国家自然科学基金(30871836) 作品数:13 被引量:73 H指数:6 相关作者: 郭勇 倪和民 刘云海 罗永 邓桂馨 更多>> 相关机构: 北京农学院 北京奶牛中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 北京市自然科学基金 北京市教育委员会科技发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
影响绵羊胞质内单精子注射结果相应因素的分析 2013年 本实验探讨了绵羊卵母细胞成熟以及胞质内单精子注射的相应影响因素,以期优化绵羊ICSI的操作技术和体外成熟体系。本研究分别设定3组卵母细胞成熟时间(19~21 h,23~25 h,28~30 h),同时比较6、12点和7、11点注射位置对胞质内单精子注射后胚发育的影响。结果表明,绵羊卵母细胞在成熟23~25 h之间进行单精子注射后,其囊胚率显著高于19~21 h和28~30 h[(6.30±0.59)%vs(4.05±0.63)%,(3.59±0.29)%],研究注射位置对胚胎发育影响时研究结果显示,在6、12点注射后其胚胎的卵裂率(54.17±3.24)%vs(46.40±3.22)%和囊胚率(5.88±0.30)%vs(2.77±0.15)%均明显高于7、11点。因此,应尽量使用成熟23~25 h的绵羊卵母细胞进行胞质内单精子注射,同时注射时应选择6、12点的位置,从而利于胚胎的后期发育。 朴学娇 郑雪莹 曹玉桃 张帆 翟春东 刘云海 倪和民 郭勇关键词:体外成熟 胞浆内单精子注射 胚胎发育 钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响 被引量:2 2010年 通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.050.2μmol/L为宜,作用时间1 min。 刘烈琴 郭勇 刘云海 薛君忠 张宏 李晓燕 倪和民关键词:绵羊精子 体外获能 钙离子载体 咖啡因 不同来源牛体外胚胎与牛子宫内膜细胞共培养体系的建立 被引量:2 2012年 为了初步建立有效的牛胚胎与子宫内膜细胞的体外共培养体系。本实验分别将体外受精第7天后的胚胎和孤雌激活,与培养7天的胚胎与子宫内膜细胞共培养,在48、72h后分别统计体外受精实验组和孤雌激活实验组的孵化率。实验结果表明:在本实验室培养条件下,在与子宫内膜细胞共培养48h后,体外受精胚胎和孤雌发育胚胎在孵化率上存在显著差异(40±5)%、(25±5)%,(P<0.05);与子宫内膜共培养72h后,孵化率无显著差异(70±8.66)%,(65±5)%,(P>0.05)。本实验证明了在体外环境下,牛体外胚胎与子宫内膜细胞共培养后能够正常孵化,可以初步建立起牛体外胚胎与子宫内膜细胞的体外共培养体系,并为进一步研究该体系对牛体外胚胎培养质量的影响奠定一些基础。 张彧 陈利平 梁鸿斌 李娅杰 赵雅琦 阎芃 杨菲 倪和民 郭勇关键词:子宫内膜细胞 体外共培养 LH Plays a Role to Enhance the Nuclear and Cytoplasm Synchronization During In vitro Maturation of Ovine Oocytes 2011年 This study is aimed to investigate the effect of luteinizing hormone (LH) on maturation and fertilization in vitro of ovine oocytes. The ovine oocytes were cultured in vitro in medium with or without LH, and then checked by confocal laser scanning microscope to observe the distribution of cortical granules stained with FITC-LCA during different maturation periods. Similarly, some in vitro matured oocytes were also fertilized in vitro for analysis of their developmental potentiality further. After being cultured in vitro for 4 h, there were significant differences about the rate of germinal vesicle break down (GVBD) between the treatment (with LH) and the control groups (without any hormones) (36.76% vs 18%, P〈0.05). Further, there were also significant differences of the cleavage and blastocyst rates between these two groups (67.15% vs 42.37%, 21.9% vs 12.71%, P〈0.05, respectively). The distribution of cortical granules appeared to spread from the edges to the central site of sheep oocytes following their delaying durations of maturation in vitro. It can be concluded that LH may play a role to delay the occurence of GVBD, prolong the maturation duration of cytoplasm, and enhance the nuclear and cytoplasm synchronization of ovine oocytes matured in vitro and finally improve their in vitro developmental potentiality. LI Kai NI He-min LIU Yun-hai ZHAO Yan-wei QU Yang-yan LI Xiao-yan GUO Yong关键词:OVINE OOCYTE 3个品种绵羊超数排卵处理后卵巢上促黄体素受体表达差异的研究 被引量:6 2011年 本研究旨在探讨在具有不同超数排卵效果的绵羊品种中,在进行超排处理后其卵巢上的促黄体素受体(LH receptor,LHR)分布情况,为进一步研究二者的相关性以及据此为改进超排效果奠定基础。根据超数排卵效果的优劣依次选择3个我国地方绵羊品种:小尾寒羊、白滩羊和乌珠穆沁羊。在常规超排最后一次注射FSH后的8、16和24h分别各取3只绵羊的卵巢,采用免疫组织化学法观察3个品种绵羊卵巢上LHR的分布情况。结果表明:LHR存在于3个地方品种绵羊卵巢有腔卵泡的颗粒细胞和膜细胞上,但在早期卵泡上不表达;各品种绵羊的近成熟卵泡上LHR阳性细胞率都显著高于相应的次级卵泡(P<0.05);3品种绵羊近成熟卵泡中LHR的阳性变化率存在显著差异,从高到低依次为小尾寒羊>白滩羊>乌珠穆沁羊(P<0.05)。籍此可以得出以下结论:LH对绵羊早期卵泡发育的诱导可能不需要通过其特异性受体起作用;3品种绵羊近成熟卵泡中LHR的阳性变化率与超排效果是一致的,表明超数排卵的效果可能与绵羊卵巢上的LH受体分布存在一定的联系。 倪和民 张鸿波 刘云海 邓桂馨 芦天罡 郭勇关键词:绵羊 超数排卵 免疫组织化学染色 促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟核质同步化的影响 被引量:6 2009年 【目的】研究促黄体素(LH)对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。【方法】将绵羊卵母细胞置于含LH(处理组)或不含LH(对照组)的成熟液中进行体外成熟,在不同时间点取出,观察卵母细胞核成熟情况;结合皮质颗粒分布变化的观察结果判断细胞质成熟情况。【结果】绵羊卵母细胞体外成熟4h时,处理组生发泡破裂(GVBD)率显著低于对照组(36.76%vs50%,P<0.05);体外成熟24h并进行体外受精后,处理组卵母细胞卵裂率和囊胚率显著高于对照组(67.15%vs42.37%,21.9%vs12.71%,P<0.05)。激光共聚焦扫描检测结果表明,随着核的成熟,绵羊卵母细胞的皮质颗粒由胞质中心区域向周边发生规律性迁移,经LH处理的卵母细胞,皮质颗粒扩散的程度明显好于对照组。【结论】LH可能通过延迟生发泡破裂和促进胞质成熟的方式,使绵羊卵母细胞的核质成熟趋于同步,有助于绵羊卵母细胞的体外成熟以及受精后的进一步发育。 李凯 倪和民 赵雁伟 刘云海 曲杨燕 李晓燕 郭勇关键词:绵羊 卵母细胞 体外成熟 促黄体素 2种化学激活方法制备的小鼠孤雌胚胎早期发育指标比较研究 2012年 为了寻找一种健康、有效的制备孤雌胚胎的方法,从根本上提高哺乳动物孤雌胚胎、体外受精胚胎及核移植胚胎成活率并减少孤雌胚胎、核移植胚胎出生后发生潜在疾病与缺陷的几率。通过比较2种不同化学激活方法(试验组I:7%乙醇+2mmol/L 6DMAP;试验组II:7%乙醇+2mmol/L 6DMAP+5μg/mL CB)制备的小鼠孤雌胚胎由卵母细胞激活到发育至囊胚的时间、囊胚形态及囊胚细胞数目,初步研究了不同化学方法制备的小鼠孤雌胚胎在形态学及细胞水平上的差异性。结果表明:试验组I与试验组II相比,前者比后者卵裂率稍高,桑葚率、不同时间段的囊胚率稍低,但两组间数据差异不显著(64.9vs73.7,P>0.1;31.7vs28.8,P>0.1;8.7vs5.5,P>0.1)。2种方法所得的孤雌囊胚在形态上相似,但是试验组II囊胚细胞数要比试验组I囊胚细胞数稍少(67vs50,P>0.1);两组囊胚的细胞数与受精囊胚相比没有显著差异(67vs50vs65,P>0.1)。选用的2种化学方法制备的小鼠孤雌胚胎,在由卵母细胞发育至囊胚的时间、囊胚形态及囊胚细胞数目方面没有显著差异。 王英 罗永 尹艳云 刘云海 盛熙晖 邓桂馨 郭勇 倪和民关键词:小鼠 孤雌 形态学 细胞水平 着床前小鼠孤雌囊胚及正常囊胚上Wnt-3a的差异表达研究 2012年 为了研究Wnt-3a在小鼠着床前,孤雌囊胚和正常胚胎上的表达差异情况。采用激光扫描共聚焦显微技术和半定量RT-PCR检测方法,对孤雌囊胚和正常囊胚上Wnt-3a的表达以及分布情况进行定性和定量的检测。利用激光扫描共聚焦显微技术检测发现:在着床前的小鼠孤雌囊胚和正常囊胚上都有Wnt-3a蛋白质的表达,且只在滋养层细胞中表达;通过半定量RT-PCR检测发现:着床前小鼠孤雌胚胎与正常胚胎相比,Wnt-3a的转录水平没有显著性差异。所以Wnt-3a在着床前小鼠孤雌胚胎和正常胚胎中都有表达;而且其转录水平在这2种胚胎中没有显著性差异。 林皓 王灏 刘石磊 刘振伟 刘云海 倪和民 郭勇关键词:小鼠 孤雌胚胎 激光共聚焦 半定量RT-PCR 血管内皮生长因子对猪卵母细胞体外成熟的影响研究 被引量:1 2012年 为了探讨适宜浓度的血管内皮因子(VEGF)对猪卵母细胞体外成熟的影响,以提高猪卵母细胞的成熟效果进而促进胚胎的后期发育,以期为进一步改善猪卵母细胞体外成熟体系提供参考。本研究通过在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的VEGF,成熟培养液(TCM199+BSA)中分别添加0ng/mLVEGF对照组、5ng/mLVEGF试验组Ⅰ、50ng/mLVEGF试验组Ⅱ、500ng/mLVEGF试验组Ⅲ的卵母细胞成熟培养后,经孤雌或体外受精和体外培养。结果表明:(1)试验组Ⅰ极显著地提高了猪卵母细胞的成熟率,试验组Ⅱ显著提高了猪卵母细胞的成熟率;(2)成熟的卵母细胞经孤雌激活和体外培养后,试验组Ⅰ极显著提高了孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率。试验组Ⅱ显著提高了孤雌胚胎的卵裂率、极显著的提高了囊胚率;(3)成熟的猪卵母细胞经体外受精和体外培养后,试验组Ⅰ显著地提高了体外受精胚胎的卵裂率和囊胚率,试验组Ⅱ显著地提高了体外受精的卵裂率、极显著地提高了囊胚率。说明5ng/mL或50ng/mL的VEGF,有利于促进猪卵母细胞的体外成熟和早期胚胎的发育。 董晓晨 王稳 罗永 王英 刘石磊 刘云海 倪和民 郭勇关键词:卵母细胞 体外成熟 血管内皮生长因子 经程序化冷冻的小鼠休眠胚胎的基因表达谱差异分析 被引量:6 2012年 目的探讨小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后基因表达谱的变化及相关信号通路的改变趋势。方法采用Affymetrix基因芯片检测小鼠正常休眠胚胎和经程序化冷冻后的休眠胚胎的差异表达基因;采用GO分析和Pathway分析等生物信息学方法进一步了解相关信号通路的改变。结果经程序化冷冻后的小鼠休眠胚胎与正常休眠胚胎相比,存在228个差异表达基因,其中50个基因表达上调,178个基因表达下调。Pathway分析显示黏着斑通路、细胞外基质受体相互作用通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、细胞凋亡通路、细胞通讯通路、泛素介导的蛋白质水解通路、甘油磷脂代谢通路、小细胞肺癌通路、TGF-β信号通路、MAPK信号通路等基因差异表达变化趋势明显。结论小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后会导致一系列基因调控变化,并可能影响多条信号通路的协同变化。 张劭俣 刘云海 倪和民 王灏 顾美超 阎芃 杨菲 郭勇关键词:小鼠