广东省自然科学基金(990258)
- 作品数：6 被引量：62H指数：5
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- 发文基金：广东省自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 水稻重复序列RRD3在转基因植物中的启动子功能被引量：11
- 2000年
- 来源于水稻 (OryzasativaL .)的一个 82 0bp多拷贝重复序列RRD3 ,含有植物启动子TATA_box、CAAT_box等特征保守基元。用RRD3取代Ti载体pBI12 1中的CaMV 35S启动子 ,通过植物转化鉴定RRD3的启动子功能。组织化学分析表明 ,根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)LBA44 0 4转化后的烟草 (Nico tianatabacumL .)再生植株和水稻愈伤组织都显示了gusA基因的表达 ,并且发现转基因烟草茎端组织的GUS活性比其他部位强。这些结果提示RRD3在转化的植物中行使了启动子功能 ,该DNA片段中启动子核心功能序列的确定正在进行中。
- 王金发李一琨何海琼陈中健刘良式
- 关键词：水稻启动子功能转基因载体
- 水稻重复序列RRD3在CHO和3T3细胞中的启动子活性被引量：3
- 2000年
- RRD3是通过变性 -复性动力学从水稻基因组中克隆到的一个中度重复序列 .将 RRD3作为启动子亚克隆到氯霉素乙酰基转移酶基因为报告基因的 p CAT载体上 ,转染 5种动物细胞 .结果表明在 CHO、3T3细胞中能够启动 CAT基因的表达 .利用核酸外切酶 和 PCR构建了 RRD3的系列缺失体 ,经转染后的 CAT活性分析表明 ,该序列中存在多个与哺乳动物细胞中启动基因表达有关的调控元件 .结合 RRD3在大肠杆菌和高等植物烟草中启动报告基因表达的活性 ,对重复序列与生物进化的关系进行了讨论 .
- 王金发何海琼李一琨王宏斌刘良式
- 关键词：启动子活性进化水稻
- 胡萝卜抗冻蛋白在大肠杆菌中的高效表达被引量：19
- 2003年
- 以pET - 11a为载体构建了胡萝卜抗冻蛋白非融合表达的重组质粒 ,并在大肠杆菌菌株BL2 1(DE3,pLysS)中成功地进行了高效表达。表达的蛋白质以包涵体的形式存在 ,相对分子质量为 36 80 0。经正交试验得到了优化的诱导表达条件。包涵体经各种缓冲液洗涤纯化、溶解、复性和超滤浓缩后 ,经SDS -PAGE电泳检测 ,纯度达单一带水平。生物学活性研究表明 ,重组表达的胡萝卜抗冻蛋白具有很强的热滞活性和提高细菌耐寒性的作用。
- 张党权刘兵范云何炎明王金发
- 关键词：抗冻蛋白包涵体复性
- “表面互补”模型——抗冻蛋白通用的分子机理被引量：14
- 2004年
- 抗冻蛋白(antifreezeprotein,AFPs)是一类能控制冰晶生长和抑制冰晶之间发生重结晶的蛋白质,能在结冰或亚结冰条件下保护生物体不受伤害。AFPs具有两种明显不同的活性———热滞活性和重结晶抑制活性。AFPs虽然在氨基酸序列、物种来源和高级结构等方面具有很大的差异,但都能通过吸附作用与特定的冰晶表面相结合,从而表现出相应的抗冻活性。AFPs与冰晶结合的分子机理主要有"氢键结合"模型和"表面互补"模型,而后者具有更强的优势,已逐渐发展成AFPs通用性的分子机理。目前已测定或建模了三维结构的AFPs都能与冰晶的特定表面形成表面互补,但形成这种表面互补的各种作用力还有待于进一步的研究。
- 王金发张党权
- 关键词：抗冻蛋白
- 水稻S_5区候选克隆R2I19的筛选及序列信息学分析被引量：6
- 2002年
- 以水稻广亲和品种Cpslo17为材料 ,构建了一个覆盖 9倍核基因组的cosmid文库 ,其平均插入片段约4 0kb。以与广亲和位点紧密联锁的单拷贝分子标记BAC2 3D12的R末端为探针 ,从cosmid文库中筛选得到一个阳性克隆R2I19(～ 32kb)。结合S5位点的高密度连锁图和物理图谱 ,初步确定为S5区候选克隆。对该克隆的 2个TAC亚克隆TRW15 10 (～ 15kb)及TRW15 17(～ 15kb)进行了初步的生物信息学分析 ,证实与已知的水稻基因组序列有很高的同源性 ,并显示其中可能含有与水稻育性相关的基因。
- 王宏斌刘兵易厚富范云刘良式王金发
- 关键词：水稻生物信息学基因克隆
- 胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆及其在E.coli中的表达被引量：18
- 2002年
- 对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析 ,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量 36 0 0 0附近有一条蛋白带的差别。由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白 (AFP)表达。根据相关的研究结果设计引物 ,以胡萝卜幼苗基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增得到了长 10 99bp的抗冻蛋白基因。测序结果表明其与GenBank公布的afp序列仅有 3个碱基的差别。将此抗冻蛋白基因克隆进大肠杆菌表达载体pGEX4T1,在IPTG的诱导下表达出了含有AFP的约 6 0 0 0 0的融合蛋白 。
- 范云刘兵王宏斌王树启王金发
- 关键词：胡萝卜抗冻蛋白基因基因克隆大肠杆菌植物抗寒性
