国家重点基础研究发展计划(2006CB504401)
- 作品数：18 被引量：63H指数：5
- 相关作者：郭爱珍陈焕春王玉炯刘颖杨利国更多>>
- 相关机构：华中农业大学宁夏大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 重组CFP-10／ESAT-6抗原ELISA法对活动性肺结核诊断的评估被引量：4
- 2008年
- 目的以rCFP-10／ESAT-6融合蛋白抗原、植物血凝素（PHA）、生理盐水分别处理活动性肺结核患者外周血致敏T淋巴细胞，测定同一标本IFN-γ释放水平，探讨其对结核感染与发病的诊断意义。方法病例组111例为临床确诊肺结核患者，对照组292例为经胸部透视和结核菌素试验（PPD）筛选的大学生。入选对象取血3．0ml，均分为3份，每管1．0ml，分别加入rCFP-10／ESAT-6融合蛋白、PHA和生理盐水，孵育后ELISA法测定IFN-γ的吸光度（A）值及其抗体。结果rCFP-10／ESAT-6融合蛋白处理：IFN-γ测定值病例组x=1．3885±0．6236，对照组x=0．2944±0．0917，组间t′=16．4259，P〈0．05；以0．42为切割值，病例组阳性率93．58％，对照组阳性率13．07％。PHA处理：病例组x=1．2463±0．5541，对照组x=0．5613±0．0640，t′=19．1797，P〈0．05。生理盐水处理：病例组x=0．0772±0．0444，对照组x=0．0290±0．0235，t′=13．9487，P〈0．05。病例组抗体阳性率66．36％，对照组7．19％。结论利用rCFP-10／ESAT-6融合蛋白为特异性抗原，ELISA法测定外周血致敏淋巴细胞IFN-γ释放水平对结核感染诊断的敏感性〉90％，且无论特异性或非特异性处理，活动性肺结核患者IFN-γ释放水平均明显升高，血清抗体阳性率也高于对照组。
- 詹枝华陈颖钰袁冶项杰周金海郭爱珍
- 关键词：酶联免疫吸附法Γ-干扰素
- 奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析被引量：2
- 2010年
- 提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL,7.5×104U/mL。结果表明,重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。
- 刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：奶牛Β-干扰素融合蛋白抗病毒活性
- 牛结核分枝杆菌MPB70蛋白分泌性载体的构建与蛋白表达被引量：3
- 2010年
- 为了研究牛结核病新型诊断抗原,试验根据GenBank中Mycobacterium bovis基因序列设计1对引物,将牛结核分枝杆菌MPB70基因构建到pET22b(+)原核表达载体上,将重组载体转到E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导获得高效表达,并进行SDS-PAGE和Westen-blot分析。结果表明:MPB70蛋白以可溶形式在细胞周质中表达,有部分蛋白以包涵体形式在细胞质中表达,其分子质量约为30ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;重组MPB70蛋白可与牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应。说明重组MPB70蛋白能够作为诊断抗原。
- 贾浩周晶徐广贤李娟张艳许涛王玉炯
- 关键词：牛结核分枝杆菌MPB70WESTERN-BLOT
- 人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用被引量：4
- 2008年
- 本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFN-γ基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到31.25pg/mL。采集111位结核病阳性病人与292位临床健康对照者肝素抗凝全血,利用结核菌特异性抗原ESAT-6/CFP-10融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA及商品化试剂盒平行检测所有样本,结果表明两种方法的检测结果相符。结核患者的检测灵敏度为95.5%,健康对照的阳性检出率为16.7%,患者与健康对照的阳性检出率差异极显著(P<0.01),证实所建立的方法灵敏度与特异性均很高,具有良好的应用前景。
- 陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春
- 关键词：结核病IFN-ΓELISA
- 人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用
- 本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFNγ7基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IF...
- 陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春
- 关键词：结核病IFN-ΓELISA
- 文献传递
- 梅花鹿γ-干扰素在牛型结核病中的应用研究进展
- 2009年
- 梅花鹿γ-干扰素是细胞因子超家族中干扰素家族的特殊重要成员之一,具有广泛的生物学功能。其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质实现的。对梅花鹿γ-干扰素的诱导与产生、结核病特异性基因、梅花鹿γ-干扰素用于牛型结核病的检测原理及γ-干扰素优劣的研究进展进行综述。
- 刘颖王冰陈伟郭爱珍
- 关键词：梅花鹿Γ-干扰素结核杆菌
- 东北地区猪群链球菌分离鉴定及流行病学调查分析被引量：12
- 2009年
- 为了解猪链球菌在东北地区正常猪群中的流行情况,对黑龙江、吉林、辽宁省等地无菌采集的2 204份鼻拭子接入含有1‰抗生素的链球菌液体选择培养基中,37℃静止培养24 h,挑取细菌培养物涂片,革兰氏染色后镜检,将镜检为革兰氏阳性的链球菌利用PCR方法进行猪链球菌种的鉴定,在此基础上再利用PCR方法进行猪链球菌1、2、7、9血清型的分型鉴定。结果显示,黑龙江、吉林、辽宁3省猪群链球菌的携带率分别为29%、27%、34%,东北地区分离得到猪链球菌共155株,其中1型猪链球菌7株,2型猪链球菌39株,7型猪链球菌4株,9型猪链球菌11株,其他型猪链球菌94株。
- 王淑杰雷连成徐敏孙长江李成君蔡雪辉刘永刚张琦刘狄萩石文达
- 关键词：猪链球菌流行病学调查
- 奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析被引量：2
- 2010年
- 提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素对VSV的抗病毒活性为4.26×105U/mL,对IBRV的抗病毒活性为8.91×104U/mL。结果表明,重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。
- 刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：奶牛Α-干扰素融合蛋白抗病毒活性
- 奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析
- 提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发...
- 刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：奶牛Β-干扰素融合蛋白抗病毒活性
- 文献传递
- 内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系的构建被引量：4
- 2008年
- 新颖的内含肽介导PHB纯化蛋白体系,是一种高效表达、自动切割、纯化方便、费用低廉的蛋白表达纯化体系,有利于蛋白规模化纯化。选用对原核细胞具有毒害作用的小肽——人源抗菌肽LL-37作为纯化对象,通过基因工程技术,构建内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系,并利用该体系纯化LL-37。结果表明,构建的内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系可高效表达LL-37融合蛋白,利用构建的纯化体系能对目的蛋白进行纯化。
- 顾银霞周学章宋振威王玉炯
- 关键词：内含肽
