国家自然科学基金(39830390)
- 作品数：23 被引量：105H指数：7
- 相关作者：朴英杰董为人肖应庆胡庆柳王尉更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 人发角蛋白人工腱植入后泛素的表达及分布被引量：1
- 2001年
- 目的 研究HHK-Ⅱ人工腱植入后不同时期泛素(ubiquitin)的表达与分布。方法 将兔后腿屈肌腱切除一定长度后用HHK-Ⅱ人工腱连接，不同时间后用免疫组织化学法检测泛素在人工腱及其周围组织中的表达与分布，并与正常肌腱组织对照。结果 在正常自体腱组织中，泛素低表达，且均匀分布；HHK-Ⅱ人工腱植入后3周，人工腱周围及其附近的新生腱组织中泛素表达为强阳性；植入后6周及9周泛素的表达明显下调 (P< 0.05)，其中9周的泛素表达接近正常腱组织。即在人工腱降解期泛素表达为强阳性，自体腱形成期及之后的时期泛素的表达明显下调。结论 人工腱角蛋白的降解可能主要由泛素承担；人工腱周围新生组织中不正常蛋白的清除除有溶酶体参与外，泛素也起主要作用。
- 刘斐球胡庆柳
- 关键词：泛素免疫组织化学人发角蛋白
- 人发角蛋白人工腱及其组分的生物力学特性(英文)被引量：4
- 2005年
- 背景:人发角蛋白人工腱植入肌腱缺损部位后,可被机体降解吸收,同时诱导机体形成新的自体腱。测定人发角蛋白人工腱及其组分的主要生物力学指标,以便根据人体不同功能部位需要选用合适的型号,使其具有人体进行功能活动所需要的拉应力。目的:测定人发角蛋白人工腱及其各组分材料的主要生物力学指标。设计:以人发角蛋白人工腱为观察对象,观察性研究。单位:一所军医大学的生物化学与分子生物学教研室、全军医学生物力学重点实验室,组织学与胚胎学教研室和佛山市康兴医学科技有限公司。材料:实验于2001-10在解放军第一军医大学全军医学生物力学重点实验室进行测定。人发角蛋白人工腱产品原料采自无地方流行性疾病、无环境污染的偏远山区,无染发、无烫发的健康女性黑发。人发经不同程度的生物力学处理获得3种在体内吸收速度递增的组分,Z,B和F。Z,B,F3种组分以一定的比例混合编结成各种型号规格的人发角蛋白人工腱。组分有3种型号规格,分别为Z3.0-20,B3.0-20,F3.0-20。人发角蛋白人工腱有6种型号规格:ZBF1.0-20,ZBF1.5-20,ZBF3.0-20,ZBF6.0-20,ZBF9.0-20,ZBF12.0-20。方法:将人发角蛋白人工腱或其组分材料的两端固定于MTS858生物力学试验机上,进行断裂拉力和拉应力指标的测定。主要观察指标:各种规格型号的人发角蛋白人工腱及其组分材料的断裂拉力和拉应力。结果:Z3.0-20,B3.0-20,F3.0-20组断裂拉力分别为(211.8±12.1,178.8±8.2,151.3±6.7)N,拉应力分别为(71.3±3.9,59.9±2.7,50.3±2.3)MPa,ZBF1.0-20,ZBF1.5-20,ZBF3.0-20,ZBF6.0-20,ZBF9.0-20,ZBF12.0-20各组断裂拉力分别为(75.0±3.0,107.8±4.2,194.1±5.3,375.9±12.7,508.2±21.3,670.8±25.4)N,拉应力分别为(75.0±3.0,72.0±2.8,65.1±1.8,62.9±2.2,56.3±2.4,55.8±1.5)MPa。结论:人发角蛋白人工腱的断裂拉力随横截面积增大而增大,拉应力随横截面积增大而略有减少�
- 肖应庆赵卫东董为人
- 关键词：人发角蛋白人工腱生物力学特性组织学与胚胎学降解吸收流行性疾病缺损部位
- 复合生物敷料人发角蛋白-胶原海绵-聚甲基丙烯酸羟乙酯对大鼠烧伤创面的治疗作用(英文)被引量：7
- 2009年
- 背景:作者在对人发角蛋白的机制研究和临床应用中提出了一个全新的组织工程学概念--在体/原位组织工程。在该理论的指导下,拟以人发角蛋白-胶原海绵为支架,复合一种可作为药物缓释载体的聚甲基丙烯酸羟乙酯,探讨其在体内原位诱导周围组织细胞构建真皮的可行性。目的:以人发角蛋白-胶原海绵为敷料内层,复合包裹药物虎杖的聚甲基丙烯酸羟乙酯载体,制备一种双层复合生物材料,观察其对烧伤创面的促愈合作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-03/12在南方医科大学组胚教研室完成。材料:选用雄性SD大鼠15只制备烧伤动物模型,将模型鼠完全随机分为3组:实验组,阳性对照组及阴性对照组。方法:①将在体内具有慢、中、快3种吸收速度的人发角蛋白组分材料编织成网孔为1mm×1mm的网格,与从牛跟腱中抽提Ⅰ型胶原溶液混合后放入模具,经真空冷冻干燥后制成海绵状膜(作复合内层敷料)。②用聚合法制备聚甲基丙烯酸羟乙酯,再与药物虎杖一同成膜,制备药物缓释载体膜(作复合外层敷料)。③用SD大鼠制备深Ⅱ度烧伤动物模型,烧伤后3d做清创处理,清创后实验组用与创面相同大小的人发角蛋白-胶原海绵-聚甲基丙烯酸羟乙酯复合敷料覆盖创面,阳性对照组用戊二醛猪皮覆盖创面,阴性对照组为单纯无菌纱布覆盖。主要观察指标:①术后以创面完全上皮化为标准,记录创面愈合时间并分别计算7,14,21d愈合率。②于覆敷料后1,2,4,6,8周切取整个创面及其周围组织,光学显微镜观察肉牙组织生长情况和免疫组织化学染色观察新生组织中的胶原纤维和弹性纤维形态。结果:①实验组创面覆盖后渗出明显减少且保持一定湿度,而阳性对照组创面较干燥;实验组及阳性对照组的创面愈合时间较阴性对照组提前(P=0.000);创面在7,14,21d的愈合率均较阴性对照组高(P=0
- 陈英华董为人陈清元赵冰雷邹仲之肖应庆胡国栋仇新霞
- 关键词：人发角蛋白胶原海绵烧伤敷料
- 人发角蛋白人工腱诱导自生腱形成过程胶原Ⅰ型mRNA的表达(英文)被引量：1
- 2005年
- 背景:大量的动物实验和临床应用已经证实,人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)人工腱能诱导机体形成自生腱,自生腱形成的过程实质上主要是胶原Ⅰ型的合成、分泌和组装的过程。目的:探讨胶原Ⅰ型mRNA在人发角蛋白人工腱诱导自生腱组织形成过程中的表达。设计:以实验动物为观察对象,完全随机对照实验。单位:南方医科大学组织学与胚胎学教研室和生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-05/2004-09在解放军第一军医大学实验动物中心完成。实验动物中心提供实验用新西兰大白兔33只,体质量2.0～2.5kg,雌雄不限。随机分成实验3,6,9,12,16,20周组,阴性对照9,20周组和正常对照组,其中实验3,6周组和正常对照组每组3只,其余每组4只。由生物化学与分子生物学教研室提供的人发角蛋白人工腱为经一系列生物化学处理的人发,按降解速度不同可分为快速(F)、中速(B)和慢速(Z)3个不同降解组分。人发角蛋白人工腱是由快速,中速和慢速这3种组分按4∶3∶3的比例混合编制而成。方法:①实验组行双侧跟腱手术,切断跟腱长1.0～2.0cm,两断端与人发角蛋白人工腱缝合,缝合腱膜,皮肤一期缝合。②阴性对照组为离断兔肌腱1.0～2.0cm,断裂肌腱不进行连接,而缝合腱膜和皮肤。③正常对照组为正常兔肌腱。实验组分别于第3,6,9,12,16,20周取材,阴性对照组分别于第9,20周取材。通过反转录聚合酶链反应技术测量各时期胶原Ⅰ型mRNA表达。主要观察指标:正常肌腱与人发角蛋白人工腱各个时期诱导形成的自生腱中胶原Ⅰ型mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GADPH)mRNA表达的比值。结果:33只大鼠全部进入结果分析。①正常肌腱组织中I型胶原mR-NA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA表达的比值为0.96±0.02。②阴性对照组9,20周组取材发现,两断端肌腱未连接,并且向两侧回缩。③实验组人发角蛋白人工腱植入后诱�
- 娄莉董为人肖应庆陈俏妍朴英杰
- 关键词：角蛋白毛发人工器官
- 人发角蛋白人工腱体内降解的形态学及泛肽、溶酶体酶的活性变化被引量：16
- 2001年
- 目的阐明人发角蛋白(HHK)人工腱植入体内后的降解过程.方法选取30只新西兰大白兔,随机分为术后第1、3、6、9、12周实验组和正常对照组.实验组行跟腱切除后植入HHK人工腱,按期进行常规形态学观察和泛肽组化及酸性磷酸酶(AcP)酶细胞化学观察.结果光镜形态学观察显示,人工腱植入后第l周出现人发毛小皮脱落、消失,人发呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞,到第3～6周可见降解成颗粒的人工腱被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬.泛肽酶组化显示第l～3周,人发周围的巨噬细胞、多核巨细胞和成腱细胞内反应呈强阳性,周围组织呈中等阳性,到第9周,大部分人发被降解,泛肽酶反应在基质呈弱阳性,在腱细胞中呈中等阳性.电镜形态学观察显示毛发之间出现成腱细胞,并开始分泌蛋白多糖和前胶原蛋白,第9～12周,人工腱基本被降解,同时完成了新生自体腱的形成.酶细胞化学观察显示被吞噬的颗粒呈AcP酶反应阳性.结论在HHK人工腱的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的人发降解,降解后期细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的人工腱颗粒进行降解,且具有协同作用.
- 朴英杰董为人胡庆柳蒋东萍傅文玉娄丽乔东访
- 关键词：人工器官溶酶体酸性磷酸酶
- 转化生长因子-β_1对人胚肌腱细胞增殖和胶原及内源性Smads基因表达的影响被引量：4
- 2001年
- 目的 探讨转化生长因子 (TGF) β1对人胚腱细胞增殖和代谢及其下游信号分子Smad的影响。方法 采用3 H 胸腺嘧啶脱氧核苷和3 H 脯氨酸掺入法观察TGF β1对人胚腱细胞的DNA和胶原合成的影响。采用半定量反转录聚 合酶链反应 (RT PCR)检测TGF β1作用 2 4h肌腱细胞Smad2、3和 7mRNA表达水平的变化。结果 在体积分数为 0 .5 %胎牛血清条件下TGF β1可刺激腱细胞增殖 ,其作用在 0 .5～ 10 .0 μg/L之间呈剂量依赖性增强 ( P <0 .0 5 ) ,饱和剂量 10μg/L增加DNA合成 73%。TGF β1各剂量组对胶原蛋白合成均有促进作用 (P <0 .0 5 ) ,最大效应剂量为 5 μg/L( 10 7% )。TGF β1能显著下调Smad2和Smad3基因的表达水平 ,同时诱导TGF β1信号拮抗因子Smad7的产生。结论 TGF β1能有效促进腱细胞增殖及胶原合成 ,同时能对其细胞内信号分子Smad的表达起自身调控作用。
- 王尉朴英杰何恢绪
- 关键词：转化生长因子-Β1肌腱细胞胶原
- 人发角蛋白植入大鼠损伤脊髓部位的电镜观察被引量：5
- 2003年
- 目的:脊髓外伤后的继发性病理改变,是影响脊髓神经组织再生修复的重要因素。采用人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)植入脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)部位,以期达到减轻继发性损害,诱导和促进损伤脊髓组织的再生。方法:采用改制Ⅱ型纽约大学(NewYorkUniversity,NYU)装置,在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠损伤脊髓部位,对植入后1,4,12,26周的损伤脊髓组织进行电镜观察。结果:第1周为急性炎症时期,HHK周围结构紊乱,集聚大量的炎症细胞,灰质出现坏死;第4周时,炎症细胞减少,巨噬细胞吞噬髓鞘,胶质细胞增生;第12周时,多核巨噬细胞出现在HHK周围,HHK开始崩解,崩解物被多核巨细胞所吞噬;第26周时,神经轴突沿HHK间隙排列生长,灰质中神经元数量增加,HHK周边细胞有序生长。结论:植入的人发角蛋白具有诱导神经胶质细胞增生,阻止脊髓空洞的形成,从而减轻了脊髓损伤组织的继发性伤害的程度,改善了神经元再生的外环境,并可以桥接诱导神经轴突定向再生的作用。
- 徐锡金朴英杰霍霞
- 关键词：脊髓损伤电镜观察
- 人发角蛋白人工腱的生物力学研究被引量：6
- 2004年
- 目的 :测定HHK人工腱及其各组分材料的主要生物力学指标。方法 :分组将HHK人工腱两个末端分别固定于MTS 85 8生物力学试验机上 ,进行断裂拉力和拉应力等生物力学指标的测定。结果 :Z3 .0、B3 .0、F3 .0各组平均断裂拉力分别为 2 12、179、15 1N ,拉应力分别为 71、60、5 0MPa ;ZBF1.0、ZBF1.5、ZBF3 .0、ZBF6.0、ZBF9.0、ZBF12 .0各组平均断裂拉力分别为 75、10 8、194、3 76、5 0 8、671N ,拉应力分别为 75、72、65、63、5 6、5 6MPa。结论 :HHK人工腱足以供植入人工腱的肢体、指 (趾 )从植入人工腱到形成自体腱的过程中 ,进行功能活动所需要的拉应力。
- 肖应庆赵卫东
- 关键词：角蛋白人工腱生物力学
- 人发角蛋白神经导管诱导兔胫神经修复时NGF和p75的表达及分布
- 2003年
- 目的研究人发角蛋白(HHK)神经导管诱导兔胫神经缺损再生修复时神经生长因子(NGF)及其低亲和受体p75的表达及分布。方法取正常胫神经、缝线连接的胫神经和HHK导管桥接的胫神经术后不同时期的切口部位及相邻组织制作石蜡切片,用免疫组化法对切片进行染色。结果正常胫神经组织中无NGF阳性染色。术后76 d,HHK周围的新生组织中NGF免疫组化染色表现为强阳性,而缝线周围的组织中无阳性着色。术后100 d,与正常胫神经组织无显著差异。正常胫神经组织中无p75阳性染色。术后76 d,导管组HHK周围较成熟的神经组织中p75免疫组化染色为弱阳性,而新生组织中为强阳性。术后100 d,导管组的p75免疫组化染色与正常神经组织无显著差别。结论HHK及其降解产物能诱导NGF和p75的产生,为神经再生创造良好的微环境;而缝线无此诱导作用。在新生神经组织中NGF和p75含量多,较成熟的神经组织中含量少。
- 胡庆柳朴英杰邹飞
- 关键词：神经损伤NGFP75
- 人腱细胞Smad2、Smad4基因MH2结构域的克隆和序列鉴定
- 2001年
- 目的从人腱细胞内克隆转化生长因子－β特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ２、４的功能性结构域－ＭＨ２结构域。 方法 原代培养人腱细胞，从培养的细胞中提取总 ＲＮＡ，逆转录合成单链 ｃＤＮＡ；设计引物进行 ＰＣＲ，扩增 Ｓｍａｄ２、４基 因ＭＨ２结构域的基因片段，将其定向插入ｐＧＥＭ－Ｔ载体，转化大肠杆菌ＤＨ５α。挑选阳性克隆并进行核苷酸序列测定 分析。结果测序结果与 Ｇｅｎｅｂａｎｋ中克隆的基因序列完全一致。结论从人腱细胞中克隆成功 Ｓｍａｄ２、４基因的 ＭＨ２结 构域，证实了 Ｓｍａｄ２、４基因在人腱细胞中的表达；提示人腱细胞内存在 ＳＭＡＤ２、４信号转导途径，ＴＧＦ－β对人腱细胞 分化的调节可能是通过ＳＭＡＤ２、４信号转导途径实现的。
- 王尉朴英杰娄莉鲍永耀
- 关键词：肌腱细胞SMAD2SMAD4克隆
