国家自然科学基金(30801023)
- 作品数：9 被引量：19H指数：2
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- Graves'病患者外周血T细胞表面膜型CD28及血清中可溶性CD28的表达及其意义
- 2012年
- 目的分析Graves′病(Graves′disease,GD)患者外周血T细胞表面膜型CD28及血清中可溶性CD28的表达水平,探讨CD28分子在GD免疫病理机制中的作用。方法选取105例GD患者为试验组,67例健康者为对照组,通过溶血及流式细胞术检测所有受试对象外周血T细胞表面膜型CD28的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中可溶性CD28的含量。结果试验组外周血CD4+CD28+T细胞为(23.367±8.562)%,CD8+CD28+T细胞为(10.156±3.114)%,较对照组[分别为(30.786±5.143)%和(17.200±3.624)%]显著减少(P<0.0.5、P<0.0.1),血清中可溶性CD28水平观察组[(2.35±0.58)μg/L]较对照组[(0.53±0.23)μg/L]显著增加(P<0.01)。结论共刺激分子CD28很有可能参与了GD的免疫病理机制。
- 王凤鸣沈双李琼刘彤孙静
- 人可诱导的共刺激分子转基因细胞的构建及其对B细胞产生抗体的影响被引量：2
- 2010年
- 目的构建含人可诱导共刺激分子(ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人ICOS基因的L929细胞株,并初步研究ICOS对B细胞产生抗体的影响。方法采用RT-PCR方法从扁桃体激活的T细胞总RNA中扩增出ICOS cDNA,双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达ICOS分子的L929细胞株;采用RT-PCR和流式细胞仪分析ICOS的分子表达,ELISA法研究ICOS信号对B细胞体外产生抗体的作用。结果成功地构建了含ICOS基因的重组逆转录病毒载体;筛选获得能稳定高表达人ICOS分子的L929转基因细胞,ICOS在PWM体外培养体系中,能有效地促进B细胞生长及IgG的分泌。结论 ICOS是CD28家族的新成员,在机体免疫应答过程中起着重要的作用。
- 刘彤王凤鸣孙静张学光
- 关键词：逆转录病毒基因转染
- 转染人GL50基因细胞株的建立及其对T细胞体外增殖与活化的促进作用
- 2011年
- 目的:建立稳定表达人协同刺激分子GL50的转基因细胞,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激效应。方法:RT-PCR法从人B淋巴瘤Daudi细胞中克隆人GL50编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体,构建pIRES2-EGFP-GL50重组子。用脂质体法转染小鼠成纤维L929细胞株,经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析GL50分子在L929/GL50细胞膜上的表达,CCK-8法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析L929/GL50转基因细胞对T淋巴细胞体外增殖与活化的影响。结果:成功建立稳定表达GL50分子的L929/GL50转基因细胞。该转基因细胞在体外能显著地促进T细胞增殖;促进T细胞的活化及其对IL-4、IL-10和IL-17等细胞因子的分泌。结论:ICOS/GL50信号在机体免疫应答过程中发挥了重要作用,GL50转基因细胞的成功构建为进一步研究ICOS/GL50分子的生物学功能奠定了物质基础。
- 沈双王凤鸣王婷陈礼文於葛华张学光
- 关键词：转基因细胞T细胞
- 共刺激分子在Graves病甲状腺组织中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的探讨共刺激分子在Graves病(GD)的甲状腺组织中的表达及其免疫病理意义。方法运用细胞培养、流式细胞术和RT-PCR技术,检测10例GD组织和10例非毒性甲状腺肿(NTG)组织中共刺激分子基因的表达水平,原代培养的甲状腺滤泡细胞(TFCs)共刺激分子的表达及细胞因子对其表面共刺激分子表达的调节作用。结果GD组织一系列共刺激分子基因的表达明显高于NTG组,其中共刺激分子CD40、CD40L、OX40L和ICOS基因表达尤为显著;炎症类细胞因子可上调原代培养的TFCs表达共刺激分子CD40和GL50。结论共刺激分子在GD组织异常表达,提示CD40-CD40L、ICOS-GI50及OX40-OX40L信号在GD的局部免疫病理过程中起重要作用。
- 陈蕾李廷居颂光於葛华蒋联吴敏张学光
- 关键词：共刺激分子GRAVES病甲状腺滤泡细胞
- Graves病患者外周血CD4^+CD28^-T细胞亚群检测的临床意义被引量：1
- 2010年
- 目的分析Graves病(GD)患者外周血CD4+CD28-T细胞亚群的数量和功能的变化,并初步探讨其在GD发病中的可能作用。方法采用荧光标记、胞内细胞因子染色和流式细胞术分析61例GD患者外周血CD4+CD28-T细胞的表型特征,并与30名GD组相匹配的健康受试者作对照。结果与正常对照组相比,CD4+CD28-T细胞在GD患者外周血中显著升高(P<0.01),并且呈现其百分率与该病的临床体征甲状腺肿大和突眼及甲状腺自身抗体TRAb成正相关;CD4+CD28-T细胞表面上调表达共刺激分子ICOS,活化诱导后分泌IFN-γ,呈现出Th1样功能特征。结论循环CD4+CD28-T细胞可能是参与GD自身免疫病理的自身免疫反应性T细胞。
- 陈蕾李廷於葛华蒋联吴敏张学光
- 关键词：GRAVES病共刺激分子TH1
- Graves病甲状腺共刺激分子GL50-ICOS的表达及其免疫病理意义
- 2010年
- 目的 研究共刺激分子GL50-ICOS在Graves病（GD）甲状腺组织中的表达及其免疫病理意义.方法运用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western印迹和免疫组化技术,检测GD甲状腺组织和原代培养的甲状腺滤泡细胞（TFC）共刺激分子GL50和ICOS的表达.结果 （1）与正常同龄对照相比,CD4＋CD28-T细胞群体在GD患者外周血中显著升高,其表面ICOS表达上调.（2）RT-PCR显示,GD患者甲状腺组织中有ICOS mRNA表达,与对照非毒性甲状腺肿（NTG）组相比具有统计学差异（P＜0.01）.（3）Western印迹显示,GL50蛋白在10例GD患者组织中全部表达,较对照组差异有统计学意义（P＜0.01）.（4）与对照甲状腺腺瘤组相比,GL50在20例GD患者组织切片中全部检出,而对照组无阳性表达（P＜0.01）.（5）炎性细胞因子刺激体外原代培养的甲状腺滤泡细胞表面上调表达GL50（P＜0.05）.结论共刺激分子GL50-ICOS在Graves病甲状腺组织异常表达.
- 陈蕾李廷殷洪二居颂光於葛华蒋联王凤鸣吴敏张学光
- 关键词：共刺激分子GRAVES病甲状腺
- GL50单克隆抗体对多发性骨髓瘤细胞体外生长的抑制和促凋亡作用
- 2012年
- 目的分析ICOS／GL50分子在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）细胞XG-2上的表达，探讨GL50单克隆抗体（mAb）11C4对XG-2体外生长的生物学效应。方法采用免疫荧光标记和流式细胞术检测XG2细胞表面ICOS／GL50等共刺激分子的表达，台盼蓝染色计数检测不同浓度11C4mAb对XG-2细胞体外生长的作用。RT-PCR法检测XG-2细胞中Bcl-XL和Bax mRNA的表达。结果ICOS／GL50分子共表达于XG-2细胞表面，11C 4mAb可显著抑制XG-2细胞的体外生长，并诱导其凋亡。结论11C4 mAb对MM细胞XG-2的体外生长具有显著的抑制及促凋亡作用，为MM的临床生物治疗提供新的靶点。
- 王凤鸣刘彤沈双王婷孙静
- 关键词：单克隆抗体
- 尘螨变应性哮喘患儿外周血T淋巴细胞中协同刺激分子和细胞因子的异常表达及其意义被引量：8
- 2012年
- 目的分析变应原刺激前后变应性哮喘患儿外周血T淋巴细胞表面协同刺激分子及胞内细胞因子表达的变化,探讨CD28家族不同协同刺激信号在变应性哮喘免疫病理机制中的作用。方法选取尘螨变应性哮喘患儿(哮喘组)和健康儿童(健康对照组)各30例,密度梯度离心法分离其外周血单个核细胞,应用免疫荧光标记和流式细胞术检测尘螨刺激前后体外培养的CD4+T淋巴细胞表面协同刺激分子CD28、可诱导共刺激分子(ICOS)和细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达,运用细胞内染色技术检测CD4+T淋巴细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、IL-4和IL-13的表达。并运用统计学方法比较哮喘组和健康对照组之间的差异。结果哮喘组患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面CD28和ICOS的表达与健康对照组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05),而CTLA-4的表达显著降低(P<0.01);细胞内IFN-γ表达水平显著升高(P<0.000 1),而IL-4和IL-13表达水平无明显变化(Pa>0.05)。经尘螨刺激后,体外培养的哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面ICOS的表达较健康对照组儿童显著上调(P<0.000 1),CD28和CTLA-4的表达则无明显变化(Pa>0.05);细胞内细胞因子IL-4和IL-13的表达显著上调(Pa<0.000 1),而IFN-γ的表达则无明显差异(P>0.05)。结论变应性哮喘患儿外周血存在组成性的CTLA-4的表达下调和细胞因子IFN-γ的表达上调,介导Th1型细胞的异常活化;而变应原尘螨的刺激又介导了ICOS依赖的Th2型细胞的分化,导致Th1/Th2失衡。
- 施筠王婷於葛华王凤鸣
- 关键词：尘螨变应性哮喘协同刺激分子细胞因子
- 尘螨变应性哮喘患儿外周血辅助性T淋巴细胞和调节性T淋巴细胞的表达及其临床意义被引量：7
- 2013年
- 目的分析尘螨阳性的哮喘患儿外周血辅助性T淋巴细胞（Th）和调节性T淋巴细胞（Treg）的表达及其临床意义。方法选取尘螨阳性的哮喘患儿（尘螨阳性哮喘组）和健康儿童（健康对照组）各30例。采集2组儿童外周血，密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞（PBMC），胞内染色技术和流式细胞术检测尘螨刺激前后CD4-T淋巴细胞内干扰素-γ（IFN-γ）、IL4和叉状头螺旋转录因子（Foxp3）的表达，尘螨刺激后，PBMC中分别加入阻断型抗人可诱导共刺激分子（ICOS）、抗人CD28或抗人细胞毒T淋巴细胞相关抗原（CTLA-4）单克隆抗体共培养3d后，检测Thl（CD4＋IFN-γ＋T淋巴细胞）、Th2（CD4＋IL4＋T淋巴细胞）和Treg（CD4＋CD25＋Foxp3＋T淋巴细胞）的表达，比较各组之间的差异。结果与健康对照组相比，尘螨阳性哮喘组尘螨刺激前外周血Thl细胞显著增加（P〈0．05），Treg细胞显著减少（P〈0．05），Th2细胞差异无统计学意义（P〉0．05）；与刺激前相比，尘螨刺激后Th1和Treg细胞变化均无统计学意义（P均〉0．05），Th2细胞显著增加（P〈0．01）；加入抗ICOS和抗CD25单克隆抗体后，Thl细胞和Treg细胞变化无统计学意义，Th2细胞显著减少（P均〈0．0001）；加入抗cTLA4单克隆抗体后，Th1、Th2和Treg细胞变化差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论尘螨变应性哮喘患儿外周血中存在组成性的不依赖抗原刺激的Th1异常表达和Treg的表达减少，同时存在抗原诱导性，依赖ICOS和CD25信号的Th2异常活化。
- 施筠王凤鸣骆亚丽甘露
- 关键词：尘螨变应性哮喘辅助性T淋巴细胞调节性T淋巴细胞
