国家自然科学基金(39770545)
- 作品数：13 被引量：51H指数：5
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- 山羊子宫内膜基质细胞永生化研究被引量：10
- 2009年
- 将真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过DNA转染技术导入山羊子宫内膜基质细胞（ESCs）,筛选稳定转染的细胞克隆,进行表型鉴定、生长特性及E2、P4等性腺激素的反应性测定。结果,传至2代的山羊ESCs经转染pCI-neo-hTERT,G418筛选2~3周后,抗性克隆形成,滤纸片法转移,扩增并连续培养,共获得5个细胞克隆,扩大培养后的细胞呈典型的长梭形和三角形,相互平行排列成束,与原代培养形态一致。转染后细胞有较高的端粒酶活性,细胞增殖加速,传代时间缩短,传至50代仍稳定增殖。波形蛋白检测阳性,角蛋白检测阴性,具有转染前山羊子宫内膜基质细胞特性。雌激素（100 nmol.L-1）和少量孕激素（10 nmol.L-1）对转染后基质细胞增殖有促进作用。获得了永生化的ESCs,为子宫内膜细胞体外研究奠定了基础。
- 盛宏霞吴庆侠靳亚平秦新喜董海龙
- 关键词：山羊永生化细胞
- 山羊红细胞膜表面CD58的制备与鉴定被引量：8
- 2000年
- 应用胰蛋白酶消化、三氯乙酸沉淀、透析等方法 ,提取山羊 RBC膜表面 CD5 8。玫瑰花环抑制试验表明 ,8.0 g/L 提取物对猪淋巴细胞的 Et花环抑制率达到 6 8.6 %,且该活性可被 CD2封闭 ;淋巴细胞转化试验证明 ,提取物能刺激活化猪 PBMC,与绵羊RBC源 CD5 8的作用间无显著差异 ( P >0 .0 5 ) ,经 PBL 吸收后 ,其活性显著降低 ( P<0 .0 1)。
- 靳亚平王建辰王爱华
- 关键词：山羊CD58
- 山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离培养和鉴定被引量：14
- 2006年
- 为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定，通过2g／L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h，200目的滤网过滤后进行低速离心，收集沉淀物，沉降洗涤3～5次，将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴壁生长，腺团开始向外部扩散，生长2～3d，细胞扩散并出现明显的铺路石状，4～5d腺团基本扩散开来并呈一定走向继续生长。经免疫组织化学方法进行细胞染色，细胞表达角蛋白的阳性率达90％以上。
- 丰艳妮吴庆侠吴瑞楚元奎靳亚平
- 关键词：子宫内膜腺上皮细胞免疫组织化学山羊
- 孕早期山羊胎儿IL-4水平与PBMC增殖活性的关系
- 2006年
- 探讨了妊娠早期山羊胎儿IL-4水平与外周血单核细胞（PBMC）增殖活性的关系。用MTT法，检测孕早期山羊胎儿匀浆上清液（FHS）在不同浓度下对PBMC转化增殖活性的影响，设立孕130d胎儿血清（FS）及FHS＋PHA-P对照组；检测蛋白质浓度在1×10^-4mg／mL时IL-4的含苗，并与转化后的含量进行比较。结果：妊娠早期，FHS对PBMC转化活性的影响随着妊娠的发展而逐渐降低，但均低于妊娠后期对照组。FHS蛋白质浓度在1×10^-4～1×10^-5mg／mL时，对PBMC的转化增殖效果均较好（P〈0．05），且与PHA—P具有协同作用；妊娠早期FHS的IL-4水平随着妊娠的发展呈现上升的趋势，且均高于FS对照组，FHS的IL-4水平与转化后无显著差异（P〉0．05）。妊娠早期FHS IL-4水平的上升与PBMC转化活性下降之间呈负相关关系，正常妊娠早期主要是Th2型细胞因子在起作用，因此可以说明，PBMC转化活性的下降可能是IL-4发挥免疫抑制作用的结果，进而说明，妊娠早期胎儿可能通过自身分泌一些Th2型细胞因子，在母体子宫局部免疫中发挥免疫抑制作用，使其自身不被母体排斥，使妊娠能够顺利进行。
- 楚元奎吴瑞吴庆侠丰艳妮靳亚平
- 关键词：淋巴细胞转化怀孕早期母胎免疫
- 山羊ESC培养上清液对PBMC和PBL转化及分泌活性的影响被引量：2
- 2009年
- 【目的】探索山羊子宫内膜基质细胞(ESC)培养上清,对山羊外周血单核细胞(PBMC)和外周血淋巴细胞(PBL)的转化与分泌活性的影响。【方法】分离山羊PBMC和PBL,制备原代ESC(ESC0)及永生化传至30代的ESC(ESC30)培养上清,将不同培养上清与PHA组合刺激PBMC与PBL转化,应用MTT法检测ESC0及ESC30培养上清对PBMC和PBL转化的作用,ELISA检测PBMC和PBL分泌IL-2I、L-4的相对含量。【结果】ESC0及ESC30上清可刺激PBMC/PBL转化并分泌IL-2和IL-4,抑制PHA-P诱导的PBMC/PBL增殖及IL-2的分泌,但对PHA-P引起的PBMC/PBL分泌IL-4有促进或协同作用。【结论】ESC能通过旁分泌作用影响PBMC和PBL的转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。
- 吴庆侠杨普光王爱华郭挺伟董海龙靳亚平
- 关键词：山羊外周血单核细胞
- 山羊子宫内膜基质细胞的分离培养及鉴定被引量：11
- 2007年
- 对山羊子宫内膜基质细胞进行分离与体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果表明,山羊子宫内膜在37℃条件下,以2 g／L的胶原酶Ⅰ型消化3～4 h效果最好;采用过滤—低速离心—沉降相结合的方法分离山羊子宫内膜基质细胞效果较好,所得细胞在培养后0．5 h开始贴壁,培养12 h后,可见梭形和多角形2种形态的细胞,3～4 d呈网状铺满皿底,有明显的重叠生长现象;免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95％以上,不表达角蛋白。说明采用本文所述的消化和分离方法可获得高纯度的子宫内膜基质细胞。
- 吴庆侠丰艳妮楚元奎吴瑞崔贞亮靳亚平
- 关键词：山羊子宫内膜基质细胞免疫细胞化学
- CD58、雌酮及孕酮对附植早期山羊EML的体外活化被引量：3
- 2002年
- 研究了 CD5 8、雌酮及孕酮对附植早期山羊子宫内膜淋巴细胞 (EML)体外活化作用的影响。结果表明 ,山羊红细胞源性 CD5 8(总玫瑰花结形成抑制率为 5 8.89% )能以剂量依赖方式促进妊娠 1 6、1 7及 2 0 d山羊 EML的体外活化。极低浓度的雌酮 (4 0 pg/m L)对妊娠 1 6d山羊 EML表现极显著的活化作用 ,对妊娠 1 7d山羊 EML只表现微弱的激活作用 ,对妊娠 2 0 d山羊 EML的激活作用不明显。生理水平的孕酮 (2 .5～ 1 0ng/m L)单独作用时 ,能以剂量依赖方式显著促进妊娠 2 0 d山羊
- 沈文正靳亚平李引乾马勇江牛华锋
- 关键词：CD58孕酮EML山羊体外活化
- 山羊CD58的制备与活性检测被引量：1
- 2002年
- 无菌采取健康山羊全血 ,用 0 0 5mol/LpH7 5的PBS液离心、洗涤后 ,向红细胞层加入等体积 0 2 5 g/L胰蛋白酶 ,在 37℃水浴中搅拌消化 1h后 ,逐滴加入 5 %三氯乙酸进行酸化 ,离心后取上清液 ,经扩散透析处理和饱和蔗糖溶液浓缩至原体积的 1/ 8,即为CD5 8制剂。总玫瑰花结 (Et)试验及其统计分析表明 ,所制备CD5 8制剂的平均花结形成率极显著低于对照组 (F >F0 0 1) ,表明其活性较高 。
- 沈文正靳亚平郭欣怡李引乾马勇江高睿
- 关键词：山羊CD58活性检测
- E_2、P_4、OT和PGF_(2α)对猪PBMC活性的影响
- 2007年
- 应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:PGF2α、OT、E2、P4。在试验剂量范围内,E20.1 pg/mL、P41 ng/mL、OT 10 pg/mL、PGF2α100 ng/mL时,其共同作用对PBMC转化活性最强。提示在不同生理时期,由于机体内各种激素浓度变化不同,免疫系统也发生相应的变化。
- 吴瑞楚元奎丰艳妮吴庆侠靳亚平
- 关键词：激素淋巴细胞正交试验
- 小鼠和山羊子宫内膜淋巴细胞的制备被引量：7
- 2000年
- 应用不同的消化方案 ,比较分析了胰蛋白酶和胶原酶对小鼠子宫及山羊子宫内膜组织的消化效果 ,结果证明 ,对小鼠子宫消化的最佳方案是 :1 2 0 IU· m L- 1 型胶原酶 37℃消化 4h,继之 4℃消化 1 0 h,收获已消化细胞后 ,对残余组织利用 2 .5 g· L- 1 胰蛋白酶热消化 5～ 1 0 min,之后迅速加入 5 %左右的 FCS;对山羊子宫内膜的最适消化条件是1 2 0 IU·m L- 1 型胶原酶 37℃消化 4h,继之 4℃消化 1 0 h;应用上述方法消化后 ,所获淋巴细胞活率≥ 95 %
- 靳亚平王爱华武浩王建辰
- 关键词：子宫内膜淋巴细胞
