天津市卫生局科技基金(2013KY17)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 异硫氰酸苄酯对脑胶质瘤 U-87 MG细胞活性氧的诱导作用及其机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨异硫氰酸苄酯(benzyl isothiocyanate,BITC)对人脑胶质瘤细胞系U-87 MG的活性氧(ROS)的诱导作用及其机制。方法应用MTS法检测BITC对肿瘤细胞生长的影响,2和5μmol·L-1 BITC作用U-87 MG细胞后,应用流式细胞术检测肿瘤细胞内活性氧(ROS)含量的变化,生化法检测GSH以及氧化应激相关的线粒体呼吸链复合体Ⅲ、过氧化物歧化酶(SOD)和醌还原酶(quinone reductase,QR)的活性变化,Western blotting法和报告基因技术检测p38-MAPK和相关转录因子ARE的转录活性变化。结果 BITC对脑胶质瘤细胞U-87 MG具有明显的抑制作用,其IC50值为15.2μmol·L-1,2和5μmol·L-1 BITC作用肿瘤细胞24 h后,ROS产生分别为对照组的376.3%和607.5%(P<0.05),GSH水平分别为对照组的71.3%和44.9%(P<0.05),SOD活性分别为对照组的63.5%和21.8%(P<0.05),QR活性分别为对照组的55.2%和26.7%(P<0.05),呼吸链复合体III活性分别为对照组的48.5%和37.6%(P<0.05),p38-MAPK的磷酸化水平显著上升,ARE的转录活性分别为对照组的141.1%和215.2%(P<0.05)。结论 BITC可诱导脑肿瘤细胞U-87 MG中ROS产生,可能与调节胞内的氧化应激相关基因表达有关。
- 李文明吴琦朱彧
- 关键词：脑胶质瘤
- ENO1沉默对人胶质瘤U87细胞黏附和侵袭的影响及其机制探讨被引量：1
- 2014年
- 目的探讨沉默烯醇化酶(ENO1)对人胶质瘤U87细胞黏附和侵袭的影响及其机制。方法构建ENO1基因沉默人胶质瘤U87细胞系,将细胞分为对照组、空载组、沉默组1和沉默组2(沉默组2的ENO1表达量低于沉默组1)。采用MTS方法观察ENO1基因沉默后对人胶质瘤U87细胞体外黏附能力的影响,采用Transwell方法观察细胞侵袭能力,采用流式细胞技术观察细胞周期,采用Western blot和Real-time PCR法检测CD44、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、CDK1、p27、p53和p-AKT,通过液相芯片技术检测TGF-β、IL-1和IL-6,通过报告基因技术考察NF-κB和Twist转录活性。结果与对照组比较,沉默组1和沉默组2的细胞黏附和侵袭能力均降低(P均<0.05),细胞周期阻滞在G0/G1期,CD44、MMP-2/9、CDK1、p-AKT蛋白和mRNA表达水平均下降(P均<0.05),p27、p53蛋白和mRNA表达水平均增加(P均<0.05),TGF-β、IL-1β、IL-6降低(P均<0.05),NF-κB和Twist转录活性降低(P均<0.05)。结论沉默人胶质瘤U87细胞中ENO1表达可显著抑制肿瘤细胞的体外侵袭和黏附能力,其抑制作用可能与调节细胞周期和侵袭相关基因表达有关。
- 高燕杨裕琰王静
- 关键词：胶质瘤烯醇化酶
- 异硫氰酸苄酯抑制人胶质瘤U87MG细胞体外侵袭和诱导凋亡的作用和机制被引量：2
- 2015年
- 目的研究异硫氰酸苄酯对人胶质瘤U87MG细胞体外侵袭和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTS实验考察异硫氰酸苄酯对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;2,5μmol·L-1异硫氰酸苄酯作用24 h后,采用Transwell实验、黏附实验和划痕实验观察异硫氰酸苄酯对人胶质瘤细胞侵袭、黏附和迁移能力的影响;应用Real-time-PCR和Western blot法检测相应浓度异硫氰酸酯处理后人胶质瘤U87MG细胞中MMP-2、MMP-9、CD44、Survivin、Bcl-2、Net1、Roh A、caspase-3、caspase-8和p-AKT的表达变化;应用报告基因技术检测NF-κB转录活性的变化;采用ELISA法测定胞内8-OH-d G含量;10,20μmol·L-1异硫氰酸酯作用24 h后,采用流式细胞术观察其对细胞凋亡的作用。结果异硫氰酸苄酯可显著抑制人胶质瘤U87MG细胞体外增殖;与0μmol·L-1组相比,2,5μmol·L-1异硫氰酸苄酯对人胶质瘤细胞U87MG侵袭、黏附和迁移能力有明显的抑制作用;不同浓度异硫氰酸苄酯处理后,肿瘤细胞MMP-2、MMP-9、CD44、Survivin、Bcl-2、NET1和Rho A的m RNA和蛋白表达、AKT磷酸化水平和NF-κB转录活性明显下调,caspase-3和caspase-8表达以及8-OH-d G含量显著上调;10,20μmol·L-1异硫氰酸苄酯可显著诱导细胞凋亡。结论异硫氰酸苄酯抑制人胶质瘤细胞U87MG的侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制AKT/NF-κB信号转导途径,进而调节侵袭和凋亡相关基因表达有关。
- 霍焱魏会宇马永建朱彧
- 关键词：脑胶质瘤
- 异硫氰酸苄酯对脑胶质瘤U-87 MG细胞周期的影响及其机制被引量：1
- 2014年
- 目的观察异硫氰酸苄酯(BITC)对人脑胶质瘤细胞系U-87 MG细胞周期的阻滞作用,并探讨其机制。方法取对数期U-87 MG细胞分别以2、5μmol/L的BITC处理,应用流式细胞仪检测细胞周期分布,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白Cyclin B1、Cdc2、p21、Cdc25C及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达,RT-PCR法检测Cyclin B1、Cdc2、p21和Cdc25C的mRNA表达,报告基因技术检测NF-κB、缺氧诱导因子(HIF)和真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)的转录活性。结果 BITC作用24 h后,U-87 MG细胞周期G2/M期比例显著升高,Cyclin B1、Cdc2、Cdc25C、p-Akt蛋白表达下调,p21蛋白表达上升,Cyclin B1、Cdc2、Cdc25C、p21 mRNA表达均显著下降,NF-κB、HIF、eIF4E转录活性均显著下降(P均<0.05)。结论 BITC对U-87 MG细胞周期有阻滞作用,机制可能与抑制Akt/NF-κB信号转导路径,进而调节细胞周期相关基因表达有关;此为胶质瘤的细胞周期靶点治疗提供了新思路。
- 李文明吴琦朱彧
- 关键词：脑胶质瘤细胞周期
- 异硫氰酸苄酯诱导脑胶质瘤U-87 MG细胞凋亡及其机制的研究被引量：4
- 2014年
- 目的探讨异硫氰酸苄酯(benzyl Isothiocyanate,BITC)对人脑胶质瘤细胞系U-87 MG凋亡的诱导作用及其机制。方法 BITC作用U-87 MG细胞后,应用MTS法检测BITC对肿瘤细胞生长的影响,应用流式细胞术检测BITC对肿瘤细胞凋亡的作用和肿瘤细胞内活性氧(ROS)含量的变化,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Survivin、caspase-3和caspase-8的变化,RT-PCR检测Bcl-2和Survivin基因的mRNA表达,最后检测信号转导分子JNK和转录因子AP-1转录活性的变化。结果 BITC对脑胶质瘤细胞U-87 MG具有明显的抑制作用,其IC 150值为15.2μmol·L-,流式细胞术检测显示10和20μmol·L-1的BITC作用24 h后凋亡率分别为29.3%和68.6%(P<0.05),2和5μmol·L-1BITC作用肿瘤细胞24h后,ROS产生分别为对照组的3.76倍和6.07倍(P<0.05),促凋亡蛋白caspase-3和caspase-8表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl-2和Survivin表达下调,Bcl-2 mRNA表达分别是对照组的32.7%和19.2%(P<0.05),Survivin mRNA表达分别是对照组的41.3%和22.7%(P<0.05),JNK磷酸化水平上调,AP-1转录活性分别是对照组的42.5%和26.7%(P<0.05)。结论 BITC可抑制脑肿瘤细胞U-87 MG的生长,可能与细胞氧化损伤和调节细胞内的凋亡相关转录因子和信号通路有关。
- 李文明吴琦朱彧
- 关键词：脑胶质瘤凋亡抗肿瘤药
