国家自然科学基金(39770554) 作品数:26 被引量:265 H指数:10 相关作者: 秦宜德 邹思湘 李德雪 张学明 徐银学 更多>> 相关机构: 南京农业大学 解放军军需大学 安徽医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
温度对体外培养小鼠精原干细胞的影响 被引量:21 2001年 将分离纯化的小鼠精原干细胞分别置于 37、34、30℃及 5% CO2 、饱和湿度条件下进行体外培养。结果表明 ,3种温度下的精原干细胞均可以存活并增殖 ,但随着体外培养时间的延长 ,细胞的生长状态、增殖数量和存活时间有明显差异。34℃下细胞平均存活时间最长 ,增殖数量最多。统计分析显示 ,34℃与 30、37℃下细胞平均存活时间有显著差异 ( P<0 .0 5) ,表明 尹明 张学明 吴跃峰 李德雪 段相林 文兴豪 邹尔新 杜惜明 岳占碰 李莲军关键词:精原干细胞 体外培养 温度 小鼠 猪乳中一组高分子量蛋白质的表达量与母猪泌乳性能关系的研究 被引量:3 2004年 通过设计的数学模型,分析了162头二花脸母猪和50头大约克母猪乳中一组高分子量蛋白质(HMWP)的基因表达量(HMWP浓度)与母猪泌乳性能的关系。结果表明,初乳和常乳中HMWP的基因表达量与乳中蛋白质和表皮生长因子(EGF)含量存在显著相关(P<0.05或P<0.01),其中常乳中HMWP的基因表达量与乳蛋白存在极显著正向线性相关(P<0.01)。常乳中HMWP基因表达量与乳糖含量也有正向线性相关的趋势(P<0.1),但与类胰岛素样生长因子-1(IGF-I)和胰岛素含量无显著相关性(P>0.1)。 秦宜德 徐银学 邹思湘 Walter L Hurley关键词:猪乳 高分子量蛋白质 基因表达量 母猪 泌乳性能 表皮生长因子 体外培养条件下SCF、LIF与bFGF对昆明白小鼠精原干细胞增殖的影响 被引量:33 2002年 The present study identified the favorable environment conditions for Spermatogomial stem cells in vitro according to their unique biological properties. Three growth factors, stem cell factor (SCF), leukemia inhibitory factor (LIF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) were all found to independently contribute to the proliferation of mouse spermatogonial stem cell. The percentage of cell proliferation significantly enhanced by SCF at 30 ng/mL but decreased with heightening its combination after cultured 120 hours. The mice spermatogonial stem cells were significantly proliferated after 120 hours’ culture with 10 ng/mL and 20 ng/mL (P<0.01) of LIF, between 20 ng/mL and 50 ng/mL (P<0.01) for bFGF. SCF and bFGF were significantly enhanced mice spermatogonial stem cells proliferation after these three factors combination. For LIF, no obvious effect was abserved. 尹明 李德雪关键词:体外培养 SCF LIF BFGF 7日龄小鼠生精上皮单细胞冷冻保存 被引量:20 2002年 在 DMEM中添加 10 %小牛血清 (NBS) ,并分别添加不同浓度的抗冻剂二甲基亚砜 (DMSO)、丙二醇 (PG)、乙二醇 (EG)及甘油 (G) ,对 7日龄小鼠生精上皮单细胞进行冷冻保存 ,复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果 :当冻存液中 DMSO分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %、2 5 %时 ,细胞复苏率分别为 77.1%、88.2 %、86 .5 %、73.5 %、6 5 .5 % ,其中10 %和 15 % DMSO组细胞复苏率最高 ,与其余各组间均差异极显著 (P<0 .0 1)。当冻存液中 PG分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %、2 5 %时 ,细胞复苏率分别为 6 6 .2 %、84 .3%、72 .1%、6 9.9%、4 7.5 % ,其中 10 % PG组细胞复苏率最高 ,与其余各组间均差异极显著 (P<0 .0 1)。当冻存液中 EG分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %时 ,细胞复苏率分别为 6 4 .9%、81.6 %、6 0 .9%、4 4 .7% ,其中 10 % EG组细胞复苏率最高 ,与其余各组间均差异极显著 (P<0 .0 1)。当冻存液中 G分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %、2 5 %时 ,细胞腹苏率均低于 10 %。 10 % DMSO组细胞复苏率与 10 % PG组和 10 % EG组之间均差异显著 (P<0 .0 5 )或极显著 (P<0 .0 1)。结果表明 ,10 % DMSO、10 % PG及 10 % EG均适宜冷冻保存小鼠精原细胞 ,以 10 % DMSO的冻存效果最好 ,而 G则不适宜冷冻保存。在含 10 % 李莲军 李德雪 张学明 文兴豪 岳占碰 王延钊关键词:抗冻剂 冷冻保存 生精上皮 精原细胞 小鼠 猪乳中一组高分子量蛋白质的多态性及其与泌乳性能的关系 被引量:2 2003年 采用SDS PAGE法对 16 2头二花脸母猪和 5 0头大约克母猪乳中一组高分子量蛋白质 (HMWP)进行了检测 ,计算了该位点基因型频率、等位基因频率和遗传多样性指数 ,并运用线性模型统计方法分析二花脸母猪该位点不同基因型与母猪泌乳性能的关系。结果表明 ,在猪种群中 ,乳中HMWP存在A (相对分子质量 14 6 80 0± 14 0 0 ) ,B ( 114 80 0± 4 0 0 ) ,C ( 10 86 0 0 )和D ( 10 14 0 0± 6 0 0 ) 4种带型 ,分别受 4个等位基因HA、HB、HC 和HD 控制。在二花脸猪乳中HMWP表现出BB、BD和DD 3种基因型 ,其频率分别为 0 6 6 6 7,0 2 716和 0 0 6 17;两个等位基因HB 和HD 频率分别为 0 80 2 5和0 1975 ;遗传多样性指数为 0 3170。大约克猪乳中HMWP表现出BB、AB和BC 3种基因型 ,其频率分别为 0 880 0 ,0 10 0 0和 0 0 2 0 0 ;等位基因HA、HB 和HC 的频率分别为 0 0 5 0 0 ,0 94 0 0和 0 0 10 0 ;遗传多样性指数为 0 1138。在二花脸猪种群中 ,不同HMWP基因型在乳糖浓度上存在显著差异 (P <0 0 5 ) ,但在乳蛋白浓度差异不显著 (P >0 0 5 )。 秦宜德 徐银学 邹思湘 Walter L Hurley关键词:猪乳 高分子量蛋白质 多态性 泌乳性能 成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存 被引量:3 2002年 在含 10 %小牛血清 (NBS)的 DMEM培养基中 ,分别各添加 5 %、10 %、15 %、2 0 %和 2 5 %的二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇 (PG)、乙二醇 (EG)和甘油 (G) ,对成年小鼠睾丸生殖细胞进行冷冻保存 ,复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示 ,5 %~ 2 5 % DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为 88.5 %、88.0 %、88.0 %、6 5 .6 %及 5 1.3% ;5 %~ 2 5 % PG冻存液组的细胞复苏率分别为 87.2 %、86 .4 %、79.0 %、73.4 %及 4 0 .1% ;5 %~ 2 5 % EG冻存液组的细胞复苏率分别为 86 .6 %、80 .9%、6 0 .8%、5 1.3%及 30 .0 % ;5 %~ 2 5 % G冻存液组的细胞复苏率分别为 86 .5 %、86 .3%、6 5 .3%、36 .0 %及 31.4 %。其中各抗冻剂 5 %和 10 %组的细胞复苏率最高 ,与 15 %组相比均存在显著或极显著差异。 4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO、PG、EG和 G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞时的最小损失率分别为 4 .8%、6 .1%、6 .7%、6 .8%。结果表明 ,采用慢速冷冻时 ,DMSO、PG、EG及 G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂 ,最佳使用含量均为 5 %~ 10 %。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含 5 %~ 10 %的 DMSO、PG、EG和 G的 DMEM(含 10 % NBS)冻存液中 ,2步慢速降温 ,液氮储存 ,37℃水浴复苏 。 李莲军 阮承迈 张锐 李德雪 文兴豪 张学明 岳占碰 于卫东关键词:雄性生殖细胞 冷冻保存 小鼠 抗冻剂 猪乳中一组高分子量多态性蛋白质(HMWP)的同源性鉴定 利用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法从猪乳中分离纯化到了高分子量蛋白质B(HMWP -B),纯度达92.3%。制备了兔抗HMWP-B的多克隆抗体,免疫印迹结果表明不同带型的HMWP之间存在免疫交叉反应,说明... 张海方 邹思湘 秦宜德 陈伟华关键词:猪乳 纯化 蛋白多态性 文献传递 几种因素对培养小鼠精原干细胞的影响 被引量:30 2001年 探讨了小鼠胚胎成纤维细胞饲养层及干细胞因子 ( SCF)、白血病抑制因子 ( LIF)、碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)等对体外培养小鼠精原干细胞的作用。结果显示 ,在饲养层上 ,精原干细胞贴壁时间缩至 8~1 2 h,饲养层具有促进其分裂增殖的作用 ;培养液中加入不同浓度的 SCF、LIF及 b FGF,可延长精原干细胞在体外的存活时间 ,其中加入 30μg/L SCF后 ,其体外存活时间与对照组相比差异显著 ( P <0 .0 5 )。 张学明 李子义 赖良学 文兴豪 李德雪 岳占碰 杜惜明关键词:饲养层 SCF LIF BFGF 精原干细胞 二花脸猪乳中蛋白组分的动态变化 被引量:1 2003年 分析了 10头二花脸猪乳中主要蛋白质组分在泌乳 1~ 2 0天的含量及其动态变化。结果表明 ,α_乳白蛋白 (α_La)浓度前 4天呈上升趋势 ,1周后略有下降 ,然而其浓度和百分比均差异不显著。β_乳球蛋白 ( β_Lg)、总酪蛋白 (tCN)和清蛋白(SA)的浓度第一天最高 ,β_Lg有下降趋势 ,SA缓慢下降 ,而tCN规律性不强。β_Lg百分比差异不显著。tCN百分比随着泌乳天数逐日上升。SA的百分比在泌乳一周内变化不大 ,后开始下降。免疫球蛋白 (lgs)、乳铁蛋白 (Lf)浓度以及Igs百分比第一天显著高于其它泌乳天数 ,然后急剧下降 ,在一周后处于很低的水平 ,Lf百分比呈下降趋势。一组高分子量蛋白质(HMWP)浓度和百分比在一周内逐渐上升。 秦宜德 邹思湘关键词:猪乳 蛋白质 猪乳中一组高分子量多态性蛋白质的同源性鉴定 被引量:2 2004年 利用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法从猪乳中分离纯化高分子量蛋白质B (HMWP-B)。 制备兔抗HMWP-B的多克隆抗体,免疫印迹结果表明,不同带型的HMWP之间存在免疫交叉反应,说明该组蛋白具有同源性,为其多态性假说提供了证据。 张海方 邹思湘 秦宜德 陈伟华关键词:猪乳 高分子量 多态性 蛋白质