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黑龙江省自然科学基金(D2007-20)
作品数:
2
被引量:3
H指数:1
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凌虹
张唯哲
杨丹
王璐晶
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相关机构:
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2012
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I型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点突变对感染细胞能力的影响
被引量:2
2012年
目的探讨I型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点发生突变对CCR5及CXCR4嗜性毒株感染靶细胞能力的影响。方法根据ADA株为CCR5嗜性毒株,只具有感染CCR5细胞的能力;HXB2株为CXCR4嗜性毒株,只具有感染CXCR4细胞的能力,通过重叠延伸剪接的方法,构建CCR5嗜性及CXCR4嗜性毒株V4区丙氨酸替换突变体。将突变体表达载体与带有荧光报告基因的HIV骨架基因表达载体共同转染真核细胞,制备假病毒颗粒。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测假病毒中HIV-1P24抗原,对假病毒进行定量。将假病毒按20、40ng感染U87.CD4.CCR5和U87.CD4.CXCR4细胞,以野生株ADA和HXB2毒株为对照,通过荧光素酶(RLU)测定,检测HIV-1V4区氨基酸386—417位点各突变体假病毒对细胞的感染能力。结果成功构建HIV-1ADA和HXB2株V4区丙氨酸替换突变体,各获得10株突变体。在ADA株和HXB2株,389—391及414—417位点均发生丙氨酸替换突变体,无论是用20ng,还是40ng假病毒感染,对CCR5及CXCR4细胞的感染能力均完全丧失[(0±0)%];在ADA株,400-403和408--410位点发生丙氨酸替换突变体,当假病毒在20ng时,感染细胞的能力达到了(124±35)%和(182±29)%;在40ng时,感染能力达到了(127±8)%和(134±16)%;在HXB2株,395—397位点发生丙氨酸替换突变体,当假病毒在20ng时,感染能力达到了(144±42)%;在40ng时,感染能力达到了(121±18)%;两株在其他位点发生丙氨酸替换突变体,但仅保留部分感染细胞能力(15%-84%)。结论HIV—1包膜糖蛋白V4区389—391及414—417位点氨基酸发生丙氨酸突变.使病毒完全丧失感染靶细胞能力。
张唯哲
李妍
王甲业
杨丹
王璐晶
凌虹
关键词:
I型人类免疫缺陷病毒
包膜糖蛋白
点突变
基于TPI基因的城市污水中蓝氏贾第鞭毛虫的分子鉴定
被引量:1
2012年
目的对哈尔滨市污水处理厂原水中的蓝氏贾第鞭毛虫进行分子鉴定。方法收集哈尔滨市污水处理厂原水样,提取基因组DNA,巢式PCR扩增蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,通过序列分析确定蓝氏贾第鞭毛虫的集聚体类型和亚型,并进行同源性分析。结果从哈尔滨市污水处理厂原水DNA提取物中扩增出蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,经分子鉴定为蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII,其序列与文献报道人源蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII序列(AB516351,FJ560570,EF688021)的同源性为100%。结论哈尔滨市污水处理厂原水中存在蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII,威胁当地居民健康。
张唯哲
凌虹
张晓丽
李懿宏
姬红
杨凤坤
沈玉娟
刘爱芹
关键词:
蓝氏贾第鞭毛虫
污水
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