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幽门螺杆菌hp0521基因编码蛋白的生物信息学分析被引量：1: 2016年; 目的:对4株幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中hp0521基因编码的细胞毒素相关基因2(cytotoxin-associated gene 2,Cag2)蛋白从生物信息学角度进行基本理化性质、信号肽及功能的预测分析。方法:用PCR技术克隆测序获得4株Hp菌株的hp0521基因序列,生物信息学工具分析其编码Cag2蛋白的基本理化性质、有无信号肽及蛋白指纹图谱。结果:成功克隆测序4株Hp菌株的hp0521基因序列,提交基因库后获得相应登录号;hp0521基因编码的Cag2蛋白氨基酸数目和相对分子质量大小不同,理论等电点偏碱性,为稳定亲水性蛋白,不存在信号肽;Cag2蛋白指纹图谱分析存在DNA拓扑异构酶Ⅰ、IL-3细胞因子、抗增殖蛋白BTG1家族、介导细胞壁延伸的蛋白、卤酸脱卤酶/环氧水解酶、调节染色体凝集功能RCC1家族等蛋白标签。结论:Hp中hp0521基因编码的Cag2蛋白可能介导细胞壁延伸和调节染色体凝集,参与致病信号通路的传导,可能具有DNA拓扑异构酶Ⅰ、卤酸脱卤酶/环氧水解酶等相应酶活性。; 沈以新倪颖徐青青凃晶晶沈楚莹李欣悦邵世和; 关键词：幽门螺杆菌 CAG致病岛生物信息学

幽门螺杆菌cag1基因缺陷株的构建与鉴定被引量：1: 2013年; 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础。方法:使用同源重组技术,通过PCR扩增出cag1基因两侧同源臂序列,酶切纯化后分别连接于带卡那霉素抗性标志的载体两端,构建成cag1基因自杀质粒。将该质粒通过电穿孔导入受体野生株中,通过抗性筛选与PCR验证得到cag1基因缺陷株,与人胃上皮GES-1细胞共培养后,与野生株比较,观察细胞形态变化。结果:成功敲除H.pylori cag1基因,获得cag1基因缺陷株;与野生株相比,cag1基因缺陷株破坏细胞的能力降低。结论:成功获得幽门螺杆菌cag1基因缺陷株;cag1基因缺失后H.pylori对GES-1细胞的毒力减弱。; 凌峰王晓春陈珵余敏朱虹罗彩凤邵世和; 关键词：幽门螺杆菌基因缺陷

幽门螺杆菌cag致病岛CagⅠ蛋白的生物信息学分析被引量：1: 2014年; 目的用生物信息学分析方法对幽门螺杆菌(HP)cag致病岛中的CagⅠ蛋白进行综合分析,推断其结构和功能,并探索其在HP致病中的作用。方法用antherprot V5.0软件和网络数据库等分析预测其结构,BLAST程序搜索其同源序列;用PROSITE SCAN和Fingerprint服务器分析推测其潜在的功能。结果 CagⅠ蛋白有361个氨基酸残基,分子量(Mr)为39 370,理论等电点为5.56;N'端20个氨基酸残基为信号肽,有三段跨膜区,二级结构和三级结构中螺旋结构为主体(约80%);CagⅠ为稳定的疏水蛋白,保守性很强,有N-糖基化作用位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和豆蔻酰化作用位点;存在膜蛋白、菌毛蛋白、转运蛋白、ATP/GTP酶、转录调节因子、分泌系统蛋白等多个蛋白质标签。结论 CagⅠ蛋白定位于HP外膜,是Ⅳ型分泌系统重要组成蛋白质,在信号转导和物质转运过程中充当信使或载体,可能具有水解酶及ATP/GTP酶活性。; 谢立苹姚逸正朱虹徐驰田树伟梁广舒倪颖邵世和; 关键词：幽门螺杆菌 CAG致病岛生物信息学功能分析

幽门螺杆菌CagL蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2013年; 目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)CagL蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并鉴定其特性。方法:用原核表达并纯化的CagL融合蛋白免疫BALB/c小鼠,6周后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经亚克隆筛选获得阳性杂交瘤细胞株;ELISA法鉴定mAb的亚型;间接ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清和腹腔积液效价及其相对亲和力;相加ELISA法分析mAb的识别表位;蛋白质印迹法鉴定mAb特异性;冻溶法检测杂交瘤细胞株的稳定性。结果:获得3株能稳定分泌抗CagL的杂交瘤细胞株,其中两株单抗属IgM类,一株单抗属IgG2a类,轻链型别均为κ型;杂交瘤细胞培养上清效价在1∶64～1∶128之间,腹腔积液的效价均达1∶16 000以上;相对亲和力较高;3株mAb识别3种不同的抗原表位;3株mAb都能与融合蛋白反应,其中两株能与H.pylori全菌蛋白发生特异性反应;杂交瘤细胞经冻存复苏后,体外传代仍能稳定分泌mAb。结论:成功制备了抗H.pylori CagL蛋白的单克隆抗体,为深入研究幽门螺杆菌CagL蛋白的功能和Ⅳ型分泌系统的致病机制奠定了基础。; 朱虹陈珵凌峰邵晨余敏邵世和; 关键词：幽门螺杆菌单克隆抗体杂交瘤

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