浙江省自然科学基金(X20506)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：谢鑫友张钧何晓红周艳文李贵玲更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 突变型p53的pSUPER-EGFP1 RNAi系统的构建被引量：1
- 2007年
- 目的构建抑制突变型p53基因siRNA表达载体。方法化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向突变型p53基因的寡核苷酸(各58个碱基),退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切后的pSUPER-EGFP1(pSG)载体的polⅢH1启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立非特异对照。构建好的干扰载体瞬时转染胃癌细胞SGC-7901,用RT-PCR检测其对突变型p53基因的抑制效果。结果重组构建的pSUPER-EGFP1-p53(pSG-p53i)载体经双酶切电泳分析及插入基因序列分析,58个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。RT-PCR显示pSG-p53i对突变型p53基因的表达具有较好的瞬时抑制作用。结论载体的成功构建,有助于深入研究其对突变型p53基因的稳定抑制作用。体内合成siRNA的方法,可将RNAi技术用于细胞培养和哺乳动物研究。
- 王丽张钧谢鑫友
- 关键词：RNA干扰SIRNAP53
- RNA干扰突变型p53基因对胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:利用RNA干扰(RNAi)技术稳定沉默人胃癌SGC7901细胞中的突变型p53基因,观察其对细胞生物学行为的影响。方法:p53小干扰RNA(siRNA)重组质粒用脂质体介导法转染SGC7901细胞,另设未转染组和对照组。RT-PCR和Western blot分别检测p53基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖情况及其对奥沙利铂药物敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡,平板克隆形成试验、裸鼠移植瘤成瘤实验分析细胞成瘤性变化。结果:p53 siRNA可显著下调SGC7901细胞中突变型p53基因mRNA和蛋白的表达,实验组较未转染组和对照组细胞生长曲线左移。实验组的G0/G1期细胞数较对照组和未转染组分别减少7.4%和6.7%,进入S期的细胞数增加17.2%,奥沙利铂诱导的细胞凋亡率明显降低,未转染组、对照组和实验组细胞的IC50分别为15.88μmol/L、14.32μmol/L和20.34μmol/L。与未转染组和对照组相比,实验组细胞平板克隆形成数量显著增多,裸鼠体内细胞成瘤性增加。结论:p53 siRNA可有效抑制突变型p53基因在胃癌SGC7901细胞中的表达,但利用RNA干扰技术靶向突变型p53基因在胃癌的治疗上尚存在不确定性。
- 李贵玲张钧周艳文王燕忠何晓红谢鑫友
- 关键词：转染RNA干扰基因疗法
