国家自然科学基金(B0270990)
- 作品数：4 被引量：50H指数：4
- 相关作者：李玉峰姜平杜以军蒋文明汤景元更多>>
- 相关机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究被引量：22
- 2006年
- 用3对分别针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7、ORF5和ORF5的PCR引物N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2进行RT-PCR,检测PRRSV,从其敏感性、特异性和临床样品检出率等方面进行比较,在此基础上进一步建立一步法RT-PCR检测方法。结果显示:3对引物对PRRSV均有很高的特异性;应用N1/N2引物病毒最低检测量为7.9 TC ID50,而AdGP5.1/AdGP5.2引物和RFLP5.1/RFLP5.2引物PCR最低检测量为79 TC ID50;运用N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物分别进行RT-PCR扩增检测临床样品,PRRSV检出率分别为28/48、27/48和25/48,且用AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物检测的阳性样品,用N1/N2引物检测也都呈阳性。运用N1/N2引物,通过一步法RT-PCR成功地从PRRSV S1株中扩增出374 bp的目的基因片段。结果表明,用N1/N2引物扩增PRRSV目的基因,其敏感性和临床样品检出率更高,更适合临床样品PRRSV的检测。
- 邓雨修李玉峰姜平蒋文明汤景元
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR一步法RT-PCR
- 猪口蹄疫病毒多抗原表位的原核表达与纯化被引量：4
- 2006年
- 利用限制性酶切从重组质粒pShuttle-CMV-VP中得到猪O型口蹄疫病毒VP1(21-60)-(141-160)-(200-213)位氨基酸的基因。将此多抗原表位基因克隆至原核高效表达载体pET43.1 a(+),在E.coliBL21中用IPTG诱导表达了含有猪口蹄疫病毒多抗原表位的融合蛋白,并用镍柱亲和层析法获得了纯化蛋白。W estern-b lot结果表明融合蛋白可被猪O型口蹄疫病毒标准阳性血清所识别,从而为进一步研究FMDV多表位抗原的免疫特性和诊断方法奠定了基础。
- 杜以军姜平蒋文明李玉峰
- 关键词：口蹄疫病毒表位原核表达
- 猪口蹄疫病毒多抗原表位重组腺病毒的构建与鉴定被引量：4
- 2005年
- 本研究设计构建了含有猪O型口蹄疫病毒VP1(21-60)-(141-160)-(200-213)位氨基酸的基因的重组腺病毒质粒pAd-VP,经PacI酶切后转染HEK-293A细胞,3次噬斑纯化获得了重组腺病毒rAd-VP。该重组腺病毒于HEK-293A细胞连续传代至20代效价稳定,TCID50为10-10/mL。RT-PCR检测证明目的基因在mRNA水平上可有效表达;应用O型口蹄疫病毒标准阳性血清进行间接荧光抗体试验,在rAd-VP感染的HEK-293A细胞的胞质可见清晰荧光。证明该重组腺病毒对VP1(21-60)-(141-160)-(200-213)位氨基酸的基因进行了成功的表达,从而为FMDV多抗原表位腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。
- 杜以军姜平杨晓玮汤景元李玉峰李永东
- 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒表位
- 猪α干扰素重组腺病毒的构建及其抗口蹄疫病毒活性研究被引量：20
- 2006年
- 本研究利用RT-PCR方法扩增猪α干扰素成熟蛋白基因后构建了重组腺病毒质粒pAd-poIFN-α,经PacI酶切后转染HEK-293A细胞,3次噬斑纯化后获得了重组腺病毒rAd-poIFN-α。该重组腺病毒于HEK-293A细胞连续传代至20代滴度稳定,为107TCID50/mL。RT-PCR检测证明目的基因在mRNA水平上可有效表达;在PK-15细胞上可以检测到较强的抗猪口蹄疫病毒活性,从而为研究猪口蹄疫免疫防治新技术奠定了重要基础。
- 杜以军姜平李玉峰王先炜
- 关键词：猪Α干扰素重组腺病毒口蹄疫病毒
