国家自然科学基金(30871883)
- 作品数：12 被引量：30H指数：4
- 相关作者：丁铲陈鸿军于圣青宋翠萍仇旭升更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所南京农业大学甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- ClassⅠ新城疫病毒强毒株主要结构蛋白特异性抗体的研制被引量：3
- 2010年
- 以新城疫病毒(NDV)ClassⅠ强毒分离株9a5b尿囊液、原核表达的NP、P、M、HN、F五种蛋白为免疫原,接种6周龄BALB/c小鼠制备抗体,用血凝抑制试验(HI)、间接免疫荧光试验(IFA)、细胞中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western-blot方法共同检测所获得的各类抗体。结果显示,成功制备获得了NDV各结构蛋白多抗及12株NDV特异性单抗。免疫特性鉴定结果表明,在获得的12株单抗中,3H7和3H9株单抗为抗ClassⅠHN特异性单抗,仅具有IFA和HI效价,而2A8株单抗却无HI效价;其他单抗均与ClassⅡ毒株存在交叉反应。
- 孙英杰陈鸿军宋翠萍于洋仇旭升于圣青丁铲
- 关键词：新城疫病毒强毒株结构蛋白特异性抗体
- 新城疫病毒感染过程中基质蛋白的动态分布被引量：2
- 2011年
- 本研究利用原核表达产物制备的多抗血清进行M蛋白在细胞内的定位分析,NDV 9a5b病毒按5个感染复数（m.o.i）感染量接种DF1单层细胞,当PI=6 h时,M蛋白主要分布于细胞浆内,并未到达细胞膜内侧;到PI=8 h时,粗面内质网周围的M蛋白逐渐增多;PI=12 h时,M蛋白已开始聚集于细胞膜的内侧,而当感染后16 h开始形成合胞体时,M蛋白在细胞膜内侧形成明显的斑点状聚集;当感染至24 h时,逐渐出现5~10个细胞膜融合的包涵体,M蛋白存在于包涵体融合膜的内层,且荧光强度已逐渐减弱。这为深入开展M蛋白与病毒增殖、宿主相互作用机制的研究工作奠定了基础。
- 孙英杰陈鸿军詹媛于洋仇旭升宋翠萍于圣青丁铲
- 关键词：新城疫病毒基质蛋白
- 鸡毒支原体通用型mini-Tn4001转座子的构建被引量：2
- 2009年
- 为了实现以鸡毒支原体(MG)为载体携带和表达其他呼吸道病原保护性抗原,达到多种病原体共同保护的效果,本研究拟构建一套mini-Tn4001转座子(pMT4).该微型转座子具备以下特征:含四环素抗性基因;两臂是转座酶识别的Inner和Outer插入重复区;转座酶位于插入区之外,在整合起始点处促进转座;多克隆位点便于插入外源基因.这一微型转座子载体的成功构建为MG非必需区缺失工作奠定了基础,对下一步MG功能基因的靶向缺失技术以及外源蛋白的表达建立了有效的基因操作工具.
- 陈鸿军赵春梅沈欣悦陈丹清于圣青丁铲
- 关键词：鸡毒支原体转座子
- 鸡败血支原体GapA高变区在大肠杆菌中高效表达被引量：4
- 2009年
- 本研究通过对鸡败血支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)强毒株黏附素GapA的N端(98aa^322aa)和C端(820aa^1 115aa)2个高变区进行克隆,并进行原核表达,制备获得抗GapA多抗,结果显示,GapAN获得高效表达,制备获得的抗体对MG黏附真核细胞有一定的抑制作用,这说明GapA对MG的黏附有着非常重要的影响。这一抗原成分的成功表达和抗体的制备为研制特异性单抗和筛选GapA缺失型突变株奠定了坚实的基础;并且利用不同毒株在GapA N端功能区的基因序列的明显差异,使基于该抗体建立新型快速的免疫学方法以鉴别MG强弱毒株亦将成为可能。
- 赵春梅陈鸿军宋翠萍于圣青丁铲
- 关键词：鸡败血支原体黏附素
- 鸡毒支原体烯醇化酶的可溶性表达及检测被引量：2
- 2010年
- 烯醇化酶参与支原体糖酵解、细胞黏附及免疫调节等多种生命活动,对其开展功能研究有助于了解鸡毒支原体黏附及感染机制。本研究通过重叠PCR克隆获得鸡毒支原体烯醇化酶,经原核表达获得可溶性融合蛋白rMGEno,将纯化产物免疫BALB/c小鼠后制备获得特异性多抗。通过Western blot和ELISA检测发现,烯醇化酶在鸡毒支原体不同强弱毒株中高度保守,表达产量高,在鸡毒支原体参试各毒株的细胞膜中均有分布。这一表达产物的成功制备为深入研究鸡毒支原体烯醇化酶的生物学功能奠定了基础。
- 沈欣悦陈鸿军陈丹清于圣青丁铲
- 关键词：鸡毒支原体烯醇化酶可溶性表达
- ClassⅠ新城疫病毒核衣壳蛋白在体外细胞感染过程中表达定位的检测被引量：1
- 2011年
- 为分析核衣壳蛋白(NP)在新城疫病毒(NDV)感染真核细胞过程中细胞内定位的情况,本研究以NDV Class I强毒株9a5b作为免疫原制备4株NP特异性单克隆抗体(MAb),并将病毒株9a5b按5 MOI感染量接种DF1单层细胞,当接种后1 h～3 h时,NP有极少量表达并逐量增加,主要呈点状分布于细胞浆内;当接种后4 h～20 h时,NP聚集于细胞浆中,聚集数量与感染时间成正比;感染24 h后,细胞核碎裂,NP散在分布于细胞浆中。表明NP作为立早期蛋白,始终在胞浆中进行复制;在病毒感染初期,NP介导核糖核蛋白复合物发挥转录和翻译功能。本研究为深入开展NP与病毒mRNA转录、复制和包装的相互关系机制的研究奠定了基础。
- 孙英杰陈鸿军詹媛仇旭升于洋于圣青丁铲
- 关键词：新城疫病毒核蛋白细胞内定位
- 鸡败血支原体mga0553编码基因的克隆与表达
- 2008年
- 设计1对引物对鸡败血支原体R株mga0553基因进行PCR扩增,并通过双酶切定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-32a-mga0553。重组质粒经诱导表达并取表达产物进行分析,结果显示,mga0553基因获得了融合表达。Western-blotting证实,表达产物MGA_0553与MG阳性血清具有免疫反应性;生长抑制试验表明,鼠抗MGA_0553血清对MG细胞的增殖具有抑制作用;间接免疫荧光染色检测结果显示:MG细胞呈现较强的绿色荧光。研究结果表明mga0553基因编码蛋白MGA_0553是MG的一种膜相关蛋白。
- 高继业高勤学陈鸿军李继祥丁铲
- 关键词：鸡败血支原体克隆
- 新城疫病毒核衣壳蛋白的结构和功能被引量：6
- 2011年
- 新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属的成员之一,也是家禽的主要病原之一。NDV病毒粒子自然状态下呈多形性,大小150 nm～400 nm;病毒粒子内有长1 000 nm螺旋状的核衣壳结构,直径为17 nm～18 nm;
- 丁铲
- 关键词：新城疫病毒核衣壳蛋白副黏病毒病毒粒子VIRUS腮腺炎病毒
- 鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2014年
- 为制备鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基(PDHB)的单克隆抗体,将鸡毒支原体Rlow株的pdhb基因进行克隆和原核表达。表达产物纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗鸡毒支原体PDHB抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为2D11、3B5和4D9。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 024~1∶2 048,小鼠腹水的抗体效价为1∶12 800~1∶25 600。单克隆抗体特异性试验显示,获得的腹水单克隆抗体均能与鸡毒支原体各菌株发生反应,而不与其他禽类病原发生反应。3株单克隆抗体的抗体亚型均为IgG1,轻链均为κ链。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。鸡毒支原体PDHB单克隆抗体的成功制备,为研究丙酮酸脱氢酶的生物学功能和进一步建立检测方法奠定了基础。
- 张凡庆谭磊包世俊任峰陆凤费荣梅丁铲
- 关键词：鸡毒支原体单克隆抗体
- 鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定被引量：7
- 2013年
- 为了探明醛缩酶在支原体中的定位,根据已发表的鸡毒支原体醛缩酶(fba)基因序列设计特异性的引物,以鸡毒支原体Rlow株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增鸡毒支原体醛缩酶fba基因,将fba克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析。结果表明,fba基因全长873bp,编码290个氨基酸。将构建的重组表达质粒pET28a-fba转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白rMGfba,大小约为33ku。纯化蛋白并对蛋白进行酶活性检测,结果显示该酶在体外具有与阳性对照醛缩酶相同的催化功能。用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,提取鸡毒支原体膜蛋白,Western-blot分析结果显示FBA多抗可与疏水性膜蛋白特异性结合,说明FBA位于鸡毒支原体膜表面。
- 何随彬谭磊包世俊郭小琴仇旭升宋翠萍费荣梅丁铲
- 关键词：鸡毒支原体醛缩酶原核表达酶活性
