广州市医药卫生科技项目(2009-YB-021)
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 相关作者：肖慧丁宁许立新佘守章高巨更多>>
- 相关机构：广州市第一人民医院广东省中医院广州中医药大学更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目广东省医学科学技术研究基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- p38信号通路参与呼吸机所致肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达被引量：5
- 2009年
- 目的 研究p38信号通路在呼吸机所致肺损伤（ventilator-induced lung injury，VILI）大鼠肺组织表达高迁移率族蛋白B1（highmobility group box 1 protein，HMGB1）中的作用。方法健康SD大鼠24只随机分为3组：对照组（A组）不行机械通气，保留自主呼吸；常规通气组（B组）潮气量（Vt）为8mL／kg；大潮气量通气组（C组）Vt为40mL／kg。机械通气4h后处死动物，测定支气管肺泡灌洗液中总蛋白水平、白细胞计数以及肺湿干重比值（W／D）和中性粒细胞髓过氧化物酶（MPO）活性。采用Western blot方法检测肺组织HMGB1蛋白和D38激酶活性变化，采用RT-PCR方法检测HMGB1 mRNA的表达。应用单因素方差分析进行不同组别间的比较。结果通气4h后，与A组相比，C组总蛋白水平（1．77±0．68）g／L、白细胞计数（106．55±28．17）×10^7L^-1、肺W／D比值（7．16±1．02）、MPO活性（3．94±1．21）U／g、HMGB1蛋白（0．64±0．17）和mRNA（1．17±0．45）表达以及p38激酶活性（0．514-0．12）均明显增加（P〈0．05），而B组上述各项指标的变化均无统计学意义（P〉0．05）。结论大潮气量机械通气可引起大鼠急性肺损伤，p38参与了机械牵张诱导肺组织HMGB1的表达。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：机械通气急性肺损伤高迁移率族蛋白B1P38丝裂原活化蛋白激酶
- 人高迁移率族蛋白B1原核表达及其高亲和噬菌体融合肽的筛选
- 2010年
- 目的 构建谷胱甘肽巯基转移酶（GST）标记的人高迁移率族蛋白B1（HMGB1）融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达.应用噬菌体展示技术筛选HMGB1的高亲和肽.方法 用RT-PCR方法扩增HMGB1 cDNA,构建于原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠杆菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导GST-HMGB1蛋白表达;Ni^2＋-NTA和多粘菌素B亲和层析柱进行纯化重组HMGB1蛋白.以重组HMGB1蛋白为靶分子,进行4轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第4轮洗脱物中随机挑选20个单克隆噬菌体扩增后进行ELISA鉴定,用酶标仪测定450 nm处的吸光度值.对获得的阳性单克隆噬菌体分别进行扩增、纯化,并对DNA测序,以确定插入七肽的氨基酸序列.结果 RT-PCR扩增HMGB1 cDNA大小约648 bp,成功构建了pGEX4T-1-HMGB1重组质粒并纯化了HMGB1蛋白,其相对分子质量为65000.经过4轮筛选后,噬菌体富集了74倍（第4轮与第1轮回收量分别为5.2×10^8、7.0×10^6 pfu）,随机挑取的20个噬菌体克隆中9个可与HMGB1结合,测序发现其中的6个序列一致,均为DYFVSSV.结论 筛选到1个可与HMGB1高亲和结合的噬菌体展示七肽,其对HMGB1活性的拮抗效应有待进一步阐明.
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：高迁移率族蛋白质类细菌噬菌体肽库谷胱甘肽转移酶
- 应用LiquiChip液相蛋白芯片技术检测HMGB1诱导肺泡巨噬细胞的细胞因子表达谱被引量：1
- 2010年
- 目的检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导肺泡巨噬细胞(AM)的细胞因子表达谱。方法 RT-PCR扩增HMGB1 cDNA,插入pGEX4T-1原核表达载体并转大肠杆菌,IPTG诱导HMGB1表达,Ni2+-NTA和多粘菌素B亲和层析柱分离纯化。应用LiquiChip液相蛋白芯片检测HMGB1(20ng/ml)诱导AM细胞因子表达谱的变化。结果成功表达纯化的重组HMGB1可诱导AM肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、MIP-2、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及γ-干扰素(IFN)-γ的表达显著增加(P<0.01)。结论 HMGB1可诱导AM释放多种炎性细胞因子。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：高迁移率族蛋白B1肺泡巨噬细胞细胞因子
- 不同潮气量机械通气对肺损伤的影响及其针对性护理被引量：4
- 2010年
- 目的 研究不同潮气量机械通气对肺损伤的影响,探讨机械通气时的针对性护理措施.方法 将24只健康SD大鼠随机分为对照组（n=8）、小潮气量通气组（n=8,VT=8 ml/kg）和大潮气量通气组（n=8,VT=40ml/kg）.通气时间均为4 h.检测肺组织总蛋白、肺湿干重比（W/D）、白细胞计数和中性粒细胞髓过氧化物酶（MPO）含量以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白和mRNA的含量.结果与对照组比较,大潮气量通气组肺组织总蛋白、W/D、白细胞计数和MPO含量以及TNF-α蛋白和mRNA含量均显著增加（P〈0.05）,而小潮气量通气组上述指标的变化无统计学意义（P〉0.05）.结论 大潮气量机械通气可导致呼吸机所致肺损伤,临床上应加强对机械通气患者的护理防护.
- 肖慧刘灵芝丁宁
- 关键词：机械通气肺损伤护理
- 机械牵张诱导THP-1细胞高迁移率族蛋白B1移位出核被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨机械牵张对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在THP-1细胞内移位的影响。方法:构建HMGB1-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的真核表达载体。通过两步亚克隆的方法,将HMGB1和EGFP的编码序列以融合蛋白的形式克隆到pcDNA3-HA载体上,随后转染THP-1细胞并施加机械牵张应变,荧光显微镜观察HMGB1在细胞内的表达及移位情况。结果:重组质粒经酶切鉴定证明构建正确,并在THP-1细胞中大量表达。荧光显微镜观察发现,HMGB1-EGFP融合蛋白主要分布于细胞核,经机械牵张18 h,可见细胞中融合蛋白从细胞核移位到细胞质,在细胞浆中观察到明显的绿色荧光。结论:成功构建了HMGB1-EGFP融合蛋白,在THP-1细胞中观察到机械牵张可诱导HMGB1移位出核。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：机械牵张高迁移率族蛋白质类THP-1细胞
- 细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控被引量：3
- 2009年
- 目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法肺泡上皮细胞A549分为A、B、C3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h。分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Westernblotting检测ERK激酶的活性。结果A549细胞施加14%牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高(P<0.05);该诱导激活作用可被PD98059阻断。结论机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：机械牵张高迁移率族蛋白B1细胞外调节蛋白激酶免疫组织化学免疫印迹法肺泡上皮细胞
- 高迁移率族蛋白B1的表达纯化及其对单核细胞释放炎症因子的影响被引量：2
- 2009年
- 目的通过重组HMGB1蛋白，观察其对单核细胞株THP—1释放炎症因子的影响。方法用RT—PCR方法扩增人HMGB1 cDNA，将目的片段HMGB1亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠杆菌BL21，以IPTG诱导HMGB1融合蛋白表达，经Ni^2 -NTA和多黏菌素B亲和层析柱纯化蛋白。分别用不同浓度的重组HMGB1蛋白（10、50和100ng,／mL）刺激THP-1细胞24h，应用Liquichip液相蛋白芯片系统检测培养上清中TNF—α、IL—1、IL-6和IL-8的浓度；以终浓度为100ng／mL的HMGB1蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6、12和24h，检测上述细胞因子的浓度。结果成功表达、纯化了重组HMGB1蛋白，与对照组相比，浓度为10、50和100．g／mL的HMGB1蛋白均使TNF—α、IL-1、IL-6和IL-8的分泌增加（尸均〈0．05）。并且随着HMGB1蛋白剂量的增加呈递增趋势；上述细胞因子水平在以100ng／mL的HMGB1刺激后3h或6h即开始升高（P均〈0．05），并且均随刺激时间的延长而呈递增趋势。结论HMGB1可诱导一系列细胞因子的产生和释放，为临床防治脓毒症提供了一个新的靶点。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：高迁移率族蛋白B1单核细胞脓毒症炎症因子
