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安徽省自然科学基金(050430604)

作品数：10 被引量：20H指数：3
相关作者：张胜权罗欣胡道军柴瑜陶千山更多>>
相关机构：安徽医科大学绿十字(中国)生物制品有限公司更多>>
发文基金：安徽省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 7篇医药卫生
  • 3篇生物学

主题

  • 8篇细胞
  • 4篇白细胞
  • 4篇白细胞介素
  • 4篇病毒
  • 3篇克隆
  • 3篇HELA细胞
  • 3篇IL-15
  • 2篇蛋白
  • 2篇蛋白质
  • 2篇蛋白质类
  • 2篇信号
  • 2篇炎症
  • 2篇炎症因子
  • 2篇乙型
  • 2篇乙型肝炎
  • 2篇乙型肝炎病毒
  • 2篇上调
  • 2篇体外
  • 2篇人白细胞
  • 2篇人白细胞介素

机构

  • 10篇安徽医科大学
  • 1篇绿十字(中国...

作者

  • 10篇张胜权
  • 9篇罗欣
  • 5篇黄海良
  • 5篇陶千山
  • 5篇柴瑜
  • 5篇胡道军
  • 2篇徐从贞
  • 2篇陈兵
  • 1篇鲁云霞
  • 1篇方敏
  • 1篇朱娟娟
  • 1篇张晓玲
  • 1篇黄海量

传媒

  • 4篇中国生化药物...
  • 2篇安徽医科大学...
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇第三军医大学...
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇国际免疫学杂...

年份

  • 1篇2011
  • 4篇2010
  • 1篇2009
  • 1篇2008
  • 2篇2007
  • 1篇2006
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
IL-15表达调控研究进展被引量：1
2010年
IL-15是一类重要的促炎症因子，在机体固有免疫中发挥着重要的调控作用。类风湿性关节炎、银屑病、系统性红斑狼疮等许多自身免疫性疾病与IL-15的表达异常密切相关。IL-15基因表达存在着复杂的调控机制。目前国内外研究发现多种因素以多种机制参与IL-15基因表达各个阶段的调节，尤其是转录水平的单核及巨噬细胞功能刺激因子调节和转录后水平的两种特异性信号肽调节，以及最近发现的外源性IL-15和短信号肽IL-15对IL-15的负反馈调节。
陶千山张胜权
关键词：IL-15促炎症因子
人白细胞介素29在cos-7细胞中表达及其体外抗乙型肝炎病毒作用被引量：2
2007年
目的：克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在cos-7细胞中表达，并初步探讨表达产物体外抗乙肝病毒（HBV）作用。方法：分离外周血单个核细胞；VSV感染后，提取总RNA，通过一步法RT-PCR获得IL-29全长cDNA。DNA测序正确后，将IL-29 cDNA的编码框序列构建到真核表达载体psectagB/His-myc中。氨苄青霉素板筛选及PCR鉴定，挑出阳性克隆进行扩增、转染cos-7细胞并经潮霉素及有限稀释法筛选稳定表达克隆。SDS-PAGE、Western blot鉴定，Ni2＋亲和层析分离纯化得到主带分子量为33000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白。体外以HepG2.2.2.15为靶细胞观察rhIL-29对HepG2.2.2.15培养上清液中HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg）影响。结果：成功获得人IL-29全长cDNA并在cos-7细胞中稳定表达。SDS-PAGE、Western blot分析显示表达的rhIL-29融合蛋白为几个蛋白质区带，分子量在20000-33000之间纯化的rhIL-29融合蛋白，主带在33000附近。rhIL-29融合蛋白具有抑制HBsAg及HBeAg分泌作用并且具有剂量效应，抑制率分别达85%。结论：获得具有生物活性的rhIL-29融合蛋白。rhIL-29融合蛋白在体外具有抑制HepG2.2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg作用。
陈兵罗欣鲁云霞徐从贞张胜权
关键词：克隆抗乙肝病毒活性
白介素29体外抗乙肝病毒作用被引量：5
2009年
目的研究白介素29(IL-29)体外抗乙肝病毒的效果。方法从RNA水平探讨了IL-29抗乙肝病毒的效果。RT-PCR分析IL-29诱导抗病毒蛋白MxA、2′,5-′OAS、PKR和RNase L mRNA水平表达;同时Western blot分析IL-29激活的信号通路以探讨其抗乙肝病毒的机理。结果IL-29能明显降低HepG2.2.15细胞中乙肝病毒mRNA的水平,且能够上调抗病毒蛋白MxA和2′,5-′OAS的mRNA表达并激活ERK1/2、AKT信号途径。结论在HepG2.2.15细胞中IL-29有显著的抗乙肝病毒作用。
柴瑜罗欣黄海良胡道军陶自泽张胜权
关键词：乙肝病毒HEPG2.2.15细胞
IL-10抑制脂多糖诱导的Hela细胞IL-15和IL-6转录被引量：5
2010年
目的研究IL-10对脂多糖(LPS)诱导的Hela细胞IL-15mRNA和IL-6 mRNA表达的影响,分析其激活的信号转导通路。方法培养的Hela细胞,经不同浓度的LPS及IL-10单独或联合处理后,提取细胞总RNA和总蛋白,RT-PCR分析IL-15和IL-6转录水平的变化,Westernblot分析信号转导通路蛋白变化。结果RT-PCR分析得知①1ng～10μgLPS刺激Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平均明显上调(与对照组比较:P<0.01),且存在剂量依赖关系,100ng/mL时达峰值;100ng/mLLPS刺激Hela细胞0～24h,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平亦明显上调(与对照组比较:P<0.01),24h内存在时间依赖关系,12h时达峰值。②单独IL-10(10ng/mL)作用于Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA没有明显变化(与对照组比较:P>0.05)。不同浓度的IL-10(1,10,100ng/mL)均下调100ng/mLLPS诱导的Hela细胞IL-15 mRNA和IL-6 mRNA的表达,且浓度越高IL-10抑制作用越明显。Western blot分析显示LPS主要通过磷酸化信号蛋白PI3K/AKT和ERK1/2上调IL-15和IL-6转录,IL-10能阻断AKT的磷酸化而对ERK1/2的磷酸化没有影响。结论IL-10可抑制LPS诱导的炎症细胞因子IL-15和IL-6的转录,这可能与其阻断AKT的磷酸化有关,因而,IL-10可能应用于某些临床感染性疾病的预防和治疗。
胡道军罗欣黄海良柴瑜陶千山张晓玲张胜权
关键词：IL-10IL-15IL-6信号转导通路
人白介素-15基因系列启动子克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建被引量：3
2011年
目的克隆人白介素-15(IL-15)基因系列启动子,构建IL-15基因启动子荧光素酶报告基因载体。方法通过PCR方法从HaCaT细胞基因组DNA中获得IL-15基因编码序列5′上游七段逐步缺失的IL-15启动子序列;双酶切后,分别重组到含萤火虫荧光素酶的报告基因pGL3-Basic载体上,构建IL-15基因系列启动子报告基因载体;用脂质体转染法将含最长启动子序列的报告基因载体转染至HaCaT细胞,并设置空白对照组和LPS组分别处理;24 h后采用双荧光素酶报告基因系统检测其启动子活性。结果经PCR方法扩增出七段逐步缺失的IL-15基因启动子片段,PCR及双酶切鉴定各重组体构建正确;瞬时转染HaCaT细胞后经报告基因检测得知所克隆最长序列具有启动子活性。结论成功构建了IL-15系列启动子报告基因载体,并在HaCaT细胞中初步活性分析得知所克隆IL-15基因调控系列内包含启动子核心区域,为进一步研究IL-15表达调控机制奠定了实验基础。
陶千山罗欣柴瑜胡道军张胜权
关键词：IL-15启动子
人白细胞介素15基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
2006年
目的克隆人白细胞介素(IL)15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达。方法从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出hIL-15全长cDNA。构建到原核表达载体pET28a(+)中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,扩增后IPTG诱导表达。通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。结果成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中。SDS-PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16·1ku,与理论值相符。结论获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础。
罗欣徐从贞方敏张胜权
关键词：基因表达重组融合蛋白质类
人白细胞介素29对Hela细胞抗病毒保护作用
2008年
目的研究重组人白介素29(rhIL-29)对Hela细胞的抗病毒保护作用及其作用机制。方法传代培养的Hela细胞按一定密度接种于24孔培养板,分别加入不同浓度的rhIL-29,培养24h后换液一次,继续以含rhIL-29的培养基培养16h,用水疱性口炎病毒(VSV)感染后,以不加rhIL-29为空白对照。RT-PCR分析MxA蛋白、2′,5′-寡腺苷酸合成酶(2′,5′-OAS)mRNA及VSV的RNA水平;MTT及细胞形态学检测分析rhIL-29对Hela细胞的抗病毒保护作用。结果经rhIL-29处理的Hela细胞的MxA蛋白、2′,5′-OAS的mRNA表达明显上调,VSVRNA含量显著下降。MTT分析结果rhIL-29对Hela细胞有保护作用且具有剂量依赖关系(P<0.01)。结论rhIL-29通过上调MxA蛋白、2′,5′-寡腺苷酸合成酶,抑制VSV增殖具有一定的保护Hela细胞免受病毒损伤的作用。
罗欣黄海良张胜权
关键词：抗病毒药蛋白质类
TLR7激活对HepG2.2.15细胞株炎症因子TNF-α和IL-6表达的上调作用被引量：1
2010年
目的比较乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组稳定转染细胞株HepG2.2.15和肝癌细胞株HepG2中TLR7表达,分析HepG2.2.15细胞中TLR7激活后诱导炎症因子表达。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR分析HepG2和HepG2.2.15中TLR7受体、IL-6和TNF-αmRNA水平表达。TLR7配体Gardiquimod刺激20min后,Western blot分析激活的信号通路;刺激6h,Real-timePCR分析TLR7激活后IL-6和TNF-αmRNA水平表达变化;刺激48h,ELISA法分析IL-6和TNF-α蛋白质水平表达变化。结果HepG2.2.15细胞株中TLR7mRNA水平表达比HepG2中的表达高约30倍(P<0.01)。在没有任何刺激的条件下,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA水平表达比HepG2中的表达分别高约7.5和9.3倍;Gardiquimod刺激6h后,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA表达水平明显升高,并具有剂量依赖关系(P<0.01),而HepG2细胞在相同的刺激下IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高并不明显(P<0.05);刺激48h后,IL-6和TNF-α蛋白质表达水平变化与其mRNA水平变化一致(P<0.01)。HepG2.2.15细胞株经Gardiquimod刺激后NF-κBp65亚单位进入细胞核中量显著增加。结论TLR7激活后能够上调HepG2.2.15细胞中IL-6和TNF-α的表达,提示TLR7可能在乙型病毒性肝炎的病理生理过程中发挥作用。
张胜权胡道军朱娟娟罗欣黄海量柴瑜陶千山
关键词：乙型肝炎病毒HEPG2.2.15细胞株促炎症因子
N-乙酰半胱氨酸抑制IL-18在血管平滑肌细胞中诱导TNF-α和IL-6表达被引量：3
2010年
目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对白细胞介素18(IL-18)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:培养的VSMC细胞,加入或不加入NAC(5mmol/L)处理1h后,再以不同浓度的IL-18刺激不同时间,通过ELISA测定培养上清IL-6及TNF-α蛋白质水平,加入IL-18(100μg/L)6h后RT-PCR分析细胞中相应的mRNA水平。同时Westernblot分析NAC对IL-18激活的NF-κB的影响。结果:通过IL-18刺激的VSMC培养上清中的IL-6及TNF-α水平及细胞中的mRNA水平显著升高(P<0.01),且具有时间和剂量依赖关系(P<0.01)。NAC(5mmol/L)显著抑制IL-18诱导的IL-6及TNF-α的mRNA和蛋白质水平表达(P<0.01)。Westernblot分析显示NAC能够抑制IL-18对NF-κB的激活作用。结论:NAC体外可以抑制IL-18在SMC中诱导的IL-6及TNF-α表达。
张胜权罗欣黄海良柴瑜胡道军陶千山
关键词：N-乙酰半胱氨酸白细胞介素6白细胞介素18血管平滑肌细胞
HIL-29通过激活MAPK信号途径上调Hela细胞TLR3表达
2007年
目的探讨人白细胞介素29（hIL-29）对Hela细胞TLR3受体表达的影响。方法重组的hIL-29加入Hela细胞中，以RT—PCR分析Toll样受体3（TLR3）、2’5’-寡聚腺苷酸合成酶（2＇5＇-OAS）、MXA蛋白的mRNA表达水平变化，western—blot分析TLR3受体蛋白质水平变化及信号蛋白MAPK（ERK1／2）激活变化。结果hIL-29显著上调TLR3受体的mRNA水平和蛋白质水平的表达，并且具有剂量依赖性。hIL-29刺激Hela细胞18h后，2’5’-OAS、MXA蛋白的mRNA表达水平显著升高（P〈0.01）。western—blot分析hIL-29刺激Hela细胞5～30min后，信号蛋白ERK1／2磷酸化水平显著升高（P〈0.01）。结论hIL-29可能通过激活ERK1／2上调（2＇5＇-OAS）、MXA和TLR3的表达。
罗欣黄海良陈兵张胜权
关键词：ERK1/2
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