国家自然科学基金(39900176)
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
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- 丙型肝炎病毒核心蛋白激活肝癌细胞血管内皮生长因子的表达被引量：5
- 2001年
- 目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白对肝瘤细胞血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ， ＶＥＧＦ）表达的影响。方法将 ＨＣＶ核心基因 ｃＤＮＡ插入真核表达载体 ＰＢＫ－ＣＭＶ的Ｈｉｎｄ Ⅲ和ＢａｍＨ １位点间，构建重组质粒ＰＢＫ－ＨＣＶｃ。再将重组质粒ＰＢＫ－ＨＣＶｃ和空载体分别导入肝癌细胞株ＨｅｐＧ２中，Ｇ４１８筛选，ＲＴ－ＰＣＲ、蛋白印迹鉴定ＨＣＶ核心蛋白表达。免疫组织化学，蛋白印迹检测ＶＥＧＦ蛋白表达；原位杂交， ＲＴ－ＰＣＲ检测ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ。结果重组质粒ＰＢＫ－ＨＣＶｃ在ＨｅｐＧ２细胞中有稳定表达；表达ＨＣＶ核心蛋白的细胞ＨｅｐＧ２－Ｃ的ＶＥＧＦ在蛋白水平和ｍＲＮＡ水平较转染空载体的细胞ＨｅｐＧ２－ＣＭＶ明显升高。结论ＨＣＶ核心蛋白能激活ＶＥＧＦ表达，可能对肝细胞癌的生长具有促进作用。
- 刘重阳刘为纹杨建民房殿春
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白肝细胞癌血管内皮生长因子
- 乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因融合表达蛋白对肝癌细胞胰岛素样生长因子1受体表达的影响
- 2007年
- 目的建立HBVX-HCVC融合蛋白细胞表达模型,并探讨其对细胞胰岛素样生长因子-1的影响。方法双酶切质粒pXT1-X,得到完整的HBVX基因片段后,将其插入到质粒PBK-CMV和PBK-HCVC的相应酶切位点,得到重组质粒PBK-X和PBK-X-C;再将质粒PBK-CMV、PBK-X、PBK-HCVC和PBK-X-C分别导入肝癌细胞株HepG2中,G418筛选,RT-PCR、蛋白印迹鉴定HBVX和HCVC蛋白表达。流式细胞仪、蛋白印迹检测IGF-1受体蛋白表达。结果质粒PBK-CMV、PBK-X、PBK-HCVC和PBK-X-C在HepG2细胞中有稳定表达。表达融合蛋白的细胞的胰岛素样生长因子-1受体活性较转染空载体的细胞及单独表达HBVX、HCVC蛋白的细胞明显升高。结论HBVX-HCVC融合蛋白能显著上调胰岛素样生长因子-1受体活性,提示HBV、HCV可能具有协同致癌作用。
- 刘重阳王军杨丽
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因核心基因胰岛素样生长因子-1受体
- 丙型肝炎病毒核心蛋白对HePG_2细胞增殖和细胞周期的影响
- 2001年
- 目的 观察核心蛋白对细胞增殖和细胞周期调控的影响。方法 观察表达HCV核心蛋白的细胞株HePG2 C和作为对照的细胞株HePG2 CMV的细胞形态 ;绘制细胞生长曲线 ;检测细胞周期 ;用流式细胞仪、免疫组化染色检测PCNA ,P16 ,P2 7,P5 3;半定量RT PCR检测P16 ,P2 7,P5 3mRNA。结果 转染重组质粒PBK HVCC的HePG2 C细胞与转染空载体PBK CMV的HePG2 CMV细胞相比细胞形态未见明显变化。生长曲线显示HePG2 细胞在转染PBK HCVC和空载体PBK CMV后 ,生长速度无明显变化。检测转染空载体的细胞HePG2 CMV 81.3%进入G0 /G1期 ,7.7%进入S期 ;而转染PBK HCVC的细胞HePG2 C 73%进入G0 /G1期 ,13.7%进入S期。在进一步分子机制的探讨中发现HePG2 C细胞PCNA、P5 3表达显著增加 ,P16、P2 7表达显著降低。同样的变化也发生在转录水平。结论 HCV核心蛋白可能通过调节某些基因的转录与表达 ,增加细胞DNA合成 ,扰乱细胞周期 ,进而参与致癌过程。
- 刘重阳刘为纹杨建民陈东风房殿春
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌细胞周期HEPG2细胞增殖
- HBVX基因-HCVC基因cDNA融合基因真核表达载体的构建及其表达
- 2003年
- 目的 构建HBVX HCVC融合基因真核表达载体 ,并获得稳定表达该基因的HepG2细胞株。方法 双酶切质粒pXT1 X ,得到完整的HBVX基因片段后 ,将其插入到质粒PBK CMV和PBK HCVC的相应酶切位点 ,得到重组质粒PBK X和PBK X C ;再将质粒RBK CMV、PBK X、PBK HCVC和PBK X C分别导入肝癌细胞株HepG2中 ,G418筛选 ,RT PCR、蛋白印迹鉴定HBVX和HCVC蛋白表达。结果 质粒PBK CMV、PBK X、PBK HCVC和PBK X C在HepG2细胞中有稳定表达。结论 成功构建HBVX HCVC融合基因真核表达载体 。
- 刘重阳刘为纹陈东风王军
- 关键词：真核表达载体HEPG2细胞株
- 乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因共表达对血管内皮细胞生长因子的影响被引量：1
- 2006年
- 目的建立乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因(HBV X-HCV C)共表达HepG2细胞模型,并探讨其对血管内皮细胞生长因子表达的影响。方法双酶切质粒pXT1-X,得到完整的HBV X基因片段后,将其插入到质粒PBK CMV和PBK-HCV C的相应酶切位点,得到重组质粒PBK-X和PBK-X-C;再将质粒PBK-CMV、PBK-X、 PBK-HCV C和PBK-X-C分别导入肝癌细胞株HepG2中,G418筛选,逆转录聚合酶链反应、Western blot鉴定HBV X和HCV C蛋白表达;免疫组织化学、Western blot检测血管内皮细胞生长因子蛋白质表达。结果质粒PBK-CMV、 PBK-X、PBK-HCV C和PBK X-C在HepG2细胞中有稳定表达。共表达HBV X-HCV C蛋白的细胞血管内皮细胞生长因子蛋白质表达较转染空载体的细胞及单独表达HBV X、HCV C蛋白的细胞明显升高。结论HBV X-HCV C共表达能显著上调血管内皮细胞生长因子蛋白质表达,提示HBV、HCV可能具有协同致癌作用。
- 刘重阳刘为纹陈东风王军
- 关键词：X蛋白病毒核心蛋白
- 丙型肝炎病毒核心蛋白抑制肝癌细胞P16、P27的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨HCV核心蛋白对肝瘤细胞P16、P2 7表达的影响。方法 将HCV核心基因cDNA插入真核表达载体PBK CMV的HindⅢ和BamHⅠ位点间 ,构建重组质粒PBK HCVc。再将重组质粒PBK HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中 ,G418筛选 ,RT PCR、蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达。免疫组化 ,蛋白印迹检测P16、P2 7蛋白表达 ;RT PCR检测P16、P2 7mRNA。结果 重组质粒PBK HCVc在HepG2细胞中有稳定表达 ;表达HCV核心蛋白的细胞HepG2 C的P16、P2 7在蛋白水平和mRNA水平较转染空载体的细胞HepG2 CMV明显下降。结论 HCV核心蛋白能抑制P16、P2 7表达 。
- 刘重阳刘为纹杨建民陈东风房殿春
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白端粒酶
- 乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因融合表达蛋白对肝癌细胞端粒酶活性的影响
- 2005年
- 目的建立HBVX-HCVC融合蛋白细胞表达模型,并探讨其对细胞端粒酶活性的影响。方法双酶切质粒pXT1-X,得到完整的HBVX基因片段后,将其插入到质粒PBK-CMV和PBK-HCVC的相应酶切位点,得到重组质粒PBK-X和PBK-X-C;再将质粒PBK-CMV、PBK-X、PBK-HCVC和PBK-X-C分别导入肝癌细胞株HepG2中,G418筛选,RT-PCR、蛋白印迹鉴定HBVX和HCVC蛋白表达。PCR-ELISA法检测端粒酶活性。结果质粒PBK-CMV、PBK-X、PBK-HCVC和PBK-X-C在HepG2细胞中有稳定表达。表达融合蛋白的细胞的端粒酶活性较转染空载体的细胞及单独表达HBVX、HCVC蛋白的细胞明显升高。结论HBVX-HCVC融合蛋白能显著上调端粒酶活性,提示HBV、HCV可能具有协同致癌作用。
- 刘重阳陈东风王军
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因核心基因端粒酶
- 丙型肝炎病毒核心蛋白在HepG2细胞中的表达及其对端粒酶活性的影响被引量：1
- 2002年
- 目的 建立HCV核心蛋白细胞表达模型 ,并探讨其对细胞端粒酶活性的影响。方法用PCR法扩增出HCV核心基因cDNA ,将其插入真核表达载体pBK CMV的HindⅢ和BamHⅠ位点间 ,构建重组质粒pBK HCVc。再将重组质粒pBK HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中 ,G418筛选 ,RT PCR、免疫组化和蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达。PCR ELISA法检测端粒酶活性。结果 构建的pBK HCVc质粒在HepG2细胞中有稳定表达。表达HCV核心蛋白的细胞HepG2 C的端粒酶活性较转染空载体的细胞HepG2 CMV明显升高。结论 HCV核心蛋白上调了端粒酶活性 ,可能是HCV诱发肝细胞癌的一种途径。
- 刘重阳刘为纹杨建民杨仕明房殿春
- 关键词：丙型肝炎HEPG2细胞丙型肝炎病毒核心蛋白端粒酶肿瘤发生
