重庆市卫生局医学科研项目(07-1-003)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王济明黄国飞罗诗樵吕济相更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胆管癌与正常人胆汁蛋白质组学研究被引量：7
- 2009年
- 背景与目的:胆管癌是目前常见的消化道恶性肿瘤,由于大多数患者确诊时疾病已属中晚期,总体5年生存率极低,所以改善预后的关键在于早期诊断。近年来,蛋白质组学的迅猛发展,为检测肿瘤标志物提供了一种新技术。本研究采用蛋白质组学的相关技术,建立胆汁蛋白质组双向电泳图谱,筛选胆管癌患者胆汁和正常人胆汁中的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断胆管癌的肿瘤标志物。方法:收集胆管癌患者和正常人胆汁标本,经脱盐、脱脂纯化处理后提取蛋白,进行二维电泳,应用PDQuest 8.02D图像软件对银离子染色的双向电泳图像进行分析,并对差异表达的蛋白质行质谱鉴定。结果:成功建立胆管癌和正常人胆汁的双向凝胶电泳图谱,其图谱上平均蛋白质点数分别为(352±23)个和(317±26)个。选取其中表达差异超过2倍的蛋白质斑点10个,行质谱分析和数据库检索,鉴定出5种有意义的蛋白质,包括(angiopoienrelated protein 1)、(fibroblast growth factor substrate 2)、(catenin,beta 1)、(kertain,typeⅠ cytoskeletal 16)和(ras-related protein 37)。从功能上分析这些差异蛋白质与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关。结论:蛋白质组学能很好地显示胆管癌患者与正常人胆汁间的差异表达蛋白,研究鉴定的5种差异表达蛋白质可能为研究胆管癌的生物学行为提供新的分子标志物。
- 黄国飞王济明罗诗樵吕济相
- 关键词：胆管癌人胆汁蛋白质组学双向凝胶电泳
- 人胆汁双向凝胶电泳分离技术的建立与优化被引量：2
- 2009年
- 背景:双向凝胶电泳是目前最好的蛋白质分离方法,然而胆汁样品中的盐、脂和蛋白酶对双向凝胶电泳干扰较大,影响电泳图谱的重复性。目的:通过对胆汁样品双向凝胶电泳的几个关键环节的分析,建立起一种适合于有效分离胆汁蛋白质的双向凝胶电泳分离方法。设计、时间及地点:胆汁双向凝胶电泳图谱对照实验,于2008-03/11在重庆市神经病学重点实验室完成。材料:胆汁标本取自于重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,于肝移植过程中从供体中取得。方法:将标本分别按3种不同方法进行处理:①2D-Clean-up试剂盒处理胆汁标本:用裂解液,7mol/L尿素,2mol/L硫脲,质量浓度为0.4g/L的过硫酸铵,65mmol/L二硫苏糖醇,质量浓度为0.2g/L的载体两性电解质溶解沉淀过夜。②在胆汁标本中加入4倍体积的预冷丙酮,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。③在胆汁标本中加入4倍体积的预冷三氯乙酸/丙酮混合液,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。经过一维等电聚焦和二维SDS-PAGE电泳分离人胆汁蛋白质组。将切取的蛋白质点进行脱色,酶解,萃取,冷冻抽干后,进行质谱鉴定。主要观察指标:胆汁双向电泳图谱上蛋白质点数目,位置及重复性的比较。结果:3种方法均能得到理想的一向电泳等电聚焦,与单纯的丙酮沉淀法相比较,但三氯乙酸/丙酮沉淀法损失了较多的中小分子量的蛋白质,因此不适合于胆汁标本的处理。与2D-Cleanup试剂盒处理法相比,丙酮沉淀法纯化胆汁内盐、脂较丰富,去除干扰成分,具有较好的效果,具有成本低廉、操作简便等优势。结论:通过优化胆汁蛋白质提取、上样量和双向电泳重复性检测等步骤,建立了人胆汁双向凝胶电泳的方法,丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结合是获取人胆汁蛋白质组的一种�
- 黄国飞王济明罗诗樵吕济相
- 关键词：人胆汁蛋白质组学双向凝胶电泳
