国家自然科学基金(30871841)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 慢病毒介导的猪CD4启动子在白血病Jurkat细胞中的启动作用
- 2012年
- 目的:研究异种基因启动子在Jurkat细胞中调节外源基因表达的作用,为人类白血病动物模型的建立提供理论依据。方法:利用生物信息学手段预测并克隆出猪CD4基因启动子,然后利用克隆的猪CD4基因启动子构建和包装慢病毒载体。包装的病毒经过滴度检测和侵染293T细胞及Jurkat细胞后进行绿色荧光蛋白检测,比较猪CD4基因启动子与EF-1α启动子启动的外源基因表达情况。结果:成功预测出猪CD4基因启动子,成功构建慢病毒载体并包装出病毒。经过病毒滴度测定及侵染293T细胞和Jurkat细胞表明,2种启动子在细胞中的启动绿色荧光蛋白的效果相近。结论:猪CD4基因启动子在白血病Jurkat细胞中没有特异性启动外源基因,猪CD4基因启动子可以作为一种在Jurkat细胞中启动外源基因的不同选择。
- 林晓晨杨鑫曹宇航焦丽戴甄任林柱逄大欣
- 关键词：慢病毒JURKAT细胞293T细胞启动子
- 骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ转基因猪胚胎成纤维细胞克隆的构建与鉴定
- 2012年
- 目的:构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有FSⅠ-Ⅰ基因的细胞克隆,为研究FSⅠ-Ⅰ对猪骨骼肌的影响奠定基础。方法:通过RT-PCR方法从猪骨骼肌中扩增FS A(包含FS N端和结构域FSⅠ)和结构域FSⅠ;利用PCR方法分别从鼠基因组、人血液基因组和pcDNA3.1(+)载体上扩增出MCK增强子、ACTA 1启动子和BGHpolyA。将上述4个片段分别连接到真核表达载体pGKneotpAlox2上,构建骨骼肌特异性表达FSⅠ-Ⅰ(包含FS N端和2个连续FSⅠ结构域)的载体pGK-MCK-ACTA 1-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA;用FuGENE○RHD转染猪胚胎成纤维细胞,经药物G418筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果:成功构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的表达载体pGK-MCK-ACTA1 promoter-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA,并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中,获得了整合有目的基因FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论:获得了骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆,为通过核移植方法获得表达FSⅠ-Ⅰ转基因猪提供了供体细胞。
- 袁婷刘帅李小平唐成程韩晓蕾逄大欣欧阳红生
- 关键词：卵泡抑素真核表达
