广东省自然科学基金(990064)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- SYBR Green荧光定量PCR检测外源ATP7B对于内源CP基因转录的影响
- 2005年
- 【目的】应用 SYBR Green 荧光定量 PCR 检测在正常 BRL 细胞中短暂转染人 ATP7B cDNA 后 CP 基因的转录情况。【方法】分为空质粒组(转染空质粒 Kbpala/Alb)和处理组(转染野生型 Kbpala/Alb-ATP7B),分别于转染后0、4、8、12、24、48、72、168h 提取 mRNA,逆转录后行 SYBR Green 荧光 PCR 检测人 ATP7B cDNA 及大鼠 CP 基因的转录情况。SAS11.0统计软件进行数据处理和分析。【结果】人 ATP7B cDNA 在短暂转染后约48h 转录达高峰,可持续至转染后7d 以上;经方差分析,空质粒组转染后各时间点 CP 基因的转录水平与 t=0h 相比较 P>0.05;处理组亦是。【结论】外源ATP7B cDNA 的转染及表达对于内源性 CP 基因的转录无影响。
- 徐琳梁秀龄徐评议黄彬林正丰岩清
- 关键词：ATP7B基因CP基因基因转录
- 肝豆状核变性基因表达蛋白的多克隆抗体制备和纯化被引量：2
- 2002年
- 目的 制备并纯化肝豆状核变性（WD）基因表达蛋白的多克隆抗体,为进一步研究WD蛋白的结构和功能打下基础。方法 应用RT-PCR扩增目的基因,GST基因融合载体表达并纯化融合蛋白,Thrombin酶切并收集目的蛋白,免疫家兔,凝胶过滤层析纯化抗体血清中的lgG,ELISA检测抗体滴度和western blot检测抗体特异性。结果 本方法生产的抗体滴度达到了1:12500,特异性好。结论 我们应用该方法成功制备了Wilson病蛋白的多克隆抗体,为我们进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 丰岩清王莹黄帆徐评议梁秀龄
- 关键词：肝豆状核变性基因表达蛋白多克隆抗体纯化
- 荧光定量PCR检测Kbpala/Alb-ATP7B短暂转染BRL细胞后的转录情况
- 2005年
- 【目的】明确 Kbpala/Alb-ATP7B 短暂转染 BRL 细胞后的表达情况。【方法】将 Kbpala/Alb-ATP7B 用阳离子脂质体 Lipofect AMINE^(TM)2000 Reagent 转染 BRL 细胞后,按转染后不同时间点提取细胞 mRNA,逆转录后,使用 SYBR Green 荧光定量 PCR 检测其表达情况。【结果】转染后4h 即可检测到外源基因的表达,48h 外源基因的表达最高,可持续7d 以上。【结论】Kbpala/Alb-ATP7B 可在 BRL 细胞中有效表达,表明载体构建成功。
- 徐琳梁秀龄徐评议黄彬林正黄帆丰岩清
- 关键词：肝豆状核变性基因表达荧光定量PCR
