广东省自然科学基金(990006)
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
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- 相关机构：广州军区广州总医院华南理工大学深圳职业技术学院更多>>
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- 成骨细胞和碱性成纤维细胞生长因子植入促进骨再生过程研究被引量：4
- 2001年
- 目的研究成骨细胞和碱性成纤维因子(bFGF)于凝胶载体中植入促进骨再生的效果。方法将同种异体胎兔成骨细胞按不同浓度植入成年新西兰兔桡骨1cm缺损区域，观察骨缺损修复过程；结果植入但骨缺损桥接率随着植入浓度手术后时间的增加而上升。扫描电镜观察成骨细胞植入3周时有骨陷窝形成。植入5周时骨陷窝壁完全钙化。临床应用于10例骨不连患者，均愈合。结论成骨细胞于三维凝胶中植入的最佳细胞浓度为106/ml。胎儿成骨细胞和bFGF植入可临床应用于骨折、骨折延迟愈合、骨不连、骨坏死等的治疗。
- 丁焕文丁建伟黄山东刘少喻区锦华苏增贵尹庆水侯之启
- 关键词：成骨细胞碱性成纤维细胞生长因子骨缺损骨不连
- bFGF真核表达载体构建及表达被引量：7
- 2002年
- 旨在构建可在哺乳细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicFibroblastGrowthFactor ,简称bFGF)的真核表达载体 ,以便用于研究bFGF基因治疗在骨组织工程中的应用 .应用基因重组技术 ,将已经克隆的bFGF基因从PBR32 2_bFGF载体上亚克隆到真核表达载体 pcDNA3.1上 ,构建的重组质粒经脂质体介导转染 3T3细胞 ,36h后观察瞬时表达情况 .酶切 ,PCR和DNA测序结果均证实了插入片段的正确性 ;免疫组织化学检测bFGF的表达分泌情况 ,结果显示部分经转染的细胞呈阳性 (棕色颗粒 ) .结果表明已成功地构建了bFGF真核表达载体pcDNA3.1_bFGF ,并且bFGF能够在
- 张丽君丁焕文王捷郭勇杨传红冼江郑文岭
- 关键词：BFGF基因真核表达DNA重组技术转染
- 组织工程骨再生修复骨缺损的实验研究被引量：2
- 2000年
- 目的：观察不同浓度成骨细胞于三维胶原凝胶载体中植入体内的骨再生效果，确立成骨细胞于三维胶原凝胶载体中植入的最佳有效浓度。方法：采用胶原酶、胰蛋白酶消化方法分离、培养成骨细胞，然后按10^7、10^6、10^5、10^4/ml将成骨细胞包埋于I型胶原凝胶载体中植入兔桡骨骨缺损区域，于术后1－8周采用形态学观察、双能量X线骨密度测量、电镜观察其骨再生过程。结果：成骨细胞按10^7、10^6、10^5、10^4/ml植入组和对照组骨缺损桥接率于术后4周时分别为40％、65％、31．25％、5．55％、5％，植入8周时分别为41．67％、75％、37．5％、10％、8．33％；成骨细胞按10^7、10^6、10^5、10^4/ml植入组和对照组于术后6周骨密度分别为0．112±0．018、0．159±0．033、0．122±0．039、0．066±0．002、0．067±0．009，术后8周骨密度分别为0．150±0．059、0．173±0．041、0．145±0．023、0．103±0．023、0．102±0．033。扫描电镜观察成骨细胞植入1周时细胞呈圆形或椭圆形，其周围可见大量呈疏松排的胶原纤维；植入3周时已经有骨陷窝形成，骨陷窝中的成骨细胞突起多、细、短；植入5周时骨陷窝已钙化，骨小管很清晰；成骨细胞突起变少、变粗、变长。结论：成骨细胞于三维胶原凝胶中按10^7、10^6、10^5/ml均有明显促骨再生效果，其最佳细胞密度为10^6/ml。
- 丁焕文苏增贵赵军徐本法尹庆水
- 关键词：骨再生骨缺损
- bFGF荧光真核表达载体构建及表达被引量：8
- 2002年
- 目的 构建可在哺乳细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)的荧光真核表达载体 ,以便进一步转染成骨细胞 ,研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用。方法 应用基因重组技术 ,将已经克隆的bFGF基因从PBR3 2 2 -bFGF载体上亚克隆到荧光真核表达载体pEGFP -C3 ,构建的重组质粒经脂质体介导转染 3T3细胞 ,3 6h后观察瞬时表达情况。结果 ①酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性。②荧光显微镜下观察GFP的表达情况 ,观察到部分经转染的细胞发出绿色荧光 ;免疫组化检测bFGF的表达分泌情况 ,结果显示部分经转染的细胞呈阳性 (棕色颗粒 )。结论 成功地构建了bFGF荧光真核表达载体pEGFP -C3 -bFGF ,并在 3T3细胞中表达了bFGF。
- 张丽君王捷丁焕文郭勇杨传红冼江郑文岭
- 关键词：BFGF基因基因转染碱性成纤维细胞生长因子骨组织工程基因表达
- pEGFP-bFGF重组质粒转染成骨细胞的条件优化被引量：7
- 2003年
- 目的 :旨在优化碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)重组质粒转染成骨细胞的条件以获得较高效率 ,为进一步研究bFGF基因转移在骨组织工程的应用提供基础。方法 :将带有EGFP的bFGF重组质粒转染成骨细胞 ,改变DNA、脂质体的量以及转染时间 ,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率。结果 :在 2 4孔培养板中 ,2 μL脂质体介导 1 μg重组质粒转染 1 0h既可获得较满意的转染效率。结论 :通过优化转染条件可提高转染效率 。
- 张丽君郭勇丁焕文王捷张宏斌郑文岭
- 关键词：成骨细胞骨组织工程BFGF碱性成纤维细胞生长因子
- 扩增bFGF的条件优化及其真核载体构建被引量：5
- 2002年
- 目的 :优化采用PCR技术从PBR3 2 2 bFGF质粒扩增bFGF基因片段的条件并构bFGF真核表达载体 ,为研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用提供研究基础。方法 :(1)在不同的模板量、Mg2 + 浓度、退火温度下经PCR扩增bFGF基因 ,琼脂糖凝胶电泳检测。 (2 )载体和PCR产物经EcoRI和HindⅢ酶切、纯化 ,T4连接酶连接 ,转化大肠杆菌 ,抗生素筛选重组质粒。结果 :(1)得到三个最佳参数为 :模板量为 2 μl(5 0 4μg/ml) ;Mg2 + 浓度为2 0mmol/L ;退火温度为 5 5℃。 (2 )酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性。结论 :在此优化条件下经PCR反应得到了特异、高效和忠实的bFGF基因片段 ,并成功构建了bFGF真核表达载体。
- 丁焕文张丽君张宏斌郭勇王捷
- 关键词：BFGF碱性成纤维细胞生长因子基因表达聚合酶链反应骨组织工程学
- 兔骨膜成骨细胞的分离培养被引量：3
- 2004年
- 采用植块法和分批消化法相结合的方法分离得到了兔骨膜成骨细胞,鉴定后进一步研究了其生长特性。结果表明:该法可以在短时间内得到足够数量的细胞且纯度较高(8d达1.8 × 105个／ml),其最终碱性磷酸酶(ALP)分泌量为(13.12±0.18)IU／ml,骨钙素(BGP)量约为(20±0.3)ng／ml。
- 张丽君丁焕文
- 关键词：成骨细胞
- 碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜成骨细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜.成骨细胞中的表达情况,以为其基因转移在骨组织工程中的应用奠定基础。方法:实验于2003-09在广州军区总医院医学实验科完成。采用聚乙烯亚胺介导重组真核表达载体pcDNA3.1-碱性成纤维细胞生长因子经转染至原代培养的成骨细胞中,培养36h后,采用细胞免疫组化、免疫印迹杂交、酶联免疫吸附法、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色等方法检测碱性成纤维细胞生长因子在成骨细胞中的表达情况以及其生物学活性。结果:①pcDNA3.1-碱性成纤维细胞生长因子转染的成骨细胞能分泌表达碱性成纤维细胞生长因子至细胞培养液中,表达量约为(1.56±0.08)ng/mL,高于未经转染的细胞培养液[(0.53±0.048)ng/ml,(P<0.01)]。②经转染的成骨细胞的培养上清可以明显促进3T3细胞的增殖,表明成骨细胞所分泌表达的碱性成纤维细胞生长因子具有一定的生物学活性。结论:碱性成纤维细胞生长因子基因能够转移至骨膜成骨细胞中,经转染的细胞能够超表达碱性成纤维细胞生长因子。
- 张丽君丁焕文王捷郭勇
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因表达骨组织
- 碱性成纤维细胞生长因子基因转移对成骨细胞生长特性的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨组织的损伤有修复作用,许多体内外实验均表明外源性植入碱性成纤维细胞生长因子能明显促进骨形成过程。观察碱性成纤维细胞生长因子基因转移对成骨细胞生长特性的影响。方法:实验于2003-01/07在解放军广州军区总医院医学实验科完成。成年雄性新西兰白兔,体质量1.5～2.5kg,采用聚乙烯亚胺(jetPEITM)介导真核分泌表达载体pcDNA3.1-bFGF及非分泌表达载体pEGFP-C3-bFGF转染原代培养的成骨细胞,消化收集转染成骨细胞以及未经转染的成骨细胞,利用血细胞计数器进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,同时测定DNA浓度、碱性磷酸酶及骨钙素含量的变化。结果:①未转染的细胞在第8天进入稳定期,而经转染的细胞在第10天才进入稳定期。未转染细胞最终达到的细胞数量为(1.70±0.02)×109L-1,而经转染的细胞数量为(2.10±0.03)×109L-1,差异显著(P<0.05)。②经pcDNA3.1-bFGF转染的成骨细胞的DNA量最高,约为(255±20)mg/L,而经pEGFP-C3-bFGF转染的成骨细胞的总DNA量约为(225±20)mg/L,未经转染的成骨细胞的总DNA量为(100±10)mg/L。③pcDNA3.1-bFGF转染的成骨细胞培养至第9天后,碱性磷酸酶分泌量为(8.0±0.22)IU/mL;而未转染的成骨细胞碱性磷酸酶分泌量为(13.12±0.18)IU/mL。经pEGFP-C3-bFGF转染的成骨细胞所分泌的碱性磷酸酶与未经转染的细胞的分泌量相当,约为(12.56±0.24)IU/mL。④随着培养时间的延长,骨钙素分泌量的变化趋势与碱性磷酸酶相同,但重组质粒转染成骨细胞与未转染细胞最终分泌的骨钙素量差异无显著性(P>0.05)。结论:①经pcDNA3.1-bFGF及pEGFP-C3-bFGF重组质粒转染后,成骨细胞的生长特性有一定的变化,与添加外源碱性成纤维细胞生长因子的影响基本相同。②pcDNA3.1-bFGF转染的细胞分泌的碱性成纤维细胞生长因子能够促进细胞分裂增殖,降低碱�
- 张丽君丁焕文王捷郭勇
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因转移成骨细胞
- 成骨细胞和bFGF植入修复骨缺损的实验和临床应用研究被引量：2
- 2001年
- 将同种异体胎兔成骨细胞按不同浓度 (10 7、10 6、10 5、10 4 /ml)植入成年新西兰兔桡骨 1cm缺损区域 ,观察骨缺损修复过程 ,以研究成骨细胞于复合bFGF三维凝胶载体中植入的方法、最佳有效浓度及其促进骨再生效果 ;并植入胎儿成骨细胞和bFGF于骨不连区域 ,观察其临床疗效。结果发现 ,按 10 7、10 6、10 5、10 4 /ml植入成骨细胞组和对照组骨缺损桥接率于术后 4周为 40 %、6 5 %、31 2 5 %、5 5 5 %、5 % ,植入 8周为 41 6 7%、75 %、37 5 %、10 %、8 33 % ;按 10 7、10 6、10 5、10 4 /ml植入成骨细胞组和对照组骨缺损处骨密度于术后 6周为 (0 112± 0 0 18)、(0 15 9± 0 0 33)、(0 12 2± 0 0 39)、(0 0 6 6± 0 0 0 2 )、(0 0 6 7± 0 0 0 9) ,植入 8周骨密度为 (0 15 0± 0 0 5 9)、(0 173±0 0 41)、(0 145± 0 0 2 3)、(0 10 3± 0 0 2 3)、(0 10 2± 0 0 33) ;扫描电镜观察成骨细胞植入 3周时有骨陷窝形成 ,植入5周时骨陷窝壁完全钙化 ;临床应用于 10例骨不连患者 ,经 3～ 12个月随访 ,均愈合。研究表明成骨细胞按 10 7、10 6、10 5/ml浓度植入均有明显的促新骨形成、促骨缺损修复的效果 ,成骨细胞于三维凝胶中植入的最佳细胞浓度为 10 6/ml;胎儿成骨细胞移植可临床应用于?
- 丁焕文黄山东刘少喻区锦华苏增贵尹庆水侯之启
- 关键词：成骨细胞碱性成纤维细胞生长因子骨缺损骨生成BFGF
