山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2010BSB14050) 作品数:13 被引量:72 H指数:4 相关作者: 张宝刚 刘雨清 孙磊 李小龙 姬静 更多>> 相关机构: 潍坊医学院 潍坊医学院附属医院 邹城市人民医院 更多>> 发文基金: 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金 国家自然科学基金 山东省高等学校科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
NUAK1增加乳腺癌细胞的趋化和粘附能力 被引量:1 2014年 本课题组先前已证明NUAK1/ARK5可通过影响F-actin的聚合从而促进乳腺癌细胞的侵袭和转移.但是NUAK1是否还通过其它机制影响乳腺癌的侵袭和转移尚有待于探讨.本文证明NUAK1还可以影响乳腺癌细胞趋化、粘附能力从而在乳腺癌细胞侵袭转移中起重要作用.应用化学合成的小RNA干扰质粒转染到乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,用免疫印迹技术检测NUAK1蛋白的表达情况.结果显示,在敲除NUAK1的细胞(siNUAK1/MDA231)中,NUAK1蛋白表达水平明显降低;趋化运动实验结果显示,siNUAK1/MDA231细胞的趋化运动能力比未处理组(Scr/MDA231)细胞明显降低;细胞粘附实验结果显示,EGF刺激5 min、15 min后,siNUAK1/MDA231细胞比Scr/MDA231细胞粘附细胞数量均明显减少;免疫印迹技术检测integrinβ1磷酸化验证NUAK1影响乳腺癌细胞粘附的机制.结果显示,siNUAK1/MDA231细胞内integrinβ1磷酸化比Scr/MDA231细胞不同程度降低.上述结果表明,NUAK1通过磷酸化integrinβ1促进乳腺癌细胞与纤维粘连蛋白的粘附,从而促进乳腺癌的侵袭和转移. 李洪利 尹崇高关键词:乳腺癌 整合素Β1 粘附 乳腺癌中mTOR、CCR7的表达及与淋巴结转移的关系 被引量:4 2013年 目的探讨乳腺浸润性导管癌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)与趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CCR7)的表达以及与乳腺癌侵袭、转移之间的关系。方法采用免疫组化MaxVision法检测105例乳腺浸润性导管癌、55例转移淋巴结及40例正常乳腺组织中mTOR和CCR7的表达,并分析mTOR和CCR7的表达与乳腺癌侵袭和淋巴结转移的关系以及二者之间的相关性。结果 mTOR在乳腺浸润性导管癌、转移淋巴结及正常乳腺组织中的阳性率分别为68%(71/105)、93%(51/55)、25%(10/40),差异有统计学意义(P<0.05);CCR7在乳腺浸润性导管癌、转移淋巴结及正常乳腺组织中的阳性率分别为74%(78/105)、94%(52/55)、28%(11/40),差异有统计学意义(P<0.05)。在乳腺癌中,mTOR和CCR7的表达呈正相关(rs=0.203,P<0.05)。mTOR和CCR7的高表达均与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论mTOR和CCR7的异常高表达可能与乳腺癌的侵袭、转移有关,且检测二者的表达可作为判断乳腺癌转移及预后的预测指标。 刘清华 孙磊 李媛媛 李小龙 王竹青 刘雨清关键词:乳腺肿瘤 浸润性导管癌 MTOR CCR7 mTOR和CCR7与乳腺癌侵袭转移的关系 2013年 目的:探讨乳腺浸润性导管癌组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)与趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CCR7)蛋白的表达,以及二者与乳腺癌侵袭、转移之间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测65例乳腺浸润性导管癌及32例正常乳腺组织中mTOR和CCR7的表达情况,并分析二者之间的相关性及其与各临床病理特征之间的关系。结果:mTOR和CCR7蛋白在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率(mTOR为68%,CCR7为74%)高于癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率(mTOR为25%,CCR7为28%),差异有统计学意义(P<0.01)。mTOR与CCR7的表达呈正相关(r=0.485,P<0.05)。mTOR和CCR7的高表达均与淋巴结转移、临床恶性肿瘤分期有关(均P<0.05),而与年龄、雌激素受体、孕激素受体无关(均P>0.05)。结论:mTOR和CCR7的异常高表达可能与乳腺癌的侵袭、转移有关,且检测二者的表达可作为判断乳腺癌转移的预测指标。 刘清华 李媛媛 徐滨 王竹青 刘雨清关键词:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 趋化因子受体7 乳腺浸润性导管癌 免疫组织化学 CCL18通过与Nir1结合促进胶质瘤细胞侵袭的研究 被引量:3 2015年 背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;利用siRNA技术抑制U251细胞中Nir1的表达;采用Western blot检测转染后Nir1蛋白的表达和转染前后U251细胞中Akt磷酸化的情况;使用体外侵袭实验检测转染后细胞的运动和侵袭能力;采用F-actin聚合实验检测F-actin的聚合能力。结果:Nir1在各胶质瘤细胞中均呈高表达;小RNA干扰技术沉默Nir1基因后,U251细胞中Nir1的蛋白表达量明显下降,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组少(P=0.00);在CCL18刺激后细胞内的F-actin聚合量比对照组减少;Akt磷酸化试验结果显示,对照组细胞在CCL18的刺激下Akt更易发生磷酸化,实验组细胞无论是否存在CCL18,Akt磷酸化都受到抑制。结论:在胶质瘤细胞中存在Nir1蛋白高表达,通过与细胞膜上CCL18特异性结合来调节胶质瘤细胞的F-actin聚合和Akt的磷酸化进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。 陈萍萍 田红艳 李洪利 史立宏 任甜甜 翟丽敏 张宝刚关键词:胶质瘤 AKT SIRNA ARK5,MMP-14在胃癌中的表达及其对临床病理特征的影响 2011年 目的 观察腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5),基质金属蛋白酶14(MMP-14)在胃癌原发灶中的表达,探讨两者之间的相关性及其与临床病理特征的关系.方法 免疫组织化学方法检测ARK5,MMP-14在81例胃癌手术标本和20例正常胃组织中的表达,比较二者在两种组织中的表达差异.结果 ARK5,MMP-14在胃癌原发灶中的阳性表达率分别是74.07%,64.20%,均明显高于在正常胃组织中的表达(P<0.05).ARK5,MMP-14的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P均<0.05).ARK5的表达与MMP-14的表达呈正相关(P<0.05).结论 ARK5和MMP-14异常表达可能共同参与了胃癌的发生、发展过程,促进了胃癌的侵袭和转移,ARK5和MMP-14有望成为检测胃癌恶性程度的参考指标. 崔若凡 张宝刚 姬静 郭文君关键词:胃癌 ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究 被引量:15 2012年 目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性。转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低。ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。 姬静 张宝刚 张伟栋 郭爱华 崔若凡 杨兴杰关键词:MMP-2 MMP-9 MDA-MB-435 小RNA干扰 ARK5、MMP-2和MMP-9在胃癌中的表达及与侵袭转移的关系 被引量:40 2012年 目的:探讨ARK5、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例胃癌组织及20例正常胃组织中ARK5、MMP-2、MMP-9的表达;脂质体介导法将ARK5-siRNA转染入胃癌细胞株SGC-7901(siARK5/SGC7901细胞组),以SCRsiRNA转染组(scr/SGC7901细胞组)作为对照组,Western blot检测转染后ARK5、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力。结果:ARK5、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的阳性表达率分别为68%、76%、68%,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05);ARK5的表达与胃癌的浸润深度、细胞分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05);转染后siARK5/SGC7901细胞组表达ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白水平降低,体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:ARK5、MMP-2和MMP-9在组织中的表达有相关性,ARK5与胃癌的侵袭和转移密切相关,可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。 崔若凡 张宝刚 姬静 郭文君关键词:胃肿瘤 MMP-2 MMP-9 乳腺癌mTOR基因和蛋白表达与侵袭转移的关系 2013年 目的探讨mTORmRNA及编码蛋白在人乳腺浸润性导管癌组中的表达水平及其与侵袭、转移的关系。方法采用原位杂交法和免疫组化(PV-9000)法分别检测65例乳腺浸润性导管癌及32例癌旁正常乳腺组织中mTORmRNA及蛋白水平的表达情况。结果 mTORmR NA在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率(69%,45/65)高于癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率(31%,10/32),差异有统计学意义(P<0.01);mTOR蛋白在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率(68%,44/65)高于癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率(25%,8/32),差异有统计学意义(P<0.01)。同时,mTORmRNA和蛋白表达水平与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移呈显著正相关(P<0.05),且原位杂交和免疫组化两种检测方法的结果呈显著关联(P<0.05)。结论 mTOR信号通路的激活和异常表达,可能与乳腺癌的侵袭和转移有关,且检测mTORmRNA及蛋白表达水平可作为评价乳腺癌预后的重要指标。 刘清华 孙磊 李小龙 刘雨清关键词:免疫组化 原位杂交 Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究 被引量:5 2014年 目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果:胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级)中表达明显高于低级别胶质瘤(WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级)。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%,siGab2的干扰效率为75%。转染后,与SCR/LN-229相比,siARK5/LN-229中ARK5表达降低,siGab2/LN-229中Gab2表达降低,siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少(P<0.01),且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著(P<0.01)。在IGF-1刺激下,siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论:应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低,同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化,提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。 孙磊 刘雨清 李小龙 刘菲 张丽娜 李洪利 张宝刚关键词:胶质瘤 小RNA干扰 siRNA干扰ARK5蛋白表达对U251细胞侵袭潜能影响机制探讨 被引量:2 2014年 目的:探讨siRNA干扰降低腺苷酸活化蛋白激酶5(AMPK-related protein kinase 5,ARK5)表达对U251细胞侵袭潜能的影响及其机制。方法:采用蛋白质印迹法检测U251细胞中ARK5表达。应用siRNA干扰技术转染U251细胞株,并采用蛋白质印迹法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,蛋白质印迹法检测间质细胞来源的YKL-40、N-cadherin、Vimentin蛋白和调节因子Snail、Slug、Twist1和Zeb1的表达。结果:转染ARK5质粒的U251细胞ARK5表达下降。ARK5表达降低的U251细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量为22,U251对照组为41,SCR/U251对照组为42,两两比较,ARK5表达降低的实验组透膜数比两对照组少(P<0.001),同时蛋白质印迹法结果显示,YKL-40、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量降低,与间质转化相关的转录因子仅Snail的表达降低,而转录因子Slug、Twist1和Zeb1表达无明显改变。结论:应用siRNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使U251细胞侵袭转移能力降低,同时YKL-40、N-cadherin和Vimentin蛋白和转录因子Snail的表达量降低,提示ARK5蛋白表达降低可通过调节间质转化影响U251细胞的侵袭。 孙磊 张宝刚 李小龙 刘清华 刘雨清关键词:U251 SIRNA干扰