国家自然科学基金(81072686)
- 作品数：10 被引量：87H指数：5
- 相关作者：李俊黄成张磊李政通马陶陶更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽医科大学第二附属医院更多>>
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- TRAIL通过内质网应激对肝星状细胞凋亡的调控及部分机制的研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与内质网应激(ERS)相关蛋白对大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)凋亡的影响及内在联系。方法体外血小板源性生长因子(PDGF)诱导活化的肝星状细胞(HSC),再分别加入TRAIL与ERS诱导剂衣霉素(TN)处理后,Hoechst33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡变化;RT-PCR法检测mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达变化。结果与PDGF诱导活化的HSC组作为对照组比较,荧光显微镜观察到TRAIL与TN分别处理的HSC,Hoechst 33258染色细胞呈核固缩等凋亡形态变化,同流式细胞仪检测结果;与对照组相比,RT-PCR和Western blot结果显示,TRAIL组与TN组细胞凋亡基因Bax mRNA、凋亡蛋白C-Caspase-3的表达明显上调,而且ERS蛋白C-Caspase-12、CHOP、GRP78的表达均明显上调。结论 TRAIL能通过明显上调凋亡基因Bax mRNA、凋亡蛋白C-Caspase-3的表达,诱导PDGF活化的HSC凋亡,其机制可能与诱导ERS相关蛋白CHOP、GRP78、Caspase-12的表达有关。
- 李晓慧李俊黄艳黄成王雅蕊王欢孙仕伟黄蒙蒙
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体肝星状细胞内质网应激凋亡CASPASE-12
- CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型肝纤维化逆转与MAPK信号通路的研究被引量：28
- 2011年
- 目的通过检测CCl4诱导肝纤维化大鼠逆转恢复各时期MAPK信号通路蛋白动态变化,研究其在肝纤维化恢复期可能的调控作用。方法采用CCl4皮下注射SD大鼠12周,复制肝纤维化模型,分别于注射12周,停药后2、4、6、8周取材。通过检测各组ALT、AST、Hyp、LN、PⅢNP的含量变化和肝脏病理组织切片Masson染色,加以验证。采用West-ern blot法检测各组肝组织中MAPK通路蛋白表达。结果 ALT、AST、Hyp、LN、PⅢNP等反映肝损伤和纤维化进程的指标在第12周最高,即模型组最高,并且随着肝纤维化逆转而含量逐渐降低,Masson染色结果与之一致,表明大鼠肝纤维化模型期与各恢复期模型建立完成。p-ERK1/2在模型组表达明显降低,与正常组相比差异有显著性(P<0.01),恢复4周表达明显升高,与模型组相比差异有显著性(P<0.01),以后逐渐降低。p-JNK1/2在模型组表达明显降低(P<0.01),恢复期逐渐升高(P<0.05)。p-p38在模型组表达明显升高(P<0.01),恢复期逐渐降低(P<0.05)。p-ERK/ERK与Hyp相关系数r=-0.46,P=0.003;p-JNK/JNK与Hyp相关系数r=-0.53,P=0.0004;p-p38/p38与Hyp相关系数r=0.81,P=0.0001。结论 MAPK信号通路中的ERK、JNK和p38信号通路在肝纤维化逆转中发挥重要作用。
- 李政通李俊黄成李浩章圣鹏黄艳陶辉
- 关键词：肝纤维化有丝分裂原活化蛋白激酶C-JUN氨基末端激酶P38丝裂原活化蛋白激酶
- 夏枯草总三萜对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响被引量：18
- 2013年
- 目的探讨夏枯草总三萜(TTP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的调节及对Jak/Stat通路的影响。方法培养RAW264.7细胞系,体外用LPS(2μg/ml)刺激,ELISA法检测不同质量浓度的TTP(12.5、25、50、100、200μg/ml)分别作用24、48、72 h后对细胞分泌前列腺素E2(PGE2)的影响,选取质量浓度为25、50、100μg/ml的TTP,进一步用RT-PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、Jak2和Stat3 mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清中TNF-α、IL-6蛋白的表达。结果 TTP可以抑制细胞分泌PGE2,并且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.01),TTP可以抑制LPS刺激的RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6(P<0.01),并且明显抑制Jak2、Stat3的基因表达(P<0.01)。结论 TTP可以抑制RAW264.7细胞分泌炎症因子,调节细胞炎症因子网络的平衡,具有一定的抗炎作用,且这一作用的产生可能与Jak/Stat通路有关。
- 解丹黄成林珍周德喜孔令娜杨莹莹李俊
- 关键词：夏枯草抗炎免疫
- 栀子苷衍生物五乙酰栀子酸对人肝细胞损伤的保护作用被引量：7
- 2014年
- 目的探讨栀子苷衍生物五乙酰栀子酸对L-O2型肝细胞化学损伤的保护作用及其机制。方法培养L-O2型肝细胞,采用CCl4和H2O2体外诱导L-O2,检测培养上清液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平,检测上清液中丙二醛(MDA)的含量、过氧化物歧化酶(SOD)的活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果五乙酰栀子酸(10、50、100μg/ml)不仅可明显降低由CCl4所致肝细胞培养上清液中AST、ALT、LDH水平及MDA含量的升高,显著提高SOD的活力及GSH-Px的活性;而且还可使H2O2所致肝细胞培养上清液中升高的AST、ALT、LDH及MDA的含量明显降低,提高SOD的活力及GSH-Px的活性。结论栀子苷衍生物五乙酰栀子酸体外肝细胞损伤有显著的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用有关。
- 程畅黄成王雅蕊张磊汤文建李俊
- 关键词：栀子苷保肝抗氧化作用
- RNAi介导MeCP2基因沉默对HSC-T6细胞活化增殖的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨RNA干扰介导甲基CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖的影响。方法根据MeCP2的碱基序列设计并合成小干扰RNA(small interfering RNA,siR-NA),通过脂质体LipofectamineTM2000转染到HSC-T6细胞内,荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞增殖变化;Quantitative Real-Time PCR检测α-SMA、MeCP2 mRNA的表达;流式细胞术检测HSC-T6细胞周期的变化;Western blot检测α-SMA、MeCP2蛋白的表达。结果将MeCP2-siRNA转染进HSC-T6细胞内,MeCP2基因及蛋白水平明显降低;同时α-SMAmRNA及α-SMA蛋白的表达水平亦明显降低;靶向封闭MeCP2基因的表达可明显抑制HSC-T6细胞的活化增殖。结论靶向封闭MeCP2的表达可明显抑制HSC-T6细胞活化增殖,MeCP2可能是潜在的肝纤维化治疗靶点。
- 陶辉黄成杨晶晶马陶陶张磊卞尔保李政通章慧吕雄文李俊
- 关键词：肝星状细胞Α平滑肌肌动蛋白
- 脂质体转染TRPM7 siRNA对肝星状细胞增殖的影响被引量：5
- 2011年
- 目的通过利用小干扰RNA(siRNA)下调瞬时受体电位通道7(TRPM7)基因的表达,研究TRPM7对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)活化、增殖的影响。方法人工合成抑制TRPM7基因的siRNA片段,通过脂质体LipofectamineTM 2000转染到HSC-T6内,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及TRPM7的mRNA表达。结果转染siRNA后的HSC-T6增殖受到显著抑制,Ⅰ型胶原、α-SMA及TRPM7 mRNA表达显著下降。结论应用RNA干扰靶向抑制TRPM7基因可显著抑制HSC-T6的活化及增殖,下调TRPM7基因的表达可能是潜在的肝纤维化治疗方法。
- 贾丽莎黄成张磊吕雄文谢丹李俊
- 关键词：SIRNA肝纤维化
- 豹皮樟总黄酮调控瘦素、TGF-β1对肝纤维化大鼠的预防作用研究被引量：9
- 2012年
- 目的研究豹皮樟总黄酮(TFLC)调控瘦素(leptin)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对肝纤维化大鼠的预防作用。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,TFLC灌胃给药第12周末,检测ALT、AST及HA、LN、PⅢNP、CⅣ含量;检测Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、瘦素、TGF-β1的含量;检测Hyp及组织病理变化;检测瘦素受体(OB-Rb)、TGFβ1Ⅰ型受体(TGFβR1)、Smad3 mRNA及蛋白表达。结果 TFLC(200、400 g.L-1)能明显降低肝纤维化大鼠肝纤维化指标及血清Ⅰ型胶原、瘦素、TGF-β1水平;降低Ob-Rb、TGFβR1、Smad3的mRNA及蛋白表达。结论 TFLC能有效预防CCl4诱导的大鼠肝纤维化,可能与下调肝内瘦素及其受体,抑制TGF-β1/Smad通路有关。
- 黄成马陶陶李浩李政通章胜朋邓子煜李俊
- 关键词：肝纤维化豹皮樟总黄酮瘦素瘦素受体转化生长因子-Β1
- pEGFP-C2-TRPM7重组质粒的构建及表达被引量：3
- 2013年
- 从肝星状细胞(HSC-T6)中获得瞬时受体电位通道7(TRPM7)蛋白的cDNA,采用EcoR I和BamH I双酶切,用T4连接酶将该cDNA连接pEGFP-C2质粒将构建成功的pEGFP-C2-TRPM7质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,PCR鉴定基因表达。结果显示进行双酶切鉴定该质粒可见TRPM7片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果也可检测到TRPM7基因表达。表明成功构建重组pEGFP-C2-TRPM7表达裁体,TR-PM7蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。
- 徐涛黄成李琳张磊吕雄文李俊
- 关键词：COS-7基因表达
- 蜂毒素对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及其机制探讨被引量：3
- 2013年
- 目的研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1mRNA的表达变化;Western blot法检测Cyclin D1、CDK4、p21及E2F-1蛋白表达。结果与对照组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降;同时Western blot结果提示蜂毒素(1,2,4 mg.L-1)可以明显降低Cyclin D1、CDK4及E2F-1表达,而上调p21表达。结论蜂毒素能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与干扰该细胞G0/G1期相关基因的转录相关且抑制Cyclin D1/E2F信号转导。
- 于明哲李俊黄成徐涛吴小琴李小枫
- 关键词：蜂毒素人胚肺成纤维细胞CYCLINE2F
- 抑制p70S6K对HSC-T6增殖活化的作用研究被引量：8
- 2014年
- 目的研究抑制核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)的表达对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)增殖活化的影响。方法建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,观察磷酸化p70S6K在纤维化肝组织中的表达变化;利用雷帕霉素抑制p70S6K蛋白表达,及靶向p70S6K基因的siRNA预处理HSC-T6,再添加重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGFBB)诱导,观察HSC-T6的增殖活化情况;利用Western blot、RT-PCR检测p70S6K、P-p70S6K、α-SMA、Collagen I的蛋白和基因表达水平。结果 CCl4诱导大鼠肝纤维化模型组磷酸化p70S6K蛋白明显升高;雷帕霉素预处理HSC-T6,明显降低了p70S6K的磷酸化水平,并抑制了PDGF-BB诱导的细胞增殖及α-SMA、Collagen I的表达;siRNA转染HSC-T6,在基因和蛋白水平抑制了p70S6K的表达,同时减少了PDGF-BB诱导的α-SMA、Collagen I、P-p70S6K的表达。结论用siRNA和雷帕霉素阻断p70S6K的表达,在一定程度上可以抑制HSC-T6的增殖和活化,为肝纤维化的防治研究提供新的思路和靶点。
- 占书箱黄成马陶陶陈培杰李俊
- 关键词：P70S6KSIRNA雷帕霉素肝纤维化
