徐州市科技计划项目(XF10C065)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：黄一虹徐开林宋立孝潘秀英曾令宇更多>>
- 相关机构：徐州医学院附属医院徐州医学院附属第三医院徐州市中心医院更多>>
- 发文基金：徐州市科技计划项目江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 趋化因子受体7基因修饰的未成熟树突细胞对小鼠移植物抗宿主病的作用研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨趋化因子受体7（CCR7）基因修饰的未成熟树突细胞（imDC）对异基因骨髓移植（allo．BMT）小鼠急性移植物抗宿主病（6vno）的影响。方法构建CCR7重组慢病毒载体，包装后感染imDC；以C57BL／6小鼠为供鼠，BABL／c小鼠为受鼠，建立小鼠GVHD模型；实验分为4组，分别为单纯照射组、移植对照组、pXZ9．imDC组（空载体对照）和CCR7-imDC组；通过观察受鼠移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理学改变、炎性细胞因子浓度等评价CCR7-imDC防治GVHD的作用。结果单纯照射组、移植对照组、pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组小鼠存活时间分别为（8．20±1．48）、（12．20±2．78）、（20．70±6．01）和（27．50±7．55）d，CCR7-imDC组小鼠存活时间明显长于其他各组（P〈0．01）。移植对照组、pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组小鼠GVHD评分分别为（6．90±1．66）、（5．60±0．97）和（4．10±1．79）分，CCR7-imDC组较其他两组GVHD评分降低（P〈0．05），组织病理学改变最轻。移植对照组小鼠血清IFN-丫浓度升高，在＋i0d时达高峰，而pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组IFN-γ浓度降低，＋20d时降至最低，CCR7-imDC组降低最明湿（P〈0．01）。移植对照组小鼠血清IL-4降低，而pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组IL-4浓度渐升高，＋10d达高峰，以CCR7-imDC组升高最明显（P〈0．01）。＋30d，CCR7-imDC组存活受鼠骨髓异基因嵌合率为95％～100％，证实为完全供者型植入。结论CCR7-imDC能够明显延长受鼠的存活时间，减轻急性GVHD的发生。
- 李德鹏武家庆黄一虹宋立孝谷红红高彩玲李振宇潘秀英徐开林
- 关键词：树突细胞基因CCR7小鼠移植物抗宿主病
- CD11c^(low)CD45RB^(high)调节性树突状细胞的诱导培养及鉴定
- 2012年
- 背景:新近发现CD11clowCD45RBhigh调节性树突状细胞在参与免疫负向调控机制和临床治疗上有潜在的意义。目前对于健康人骨髓来源的调节性树突状细胞的体外诱导培养及鉴定的研究较少。目的:体外培养正常人骨髓来源的具有CD11clowCD45RBhigh表型的调节性树突状细胞,从细胞形态、免疫表型、吞噬功能及刺激T淋巴细胞增殖能力等方面对其进行鉴定。方法:分离正常人骨髓单个核细胞分别在不同的培养体系中进行体外诱导培养,实验分3组:①调节性树突状细胞组,在含粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,白细胞介素10,转化生长因子β1的1640培养基中培养7d后,用脂多糖刺激24h。②未成熟树突状细胞组,用含粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,白细胞介素4的1640培养基培养8d。③成熟树突状细胞组,用含粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,白细胞介素4的1640培养基培养7d后,予脂多糖刺激24h,使其成熟。光镜和扫描电镜观察树突状细胞的形态,流式细胞仪检测其免疫表型以及吞噬能力,CCK-8法检测其刺激异基因淋巴细胞增殖能力。结果与结论:①人骨髓源单个核细胞在联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,白细胞介素10,转化生长因子β1培养8d后获得的细胞具有调节性树突状细胞的典型特征和免疫表型,说明该实验建立的培养调节性树突状细胞的方法是切实可行的。②CD11clowCD45RBhigh调节性树突状细胞这种新亚群具有较强的吞噬能力,刺激T淋巴细胞增殖的能力较弱,为调节性树突状细胞诱导免疫耐受的进一步研究奠定实验基础。
- 刘苍春黄一虹冯洒然谷红红曾令宇李德鹏徐开林
- 关键词：树突状细胞调节性骨髓单个核细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素10
- 趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达被引量：4
- 2012年
- 背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。
- 宋立孝张璞李德鹏曾令宇陈翀潘秀英徐开林黄一虹
- 关键词：趋化因子受体7未成熟树突状细胞慢病毒载体真核表达
