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cDNA-AFLP技术及在差异表达基因克隆上的应用被引量：21: 2007年; cDNA-AFLP技术是在AFLP技术基础上发展起来的主要用于研究基因差异的技术,具有高效可靠的优点,受到研究者的青睐,被广泛应用于包括植物在内的各类生物的基因表达的研究中。简要阐述了cDNA-AFLP技术的原理,重点讨论了操作过程中可能出现的问题和技术关键,并就该技术与其他差异表达技术进行了比较,以说明其在克隆差异表达基因上的优势,还简要列举了一些在抗病育种等领域的应用实例。; 于虹丁国华; 关键词：CDNA-AFLP

黄瓜抗炭疽病相关基因AFLP标记的SCAR转换被引量：10: 2008年; 将黄瓜抗炭疽病相关基因的一个共显性AFLP标记成功地转换成了简单实用的SCAR标记。对AFLP标记片段进行序列测定,根据序列特点设计了特异的SCAR引物,引物长18～21 bp。PCR结果表明,引物对(1)可以扩增出131 bp和125 bp两条带,引物对(2)可以扩增出178 bp和172 bp两条带,分别为抗炭疽病的特征带和感炭疽病的特征带。将该两个标记命名为SCEM131/125和SCEM178/172,两对引物在F_2单株和抗感病材料验证中符合率高达97.27%,可以用于黄瓜炭疽病的分子鉴定。; 李淑菊王惠哲霍振荣管炜; 关键词：黄瓜 AFLP标记 SCAR标记

黄瓜霜霉病抗病基因的RAPD及SCAR标记被引量：33: 2007年; 以感霜霉病黄瓜L18-10-2和抗霜霉病黄瓜129为亲本构建F2代分离群体,以F3代植株霜霉病抗性鉴定表示F2代各单株抗病性并得以区分各单株杂合或纯合感病性,采用RAPD技术和转SCAR的方法筛选黄瓜抗霜霉病基因分子标记.结果显示,在318条RAPD引物中有18条引物表现出两亲本间多态性,其中引物P18的SB-SP18561扩增片段与霜霉病抗病基因之间紧密连锁,根据交换率和Kosambi函数公式计算其遗传距离为7.85 cM.回收SBSP18561片段并克隆和测序,其准确长度为561 bp.将该RAPD标记转换为SCAR标记,长度为494 bp,命名为SSBSP18494.; 丁国华秦智伟周秀艳范金霞; 关键词：黄瓜 RAPD标记 SCAR标记

低温胁迫下三种冷季型草坪草的抗寒性变化被引量：11: 2007年; 本试验采用短期(24h内)低温(5℃)胁迫处理紫羊茅、优异和抢手股等三种冷季型草坪草,以电导法测定叶片膜透性、茚三酮比色法测定叶片脯氨酸含量、蒽酮比色法测定可溶性总糖含量,分析三项指标的变化规律,并以此来判断三种草坪草抗冷的能力。结果表明,在5℃低温胁迫下,草坪草叶片内脯氨酸含量增加,增加量为紫羊茅>优异>抢手股,可溶性糖的含量增加,增加量为抢手股>优异>紫羊茅,膜透性的增加表现为紫羊茅>优异>抢手股,综合评价三种草坪草的抗冷性能为抢手股>优异>紫羊茅。膜透性、脯氨酸和可溶性糖含量在24h的增加过程上还表现出以下特点,即低温处理1h内增加较小,1-3h明显增加,3-9h增加平缓、甚至有所降低,9-24h又出现显著的增加。; 池春玉连永权李文君丁国华; 关键词：草坪草脯氨酸含量可溶性糖含量膜透性抗冷性

黄瓜抗病基因类似序列(RGA)的同源性分析和Southern鉴定被引量：16: 2007年; 使用ClustalW和DNAMAN3.0分析了本实验室克隆的15个黄瓜抗病基因类似序列(RGA)之间以及与烟草的N基因、亚麻的L6基因和拟南芥的RPS2基因之间的同源性,并对这些RGA进行了PCR和Southern验证与分析。结果表明:15个黄瓜RGA中,核苷酸序列同源性最高的是CsRGA2、CsR-GA4和CsRGA5,其次是CsRGA6、CsRGA7、CsRGA8和CsRGA9,CsRGA1和CsRGA3也存在较高的同源性;其余的RGA同源性较低。在氨基酸序列上也表现了相同的特征。与N、L6和RPS2等抗病基因的产物之间同源性最高46%,最低22%。根据核苷酸序列设计了15对特异引物,用PCR方法验证了所有黄瓜RGA的存在,其中CsRGA3在黄瓜品种间表现出多态性。利用特异引物PCR方法合成了15个黄瓜RGA的地高辛探针,与EcoRⅤ酶解的黄瓜‘215’、‘129’和‘L18’的基因组DNA进行Southern杂交,证实了各个RGA在基因组上的存在,同时发现,CsRGA9、CsRGA11～CsRGA15都是多拷贝,CsRGA3是单拷贝,其余为双拷贝。; 丁国华池春玉周秀艳秦智伟; 关键词：黄瓜同源性

黄瓜抗霜霉病相关基因cDNA片段的克隆与分析被引量：9: 2008年; 以抗霜霉病黄瓜‘东农129’为试材,利用基因差异显示技术(DDRT-PCR)研究了黄瓜接种霜霉病菌前后基因表达的差异。共分离出4个接菌后在叶片中特异表达的cDNA片段,分别命名为49-2、50-5、50-7和52-14。同源性比对发现,50-7号片段与黄瓜脂氧合酶基因部分同源,其余为未知新基因序列。表达分析显示,所筛选的4个差异表达基因片段与黄瓜感染霜霉病菌有密切关系。49-2号片段在所检测的整个感染过程都有很强的表达;50-5号片段与病菌侵染也有较密切的关系,但相对49-2表达延迟;50-7和52-14仅在接种24h有一定表达,显示出与病菌诱导之间的特殊关系。; 李金鑫秦智伟丁国华周秀艳; 关键词：黄瓜霜霉病抗病相关基因 MRNA差异显示

低温胁迫对三种冷季型草坪草脯氨酸含量及膜透性的影响被引量：44: 2007年; 采用5℃、-5℃和-10℃的低温胁迫处理紫羊茅、优异和抢手股等三种冷季型草坪草,以电导法测定叶片膜透性、茚三酮比色法测定叶片脯氨酸含量,分析二者在低温胁迫下的变化规律。结果表明,三种低温胁迫使三种草坪草叶片内脯氨酸含量均有极显著的增加,5℃和-10℃胁迫下,增加量为抢手股最高,紫羊茅和优异接近,-5℃胁迫下增加量为抢手股>优异>紫羊茅,且相互间没有显著差异,-10℃的胁迫没有高于而是显著低于-5℃的胁迫,并与5℃相近。低温胁迫下膜透性的增加表现为紫羊茅<抢手股<优异,而且胁迫的温度越低,膜透性越高,但5℃的低温对紫羊茅没有造成显著的膜透性增加。; 池春玉丁国华连永权李文君; 关键词：草坪草脯氨酸含量膜透性抗冷性

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黑龙江省自然科学基金(C200526)