国家自然科学基金(30801166)
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
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- 羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶-1,3的表达被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨羧甲基壳聚糖抑制重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)刺激下的兔软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1,3(MMP-1,3)的作用机制。方法:分离、培养兔软骨细胞,用rhIL-1β刺激,同时加入不同浓度的羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)或L-精氨酸甲酯(L-NAME),培养24h后,检测上清液中的一氧化氮含量和软骨细胞内的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活力。提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链方法(RT-PCR)检测iNOS,MMP-1,MMP-3的mRNA表达。通过ELISA方法检测上清液中MMP-1,MMP-3的含量。结果:IL-1β能够增加软骨细胞一氧化氮的释放及iNOS的酶活性,诱导细胞iNOS,MMP-1,3的mRNA表达,增加MMP-1,3的分泌。羧甲基壳聚糖对软骨细胞一氧化氮的释放,iNOS酶活力及iNOSmRNA表达均有抑制作用,不同浓度的抑制效果相近;它对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及MMP-1,3的分泌也有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。L-NAME对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及分泌也有抑制作用,但L-NAME与羧甲基壳聚糖对一氧化氮的影响相似时,羧甲基壳聚糖对MMP-1,3mRNA表达和分泌的抑制作用强于L-NAME。结论:羧甲基壳聚糖抑制软骨细胞合成MMP-1,MMP-3是部分通过降低iNOS表达,减少一氧化氮合成来实现的。
- 陈庆刘世清李亚明杜予民
- 关键词：羧甲基壳聚糖白细胞介素-1软骨细胞
- 小干扰RNA特异性沉默CD44基因对羧甲基壳聚糖保护大鼠软骨细胞凋亡的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默大鼠软骨细胞的CD44基因后对细胞CD44基因表达的抑制作用及对软骨细胞在羧甲基壳聚糖（CMCS）作用下细胞生物学特性变化及其作用机制。方法构建针对CD44基因特异性的siRNA（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3），Lipofectamine“2000转染软骨细胞。通过免疫荧光鉴定cD44基因特异性siRNA（CD44-siRNA）的转染情况，通过反转录-聚合酶链反应（FIT—PCR）及蛋白印迹法检测CD44-siRNA转染细胞中CD44基因及蛋白的表达情况；通过硝普钠诱导软骨细胞凋亡并通过流式细胞技术检测CMCS对硝普钠诱导正常及经CD44-siRNA转染软骨细胞凋亡的影响。采用单因素方差分析及SNK—q检验对结果进行统计学分析。结果免疫荧光检测发现CD44-siRNA成功转染进入软骨细胞，转染率在60％左右。RT—PCR检测结果表明，转染siRNA-1后的24、48及72h，与空白对照组（0．429±0．053，0．501±0．037，0．341±0．009）相比，CD44的mRNA表达明显减弱（分别为0．198±0．007，0．211±0．016，0．153±0．005；q=5．93，7．01，11．23；P〈0．01）。蛋白印迹法检测表明转染siRNA-1后24h，与空白对照组相比，CD44的蛋白表达明显减弱（0．231±0．064与0．675±0．113，q=13．09，P〈0．01）。流式细胞检测结果表明3mmol／L硝普钠可以成功诱导软骨细胞发生早期凋亡[（70±6）％]；50、100、200μg／mlCMCS对硝普钠诱导的凋亡有-定的抑制作用[凋亡率分别为（51±7）％，（30±4）％，（15±4）％；q=5．08，6．97，9．73；P〈0．01]；但CMCS对硝普钠诱导的CD44-siRNA-1转染的软骨细胞的凋亡抑制作用比未转染组明显减弱[凋亡率分别为（34±6）％和（15±4）％，q=6．95，P〈0．01]。结论CD44特异性siRNA-1转染体外培养的大鼠软骨细胞能显著下调CD44基因的表达；CD44基因在CMCS保护硝普钠诱导软骨细胞凋亡中发挥重要的作用。
- 陈庆贺斌刘世清
- 关键词：软骨细胞细胞凋亡CD44小分子干扰羧甲基壳聚糖
- 羧甲基壳聚糖对体外培养髓核细胞增殖及硝普钠诱导凋亡的影响被引量：6
- 2011年
- [目的]研究不同浓度羧甲基壳聚糖对体外培养椎间盘髓核细胞增殖及硝普钠诱导细胞凋亡的保护作用。[方法]体外培养大鼠椎间盘髓核细胞，Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定；分别加入不同浓度羧甲基壳聚糖培养24h，通过CCK-8细胞计数法检测髓核细胞的增殖情况；采用不同浓度硝普钠诱导髓核细胞凋亡，通过流式细胞仪检测早期凋亡细胞比例，并通过Hoechst 33342荧光染色检测髓核细胞凋亡核的形态学变化。[结果]CCK-8检测结果表明10～500μg／ml羧甲基壳聚糖作用髓核细胞24h对髓核细胞增殖无明显作用（P〉0．05）；流式细胞检测结果表明1～3mmoL／L的硝普钠可诱导髓核细胞发生早期凋亡，加入50～200μg／ml羧甲基壳聚糖后硝普钠诱导的髓核细胞凋亡有不同程度的降低（P〈0．05）。Hoechst 33342染色结果表明羧甲基壳聚糖可降低硝普钠诱导髓核细胞凋亡。[结论]一定浓度的羧甲基壳聚糖对髓核细胞增殖无明显影响，羧甲基壳聚糖对硝普钠诱导下髓核细胞凋亡有保护作用。
- 贺斌刘世清陈庆丁万军邓明周小锐
- 关键词：髓核细胞羧甲基壳聚糖细胞增殖凋亡
- P13K／Akt信号通路在羧甲基壳聚糖保护一氧化氮诱导软骨细胞凋亡中的作用及机制研究被引量：2
- 2015年
- 目的研究羧甲基壳聚糖（CMCS）对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用，并探索P13K／Akt信号转导通路在该过程中的作用及其机制。方法体外培养大鼠膝关节软骨细胞，通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞；3mmol，L硝普钠诱导软骨细胞构建凋亡模型；实验分为空白对照组、硝普钠诱导凋亡组、硝普钠＋不同浓度CMCS处理组、硝普衲＋CMCS＋P13K抑制剂Wortmannin处理组。通过细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）对软骨细胞增殖活性进行检测，流式细胞技术检测软骨细胞凋亡率，荧光定量PCR检测软骨细胞内MMP-13及基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）．1mRNA的表达水平，通过蛋白印迹法检测软骨细胞内Akt及p-Akt表达水平，采用单因素方差分析进行统计学处理。结果3mmo札硝普钠可以抑制软骨细胞增殖活性（吸光度值0．221±0．023），与对照组（0．736±0．032）比较降低70％（F=8．203，P=-0．021），诱导软骨细胞发生早期凋亡，早期凋亡率为（68．8±5．2）％；增加软骨细胞内MMP-13mRNA表达，降低TIMP-1mRNA表达；加入CMCS后软骨细胞增殖活性有所增加，软骨细胞凋亡降低，凋亡率降低为（14．7±2．3）％；并且CMCS可以激活硝普钠诱导软骨细胞内Akt激活，增加P-Akt蛋白表达水平，CMCS可以恢复硝普钠诱导软骨细胞内MMP-13mRNA增加及TIMP-1mRNA降低。结论CMCS对硝普钠诱导软骨细胞凋亡具有一定的保护作用，P13K／Akt信号通路的激活在该过程中起重要作用。
- 贺斌陶海鹰卫爱林刘世清陈庆丁万军
- 关键词：软骨细胞一氧化氮细胞凋亡羧甲基壳聚糖PI3K/AKT
- p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在羧甲基壳聚糖保护一氧化氮诱导软骨细胞凋亡中的作用及机制研究被引量：7
- 2013年
- 目的研究羧甲基壳聚糖（CMCS）对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的影响，并探索p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路在该过程中的作用及其机制。方法体外培养大鼠膝关节软骨细胞，通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞；通过不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡；实验分为对照组、硝普钠处理组、硝普钠＋不同浓度CMCS处理组、硝普钠＋p38MAPK抑制剂SB203580处理组。通过流式细胞技术检测软骨细胞凋亡率，Hoeehst33342染色观察凋亡细胞核形态变化，罗丹明染色观察软骨细胞线粒体膜电位的改变情况，通过蛋白印迹法检测p38与磷酸化p38（p．p38）的表达。采用单因素方差分析进行统计学处理。结果1～3mmol／L硝普钠可以不同程度地诱导软骨细胞发生凋亡，随着硝普钠浓度的增加凋亡率也增加，当硝普钠浓度为3mmol／L时其凋亡率为69．8％（P〈0．05）；硝普钠可以增加软骨细胞核碎裂发生率，其核碎裂细胞数明显高于对照组；硝普钠可降低软骨细胞线粒体膜电位水平，与对照组比较差异明显；硝普钠可以增加软骨细胞内p-p38的表达，与对照组比较增加4．3倍。不同浓度CMCS可以降低硝普钠诱导软骨细胞凋亡率，分别为51．0％、29．9％、15．2％，与3mmol／L硝普钠诱导组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；不同浓度CMCS可以降低硝普钠诱导软骨细胞核碎裂的数量；CMCS可以增加硝普钠诱导凋亡软骨细胞线粒体膜电位；CMCS可降低硝普钠诱导凋亡软骨细胞内p-p38表达水平。结论CMCS对硝普钠诱导软骨细胞凋亡具有一定的保护作用，是通过抑制p38MAPK信号通路活性来完成的。
- 贺斌陶海鹰卫爱林刘世清陈庆
- 关键词：软骨细胞一氧化氮细胞凋亡羧甲基壳聚糖P38MAPK
