化终末产物一羧甲基赖氨酸（CML）、RAGE蛋白的表达，竞争性RT-PCR检测RAGEmRNA的表达，同时测定尿白蛋白排泄率，血压和糖耐量等临床指标。结果28周龄KK／Ta小鼠尿白蛋白／尿肌酐比率显著增加[（427．494±89．37）mg／gvs（9．544±3．25）mg／g，P〈0．01]，足细胞RAGEmRNA和蛋白表达上调，CML的形成增加。坎地沙坦治疗显著减少了KK／Ta小鼠尿白蛋白／尿肌酐比率[早期治疗组（32．184±9．41）mg／g，晚期治疗组（53．204±26）mg／g，P〈0．01]，抑制肾脏RAGE mRNA和蛋白的表达，减少CML的形成，但早期治疗组和晚期治疗组的作用比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏RAGE的表达，阻断AGEs-RAGE的相互作用，减少AGEs的生成，发挥其降低尿白蛋白排泄率和改善肾脏病理损害的保护作用。
- 范秋灵肇晓明蒲实李卅立杨刚张丛笑姜奕王力宁
- 普罗布考对结缔组织生长因子在系膜细胞中表达的调节被引量：3
- 2011年
- 结缔组织生长因子（CTGF）是一种相对分子质量为36000～38000的分泌多肽，在包括肾脏在内的多种不同器官中可致纤维化病变。CTGF可诱导人肾小球系膜细胞产生与糖尿病肾病相关的病理变化，如增加细胞外基质积聚及诱导细胞周期停滞在G1晚期等。CTGF在糖尿病肾病中的作用及如何调控CTGF表达为当前研究热点。普罗布考是一种降脂药物，并具有抗增殖活性，
- 杜娟刘晓丹王力宁范秋灵周红丽冯欣
- 关键词：结缔组织生长因子人肾小球系膜细胞细胞外基质积聚相对分子质量CTGF
- 2型糖尿病患者肾脏损害的临床病理分析
- 2010年
- 糖尿病。肾脏疾病（DKD）是糖尿病常见的j大微血管并发症之一，其主要临床表现为蛋白尿，但大量研究表明2型糖尿病合并蛋白尿并非均为DKD。2005年美国糖尿病协会（ADA）和2007年美国肾脏病基金会的“肾脏病生存质量指导”（KDOQI）提出了临床诊断及排除DKD的标准川。本研究依据指南提供的方法，筛查2型糖尿病合并肾损害患者，对61例临床疑似为非糖尿病肾脏疾病（NDRD）的患者行肾活检检查，分析其临床资料和肾活检病理检查结果，以明确肾脏疾病的诊断，并给予合理的治疗。
- 李辉王娟王力宁刘林林杜娟范秋灵李子龙马健飞冯江敏
- 关键词：病理分析肾脏损害糖尿病肾脏疾病肾活检病理
- 坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏硝化氧化应激的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾内硝化氧化应激的影响及其作用机制。方法:KK/Ta小鼠随机分为(1)非治疗组;(2)早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4mg·kg-1·d-1)治疗;(3)晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化和免疫荧光染色检测肾脏中硝化氧化应激的标志物硝基酪氨酸,诱导型(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,竞争性RT-PCR检测iNOS和eNOSmRNA的表达。同时测定尿白蛋白排泄率,血压和糖耐量等临床指标。结果:28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加,肾脏iNOSmRNA和蛋白表达上调,硝基酪氨酸的形成增加。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率,抑制肾脏iNOSmRNA和蛋白的表达,减少硝基酪氨酸的形成,早期治疗组和晚期治疗组的作用差异无统计学意义。4组小鼠eNOSmRNA和蛋白的表达水平无差异。结论:坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏iNOS的表达,抑制过氧亚硝基阴离子的形成,抑制硝化氧化应激反应,发挥其降低尿白蛋白排泄率等肾脏保护作用。
- 范秋灵蒲实李卅立董雪竹张丛笑杨刚姜奕王力宁
- 关键词：坎地沙坦过氧亚硝基阴离子诱导型一氧化氮合酶
- 中国汉族人群糖尿病肾病ACE基因I/D多态性的Meta-分析被引量：3
- 2012年
- 【目的】综合评价中国汉族人群血管紧张素转换酶(angiotensin convertion enzyme,ACE)基因多态性与糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的相关性。【方法】通过检索文献数据库收集ACE基因多态性与中国汉族人群DN相关性的文献。应用Stata11.0统计学软件运用Meta-分析法对各研究结果进行一致性检验和数据合并,并评估发表偏倚。【结果】通过37项研究Meta分析,结果显示,隐性模型下DD基因型相对于DI+II基因型的OR值为1.96(95%CI,1.72～2.22);显性模型下DI+DD基因型相对于II基因型的OR值为1.78(95%CI,1.49～2.12),差异具有统计学意义。【结论】ACE基因I/D多态性与我国汉族人群DN的易感性相关。
- 刘晓丹范秋灵姚丽朱新旺刘强王力宁
- 关键词：血管紧张素转换酶糖尿病肾病META分析
- 自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏损害的特征与演变被引量：9
- 2011年
- 目的观察自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠糖尿病早期肾损害的特征和演变,旨在探讨其在糖尿病肾病研究中的应用价值。方法选择8周龄雄性KKAy小鼠和C57BL/6小鼠各20只,分别于8周龄、20周龄测定血糖、尿微量白蛋白、尿肌酐,并留取肾脏标本,于光镜及电镜下观察其肾脏病理特点。结果不同周龄KKAy小鼠体质量、随机血糖均高于对照组C57BL/6小鼠(P<0.05)。20周龄KKAy小鼠尿白蛋白排泄率显著高于8周龄KKAy小鼠和对照组C57BL/6小鼠(P<0.05)。20周龄KKAy小鼠光镜下肾小球面积增大,肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,可见硬化结节;电镜下肾小球基底膜增厚,足突部分扁平、融合。结论 20周龄KKAy小鼠出现肥胖、高血糖、尿白蛋白排泄率增加及典型的糖尿病肾病病理改变,是研究2型糖尿病早期肾损害的理想动物模型。
- 刘晓丹杨刚范秋灵刘楠栗霄立冯江敏
- 关键词：KKAY小鼠糖尿病肾病动物模型肾脏病理损害
- 氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响被引量：4
- 2012年
- 目的利用比较蛋白质组学双向电泳技术研究体系来观察血管紧张素受体拮抗剂（ARB）氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响。方法8周龄自发性2型糖尿病KKAy小鼠随机分为氯沙坦治疗组（饮用水中喂入氯沙坦粉末10mg·kg^-1·d^-1）和非治疗组；8周龄C57BL／6小鼠作为正常对照组。饲养12周后，经胸主动脉磁珠灌流分离肾小球，提取肾小球蛋白。DIGE最小荧光标记法标记，行二维荧光差异凝胶电泳。应用Typhoon多功能成像系统扫描凝胶，DeCyder2D差异分析软件进行图像分析。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异表达蛋白质。结果KKAy小鼠的体质量、血糖和尿白蛋白排泄率较正常对照C57BL／6小鼠显著升高（均P〈0．05），氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠尿白蛋白肌酐比[（539．71±100．23）mg／g比（728±177．19）mg／g]、肾小球基底膜增厚和系膜基质增生等肾脏病理损害，而对血糖无影响。通过DeCyder2D差异分析软件，发现KKAy氯沙坦治疗组与KKAy非治疗组肾小球内表达差异大于1．1倍的蛋白质斑点62个。经肽质量指纹图分析，鉴定出41种蛋白质。其中表达上调的蛋白28种，包括甘油激酶、亚硫酸盐氧化酶、甘氨酸脒基转移酶、腺苷高半胱氨酸酶等；表达下调的蛋白质13种，包括3．巯基丙酮酸硫基转移酶、ATP合酶亚单位d、60000热休克蛋白、线粒体应激蛋白70（又名75000葡萄糖调节蛋白，GRP75）等。有6种蛋白在20周龄KKAy小鼠和C57BL／6小鼠肾小球内存在差异表达，氯沙坦治疗抑制了其在糖尿病状态下的表达变化，包括丙酮酸脱氢酶复合物的二氢硫辛酰赖氨酸残基乙酰基转移酶组分、琥珀酰辅酶A连接酶[GDP-形成1亚单位β、ATP合酶亚单位d、GRP75、核苷二磷酸盐结合部分X模体19和硒结合蛋白1。结论氯沙坦可明显减轻KKAy
- 范秋灵杨刚刘晓丹马健飞冯江敏姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病肾小球蛋白质组学氯沙坦KKAY小鼠
