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国家自然科学基金(30930043C140401)

作品数：1 被引量：0H指数：0
相关作者：邹云增马桢黄雄牛玉宏龚惠更多>>
相关机构：复旦大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇质粒
  • 1篇转染
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞模型
  • 1篇钙
  • 1篇沉淀法

机构

  • 1篇复旦大学

作者

  • 1篇龚惠
  • 1篇牛玉宏
  • 1篇黄雄
  • 1篇马桢
  • 1篇邹云增

传媒

  • 1篇上海医学

年份

  • 1篇2013
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
磷酸钙盐沉淀法成功建立稳定的双质粒转染细胞模型
2013年
目的建立表达血管紧张素Ⅱ受体1型(AT1)和钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)或CaMKⅡ的活性抑制体(DN)的双质粒转染COS7细胞模型,观察其磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)反应。方法通过扩增、筛选及抽提得到相关质粒,采用双酶切法及琼脂糖电泳鉴定目的DNA片段。采用磷酸盐钙沉淀法将质粒AT1和CaMKⅡ野生型(CaMKⅡ/WT)或CaMKⅡ/DN转入COS7细胞内,疫荧光法(IF)、免疫印迹法(WB)测定细胞表面表达的AT1(及其所带的HA-tag)、细胞质内表达的CaMKⅡ/WT或CaMKⅡ/DN(及其所带的V5-tag)。给予转染细胞以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、AT1受体拮抗剂(ARB)+AngⅡ等刺激,WB测定p-ERK改变。结果质粒酶切后电泳可见目的长度DNA片段。在转染细胞中,IF呈阳性荧光反应,WB可发现目的蛋白;而未转染细胞中则无。AngⅡ刺激引起转染AT1和CaMKⅡ/WT的细胞产生p-ERK升高反应,可为ARB预处理消除;而未转染细胞及转染AT1和CaMKⅡ/DN的细胞无类似反应。结论磷酸钙盐沉淀法可成功建立该双转染细胞模型。
马桢黄雄牛玉宏龚惠邹云增
关键词：质粒钙
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