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国家自然科学基金(30901585)

作品数：7 被引量：29H指数：3
相关作者：王泽华李智敏胡沙于利利王静更多>>
相关机构：华中科技大学中山大学附属第三医院三峡大学仁和医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金山西省卫生厅科研基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 7篇医药卫生

主题

  • 6篇细胞
  • 5篇卵巢
  • 4篇卵巢癌
  • 4篇耐药
  • 4篇基因
  • 4篇EZH2基因
  • 2篇蛋白
  • 2篇人卵巢
  • 2篇人卵巢癌
  • 2篇上皮
  • 2篇上皮性
  • 2篇上皮性癌
  • 2篇顺铂
  • 2篇紫杉
  • 2篇紫杉醇
  • 2篇卵巢上皮
  • 2篇卵巢上皮性
  • 2篇卵巢上皮性癌
  • 2篇耐药性
  • 2篇癌细胞

机构

  • 7篇华中科技大学
  • 1篇中山大学附属...
  • 1篇三峡大学仁和...

作者

  • 7篇王泽华
  • 6篇于利利
  • 6篇胡沙
  • 6篇李智敏
  • 4篇蔡晶
  • 4篇王静
  • 2篇吴莉英
  • 2篇黄在菊
  • 1篇李桃
  • 1篇韩方
  • 1篇王俊杰
  • 1篇郭剑锋
  • 1篇唐慧娟
  • 1篇杨纯
  • 1篇肖兰
  • 1篇丁慧

传媒

  • 2篇中华妇产科杂...
  • 2篇华中科技大学...
  • 1篇现代妇产科进...
  • 1篇肿瘤
  • 1篇实用妇产科杂...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2011
  • 5篇2010
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
EZH2基因在人卵巢癌顺铂耐药株中的表达及其对细胞耐药性的影响被引量：9
2010年
目的:检测果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer ofzestehomolog 2,EZH2)基因在人卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨以EZH2基因为靶向的RNA干扰能否有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中的表达差异。人工构建4个靶向沉默EZH2基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,脂质体法瞬时转染至A2780/DDP细胞,RFQ-PCR检测EZH2基因的沉默水平并挑选沉默效果最佳的质粒载体,G418加压筛选得到转染稳定的细胞株。RFQ-PCR和Western印迹法检测稳定转染后A2780/DDP细胞中EZH2基因的表达,MTT法检测转染细胞对DDP的耐药性。结果:A2780/DDP细胞中EZH2 mRNA和蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(3.50±1.06)和(2.10±0.29)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。稳定转染EZH2 shRNA后的A2780/DDP细胞,EZH2的mRNA及蛋白水平的表达量分别下降(83.66±5.65)%和(77.57±3.90)%(P<0.001),其对DDP的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值下降(61.33±11.40)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EZH2基因在A2780/DDP细胞中的表达明显升高,沉默EZH2基因能有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。
胡沙王静李智敏郭剑锋于利利杨纯王泽华
关键词：EZH2基因人卵巢癌细胞耐药性WESTERN印迹法稳定转染A2780细胞
人卵巢癌细胞EZH2基因下调对E-钙粘蛋白表达的影响被引量：4
2013年
目的探讨果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)与E-钙粘蛋白(E-cadherin)在卵巢癌中的关系。方法采用短发夹状RNA的真核表达载体稳定转染人卵巢癌细胞C13*,建立稳定沉默EZH2基因的人卵巢癌细胞系shEZH2-C13*,采用Real-time PCR、Western blot和细胞免疫荧光方法检测EZH2下调后E-钙粘蛋白在mRNA水平和蛋白水平表达的变化,了解EZH2对E-钙粘蛋白表达的影响。结果 shEZH2质粒表达载体转染C13*获得的稳定转染细胞株shEZH2-C13*中,相对于未转染组,EZH2的mRNA和蛋白水平分别下降了(67.33±6.43)%和(71.21±5.77)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。在稳定沉默EZH2的细胞中,E-钙粘蛋白的mRNA水平和蛋白水平相对于未转染组分别升高(52.33±19.03)%和(60.45±3.28)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。细胞免疫荧光检测结果显示,EZH2沉默的细胞中E-钙粘蛋白表达明显高于未转染组,而空载体转染组没有明显变化。结论成功构建EZH2shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的人卵巢癌细胞系shEZH2-C13*,同时发现在卵巢癌细胞中EZH2下调能升高E-钙粘蛋白的表达水平,推测EZH2可能通过催化H3K27三甲基化,介导DNA甲基化或组蛋白甲基化,抑制E-钙粘蛋白转录,进一步触发其下游事件,影响卵巢癌的侵袭和转移。
王俊杰蔡晶高艳萍周隽丁慧李桃王泽华
关键词：卵巢癌EZH2E-钙粘蛋白表观遗传学
EZH2基因沉默逆转卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药性的实验研究被引量：2
2010年
EZH2基因是果蝇zeste基因增强子的人同源物，作为一种转录抑制因子参与基因沉默，在细胞生长调控中发挥着重要作用。研究发现，EZH2基因可以抑制相关癌基因的活性，在前列腺癌、乳腺癌。和胰腺癌等多种恶性肿瘤组织中高表达，促进肿瘤生长、侵袭和转移。然而迄今为止，对EZH2基因参与卵巢上皮性癌（卵巢癌）化疗耐药及其机制的研究鲜见报道。本研究应用真核质粒载体介导的RNA干扰技术抑制EZH2基因的表达，探讨EZH2基因沉默后逆转卵巢癌耐药细胞株A2780／DDP对顺铂耐药的可能作用机制，为EZH2基因在卵巢癌耐药的基因治疗提供实验基础。
胡沙李智敏王静唐慧娟于利利王泽华
关键词：EZH2基因卵巢上皮性癌顺铂耐药性基因沉默癌细胞逆转卵巢癌耐药
EZH2 shRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌A2780细胞系的稳定表达被引量：1
2010年
目的采用基因工程技术,构建EZH2 shRNA的真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的卵巢癌A2780细胞系。方法合成特异性干扰EZH2的shRNA片段并定向克隆插入Supersilencing shRNA质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo,获得表达载体pGPU6/GFP/Neo-shEZH2。脂质体介导重组质粒转染A2780细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,Real time RT-PCR和Western blot检测转染后细胞系EZH2的表达。结果测序结果证实重组载体构建成功,稳定转染shEZH2的A2780细胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P<0.01,差异有统计学意义。结论成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的A2780细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的卵巢癌治疗奠定实验基础。
胡沙于利利李智敏韩方吴莉英黄在菊王泽华
关键词：EZH2卵巢癌RNA干扰
EZH2基因与卵巢癌细胞系A2780化疗敏感性的关系
2011年
目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系。方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Real time RT-PCR)法和免疫印记法检测转染株的EZH2基因表达,MTT法检测细胞对顺铂的耐药性,流式细胞学检测细胞凋亡。结果:以未转染组A2780细胞EZH2的表达水平为100%,EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞EZH2的mRNA及蛋白水平分别下降90.20±1.66%和76.54±8.92%,与未转染组比较差异均有高度统计学意义(P<0.01)。EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞对顺铂的IC50与未转染组A2780细胞IC50值和空质粒转染组A2780-shVector细胞IC50值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EZH2-shEZH2转染组的细胞凋亡率与空质粒转染组凋亡率及未转染细胞凋亡率相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EZH2基因与卵巢癌原发性顺铂耐药无关。
黄在菊胡沙蔡晶于利利李智敏王泽华
关键词：顺铂敏感性RNA干扰
微小RNA27a在卵巢上皮性癌紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系被引量：12
2010年
目的研究微小RNA27a（miR-27a）在卵巢上皮性癌（卵巢癌）紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系。方法采用实时PCR技术检测卵巢癌A2780细胞及其紫杉醇耐药细胞A2780／Taxol中miR-27a的表达水平。利用脂质体lipofectamine2000将成熟miR-27a的模拟物、阻遏物及阴性对照（NC）转染A2780和A2780／Taxol细胞，实时PCR技术检测转染细胞中MDR1基因mRNA的表达；蛋白印迹法检测转染细胞中P一糖蛋白（P—gp）和同源结构域相关的蛋白激酶2（HIPK2）蛋白的表达；采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪分别检测紫杉醇作用于转染后细胞的增殖情况及细胞凋亡率。结果（1）miR-27a在A2780／Taxol细胞中高表达，与A2780细胞相比表达水平增高2．2倍，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）转染miR-27a阻遏物后，A2780／Taxol细胞中MDRlmRNA的表达水平为0．61±0．14，与转染NC细胞（表达水平为1．00）比较下降39％，差异有统计学意义（P〈0．05）；P．gP蛋白的表达水平为（26±5）％，HIPK2蛋白的表达水平为（30±6）％，分别与转染NC细胞的P-gp蛋白[（43±7）％]和HIPK2蛋白[（19±4）％]的表达水平比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；A2780／Taxol细胞对紫杉醇的敏感性增加，半数抑制浓度（IC50）为0．5μmo]／L，与转染Nc细胞（Ic。为6．8Iμmol／L）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；细胞凋亡率明显升高，达（32．5±3．6）％，与转染NC细胞的凋亡率（5．6±2．1）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）转染miR-27a模拟物后，A2780细胞中MDR1 mRNA的表达水平为2．21±0．11，与转染NC细胞（表达水平为1．00）比较升高121％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-27a在卵巢癌紫杉醇耐药细胞中高表达，其可能通过调控靶基因HIPK2，间接调节MDR1及P—gP的表达和功能而参与耐药。
李智敏胡沙肖兰王静蔡晶于利利王泽华
关键词：卵巢肿瘤紫杉酚微RNAS肿瘤
抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性影响的研究被引量：1
2010年
目的:研究抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性的影响。方法:用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;Stem-loop real-time PCR技术检测A2780/Taxol及亲本细胞A2780中hsa-miR-27a表达水平;利用脂质体Lipofectamine2000将化学合成的miR-27a抑制物及阴性对照(Negative Control,NC)转染A2780/Taxol细胞;分别用Real-time PCR和蛋白印迹法技术检测MDR1mRNA和P-glyco-protein(P-gp)蛋白表达;MTT检测A2780/Taxol对紫杉醇敏感性的变化;流式细胞术检测细胞内P-gp荧光底物罗丹明123(Rh-123)的荧光强度。结果:(1)成功建立了卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;(2)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比,表达增高2.2倍。(3)P-gp蛋白在A2780/Taxol细胞中高表达,在A2780细胞中未检测出其表达;(4)转染miR-27a抑制物后,A2780/Taxol细胞的MDR1mRNA和P-gp表达下降,与转染NC组相比,P-gp表达降低36%;对紫杉醇的敏感性增加,IC50为0.53μmol/L,与转染NC组IC506.8μmol/L相比,有明显差异;(5)流式细胞仪结果显示,细胞内Rh-123荧光强度在转染抑制物的A2780/Taxol细胞为5.10±0.35,与A2780/Taxol细胞的2.95±0.39和转染NC的A2780/Taxol细胞的3.30±0.45相比,差异均有统计学意义。结论:hsa-miR-27a在卵巢癌耐紫杉醇A2780/Taxol细胞中高表达,可能通过间接调节P-gp的表达和功能,参与耐药。抑制miR-27a表达后,可以增加A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性,部分逆转耐药。
李智敏王静胡沙吴莉英蔡晶于利利王泽华
关键词：细胞株P-糖蛋白药物耐受多药耐药相关蛋白紫杉醇
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