陕西省科学技术研究发展计划项目(2009K01-70)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：王伟王炜孙学军田勇郑见宝更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 缺氧微环境对TSST-1诱导的抗CEA^+结肠癌LoVo细胞免疫治疗的调控被引量：3
- 2011年
- 目的:研究缺氧微环境对靶向性表达的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(toxic shock syndrome toxin-1,TSST-1)激活人外周血淋巴细胞(peripheral bloodlymphocyte,PBL)对CEA^+结肠癌LoVo细胞杀伤作用的调控。方法:包装、收集前期构建的缺氧反应元件(hypoxia-response elements,HRE)和癌胚抗原启动子CEAp联合调控的逆转录病毒载体pLEGFP-N1-5HRE-CEAp-TSST-1-1inker-CD80TM(简称pLEGFP-N1-5HCTC),感染CEA^+LoVo细胞及CEA^-宫颈癌HeLa细胞,获取稳定表达跨膜型超抗原TSST-1-linker-CD80TM蛋白(TC融合蛋白)的肿瘤细胞。用缺氧模拟试剂CoC1_2模拟缺氧微环境,RT-PCR和WesterRblotting分别检测缺氧调控下TSST-1的表达水平。将健康人PBL与pLEGFP-N1-SHCTC感染后的肿瘤细胞共培养,~3H-TdR掺入法检测缺氧调控下PBL的增殖能力,MTT法检测缺氧调控下PBL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:pLEGFP-N1-5HCTC病毒成功感染CEA^+LoVo细胞(5HCTC/LoVo),RT-PCR和Western blotting证实,缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞中TSST-1mRNA和蛋白的表达,CEA^-HeLa细胞在常氧和缺氧条件下均无TSST-1的表达。缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞诱导的人PBL的增殖(7.3×10~3 vs 3.1×10~3cpm,P<0.05),缺氧环境下PBL对5HCTC/LoVo细胞的杀伤率明显高于常氧环境(82.69%vs53.50%,P<0.01);CEA^-HeLa细胞不能刺激PBL增殖,PBL对其也无抑制作用。结论:缺氧微环境可显著上调靶向性表达的超抗原TSST-1诱导的对CEA^+LoVo细胞的杀伤作用。
- 王炜孙学军王伟田勇郑见宝成亮张超
- 关键词：缺氧微环境LOVO细胞
- 双靶向诱导超抗原TSST-1基因重组逆转录病毒的包装及鉴定
- 2011年
- 目的包装出携5拷贝缺氧反应元件(5 HRE)增强子和癌胚抗原启动子(CEAp)联合调控的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)基因的逆转录病毒,并建立稳定表达TSST-1的人结肠癌Lovo细胞株。方法应用已构建好的逆转录病毒载体pLEGFP-N1-5 HRE-CEAp-TSST-1-linker-CD80TM,与辅助质粒pMB-MLV、pMB-G共转染入293T细胞,LaSRT法检测病毒滴度。包装出的逆转录病毒感染CEA阳性的人结肠癌细胞株Lovo和CEA阴性的人宫颈癌细胞株Hela。应用RT-PCR和免疫组化方法鉴定TSST-1的表达。结果获得重组逆转录病毒滴度约为1×106CFU/mL。RT-PCR及免疫组化证实经病毒感染的Lovo细胞在mRNA和蛋白水平均有TSST-1表达,缺氧环境中的mRNA表达量更高,且细胞传代20次后依然有TSST-1 mRNA表达;经病毒感染的Hela细胞在常氧或缺氧状态下均无TSST-1 mRNA及蛋白表达。结论包装出较高滴度重组逆转录病毒,并能靶向性在CEA阳性肿瘤内稳定表达TSST-1,为后续检验TSST-1对肿瘤的杀伤效应奠定了基础。
- 王伟孙学军王炜郑见宝禄韶英任海亮成亮
- 关键词：逆转录病毒超抗原缺氧诱导CEA阳性肿瘤免疫基因治疗
- 5HRE和CEAp联合调控的TSST-1激活淋巴细胞特异杀伤CEA阳性肿瘤细胞被引量：3
- 2010年
- 目的:研究5拷贝缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(CEAp)联合调控的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)在缺氧环境下激活淋巴细胞对CEA阳性的结肠癌细胞株LoVo的杀伤作用。方法:用5HRE和CEAp构成基因表达调控元件,构建出以该元件调控跨膜型超抗原TSST-1-linker-CD80TM(TC)基因靶向表达的真核表达载体。用该载体转染CEA阳性的人结肠癌细胞株LoVo及CEA阴性的人宫颈癌细胞株HeLa,利用G418筛选稳定转染的细胞。用RT-PCR检测TC融合基因的表达。分离健康人外周血淋巴细胞(PBL),用稳定转染TC的细胞裂解物进行PBL刺激实验;将PBL与稳定转染的细胞共培养,行淋巴细胞杀伤实验;MTT法检测TSST-1促PBL增殖和PBL对稳定转染细胞的杀伤效应。结果:成功筛选出稳定转染目的基因的单克隆LoVo细胞和HeLa细胞。RT-PCR证实单克隆LoVo细胞中TC在mRNA水平的表达,且缺氧环境中的表达量更高;单克隆HeLa细胞在常氧和缺氧条件下均无TC的表达。MTT法检测发现,缺氧环境下单克隆LoVo细胞表达的TSST-1能有效激活人PBL增殖,PBL剂量依赖性的抑制表达TSST-1的LoVo细胞的生长(P<0.05);但HeLa细胞和野生型LoVo细胞不能刺激PBL增殖,PBL对其也无抑制作用。结论:5HRE和CEAp双重调控的超抗原TSST-1在体外缺氧环境下可激活人PBL特异杀伤CEA阳性肿瘤细胞。
- 田勇孙学军王炜王伟
- 关键词：缺氧反应元件癌胚抗原超抗原CEA阳性肿瘤免疫基因治疗
