上海市青年科技启明星计划(06QA14017)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：江文正樊燕钱旻闻洁君郝文丽更多>>
- 相关机构：华东师范大学更多>>
- 发文基金：上海市青年科技启明星计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人LIGHT胞外段基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的:构建人LIGHT胞外段基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:从人外周血单核细胞来源的未成熟树突状细胞中提取总RNA,通过RT-PCR得到LIGHT胞外段基因,并将其克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测。结果:RT-PCR扩增出了大小为543bp的LIGHT胞外段基因,经测序证明序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出Mr约为41000的蛋白。结论:成功地克隆了人LIGHT胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达为进一步研究LIGHT的功能打下了基础。
- 郝文丽江文正闻洁君樊燕钱旻
- 关键词：LIGHT基因克隆原核表达大肠杆菌
- HIV-1 nef基因的克隆及原核表达研究被引量：2
- 2010年
- 目的:构建HIV-1 Nef基因的原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,初步优化其表达条件。方法:利用特异性引物PCR扩增获得HIV-1 Nef基因片段,PCR产物经限制性内切酶双酶切后连接载体pET24a(+),构建重组质粒pET24a(+)-Nef。经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,优化表达条件,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达产物。结果:PCR扩增获得618bpDNA片段,酶切鉴定结果表明HIV Nef基因已克隆入原核表达载体pET24a(+)中,测序证明序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组菌诱导后可表达相对分子质量(Mr)符合预期的融合蛋白。0.1mmol/LIPTG在37℃诱导6h为最佳表达条件,重组蛋白表达量可由15.8%增加到43.9%。结论:在大肠杆菌中成功地表达了HIV Nef蛋白,并初步获得了最优化的表达条件。
- 闻洁君江文正郝文丽杜佳妮樊燕钱旻
- 关键词：NEF蛋白原核表达
- 人颗粒酶A全长基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 目的克隆人颗粒酶A(Granzyme A,GzmA)基因,在大肠杆菌中进行表达,并初步优化表达条件。方法通过RT-PCR扩增人GzmA基因,插入原核表达载体pET24a(+)中,构建重组表达质粒pET24a-GzmA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并对诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值进行优化。结果重组表达质粒pET24a-GzmA经双酶切和测序,证实GzmA基因已正确插入载体中,且序列正确;表达的重组蛋白相对分子质量约29 000,且可与小鼠抗His单抗特异性结合;工程菌的最佳诱导温度为37℃,IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值对重组蛋白的表达量影响较小。结论成功克隆了人GzmA基因,并在大肠杆菌中进行了表达。
- 杜佳妮陈磊龙凤英江文正
- 关键词：克隆分子原核细胞
- 小鼠B7-DC胞外段原核表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的:构建小鼠B7-DC胞外段基因的原核表达载体,并在E.coli BL21中诱导表达。方法:从小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(DC)中提取总RNA,经RT-PCR扩增B7-DC胞外段,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a(+)-B7-DCECD。重组质粒经双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测。结果:获得全长为582bp的小鼠B7-DC胞外段基因,经测序证实其序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出Mr约为41000的B7-DC胞外段蛋白。结论:成功地构建了小鼠B7-DC胞外段基因原核表达载体,并在E.coli BL21中进行表达,为进一步研究B7-DC的功能奠定实验基础。
- 樊燕江文正张亚丽闻洁君郝文丽钱旻
- 关键词：基因克隆原核表达
- 小鼠LIGHT胞外段基因原核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建含有LIGHT胞外段的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。方法从由小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增LIGHT胞外段,克隆至原核表达载体pET-24a(+)中,构建重组表达质粒pET24-LIGHTECD。重组质粒经酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测。结果RT-PCR扩增出了525bp LIGHT胞外段的cDNA,经测序证实其序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出相对分子质量为20000的LIGHT胞外段蛋白。结论成功地克隆了小鼠LIGHT胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达,为进一步研究LIGHT的功能打下了基础。
- 张亚丽江文正樊燕钱旻
- 关键词：LIGHT基因克隆原核表达
